构建基础医学创新人才培养体系的思考与实践

创新人才的培养是重点高等院校的根本任务之一。本文针对我国高等基础医学教育所存在的问题和面临的挑战,提出探究式、小班化课堂教学改革、三大类课程体系建立、包括科研训练在内的实践教学改革以及基础与临床整合课程体系建立等改革措施,探索现代基础医学教育改革之路,为高素质创新型医学人才体系的建立奠定基础。

推拿灸法配合足底反射疗法治疗运动性腰背肌筋膜炎的效果研究

目的:运动性腰背肌筋膜炎患者采用的局部推拿、灸法和足底反射疗法进行治疗的临床效果展开研究和探讨。方法:本次医学实验研究的对象是从阿坝师专校医院、成都体育学院附属医院和四川省骨科医院抽选2011年8月份至2012年8月份期间,在本院就诊治疗的运动性腰背肌筋膜炎患者共计90例。根据检查的结果确诊运动性腰背肌筋膜炎病症,我们将患者随机分为两个医学实验治疗小组,分别为治疗组:共计患者45例,在常规治疗过程的基础上,主要采用推拿灸法治疗的同时,引入了足底反射疗法。对照组:共计患者45例,在常规治疗过程的基础上,采用推拿灸法治疗为主。结果:通过疗程治疗,治疗组:45例患者,治愈26例,显效11例,有效8例,总有效率100%;对照组:45例患者,治愈19例,显效10例,有效14例,无效5例,总有效率90%。结论:在运动性腰背肌筋膜炎治疗过程中,采用局部推拿配合足底反射疗法,能够有效的提高治疗的总有效率,值得再今后治疗中得到广泛的推广。

电针改善椎基底动脉供血不足和内耳缺血所致前庭功能障碍的实验

目的:观察电针改善家兔椎基底动脉供血不足内耳微循环障碍所致颈源性眩晕的效果,并与氟桂利嗪进行阳性对照。方法:取64只日本大耳兔随机分为对照组、模型组、电针组和氟桂利嗪组4组,每组16只。①造模:200 g／L组织硬化剂-775注射液10 mL注射至模型组、电针组和氟桂利嗪组左侧颈椎横突软组织,建立椎动脉型颈椎病模型,对照组注射生理盐水。②治疗:注射后第6周开始,电针组作双侧“风池”“听宫”“外关”穴电针处理(峰值电压4-6V,刺激频率10 Hz), 氟桂利嗪组以氟桂利嗪1．67 mg／kg进行胃灌注,1次/d,连续14 d,其他两组不干预。③观察指标:平行秋千分别产生±0．17 G、±0．34 G和±0．5 G 直线加速度刺激家兔前庭,测定诱发的眼震电图频率;经颅多普勒检测基底动脉和左、右侧椎动脉收缩期、舒张期和平均血流速度;激光多谱勒血流计检测左侧内耳血流量。结果:37只兔进入结果分析。①眼震电图频率:对照组±0．5 G直线加速度诱发的显著高于±0．17 G(P<0．05)。模型组、氟桂利嗪组3种直线加速度和电针组±0．5 G直线加速度诱发眼震电图频率均显著低于对照组(P<0．05- 0．001)。电针组3种直线加速度和氟桂利嗪组±0．5 G诱发眼震电图频率显著高于模型组(P<0．01-0．001)。②血流速度:模型组左、右侧椎动脉及基底动脉、氟桂利嗪组左、右侧椎动脉的收缩期、舒张期和平均血流速度均较对照组显著减慢(P<0．01-0．001),电针组左侧椎动脉和氟桂利嗪组基底动脉的收缩期血流速度与对照组无显著差异(P>0．05),电针组左和右侧椎动脉的舒张期血流速度显著快于氟桂利嗪组(P<0．05)。③内耳血流量:模型组和氟桂利嗪组显著低于对照组(P<0．001,0．05),电针组和氟桂利嗪组显著高于模型组(P<0．001,P<0．01),电针组与对照组无差异(P>0．05)。结论:电针可改善椎基底动脉供血不足,并通过增强内耳微循环局部调节改善内耳血供和前庭-眼反射,恢复前庭功能。其效应优于氟桂利嗪。

骨质疏松骨折愈合中软骨细胞凋亡与血管内皮生长因子的表达

目的 :探讨骨质疏松骨折愈合过程中血管内皮生长因子 (VEGF)的表达变化及其与软骨细胞凋亡发生的关系。方法 :建立SD大鼠骨质疏松股骨骨折模型 ,分别于骨折后 1、2、3、4w取材进行HE染色及VEGF免疫组化染色 ,并用TUNEL法和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果 :在骨折后第 1w ,间充质细胞未见VEGF表达 ;第 2、3w时软骨细胞VEGF反应呈强阳性 ;第 4w其表达强度开始下降。骨折愈合的不同时期都有软骨细胞凋亡的发生 ,第 3w表现最为明显。结论 :VEGF在骨折的第 2w表达最强 ,到第 3、4w开始下降。软骨细胞的凋亡主要发生在骨折后的第 3w。VEGF可能直接与软骨细胞凋亡发生有关。

肝型脂肪酸结合蛋白及血管内皮生长因子在原发性肝癌中的表达以及相互关系

目的研究肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)与血管内皮生长因子(VEGF)在原发性肝癌中的表达变化,探讨二者在原发性肝癌发生、发展中的作用及相互关系。方法采用RT-PCR及免疫组织化学技术,检测61例手术切除的病人肝癌组织及癌旁组织中L-FABP、VEGF的mRNA及蛋白质的表达水平,并做统计学处理。结果RT-PCR结果显示,肝癌L-FABP以及VEGF在mRNA表达水平明显高于癌旁组织(L-FABP:0.97±0.12,0.83±0.14,t=5.21,P<0.05;VEGF:0.92±0.11,0.59±0.15,t=11.79,P<0.05)。免疫组化染色发现,L-FABP阳性反应物主要存在于细胞浆,肝癌组阳性反应物灰度值明显高于癌旁对照组(肝癌组:92.73±7.67,癌旁对照组:82.83±6.90,t=7.44,P<0.05),阳性细胞计数肝癌组高于癌旁对照组(肝癌组:92.18±4.44,癌旁对照组:84.52±6.43,t=5.94,P<0.05);肝癌细胞胞浆有VEGF阳性反应物,在癌旁组织细胞则偶见VEGF阳性反应物,差异有显著性(肝癌组:88.69±5.56,癌旁对照组:77.61±5.93,t=8.72,P<0.05)。相关性分析表明L-FABP以及VEGF在肝癌组织与癌旁组织中在mRNA和蛋白质水平上均有正相关性(P<0.05)。结论L-FABP、VEGF基因以及蛋白质在肝癌组织中表达均显著上调,并且二者具有正相关性,我们推测L-FABP在获取更多的脂肪酸的同时可以促进血管的增生,进而促进了肝癌的发展。

人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定

为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.

重复经颅磁刺激(rTMS)对大鼠抑郁症的治疗作用及其机制的研究

目的通过大鼠的行为学及海马β1和β2肾上腺素受体m RNA表达,研究重复经颅磁刺激(rT-M S)对大鼠抑郁症的治疗作用及其机制。方法通过比较抑郁症和非抑郁症大鼠在强迫游泳实验中的表现探讨大鼠的行为学变化;通过RT-PCR半定量法分析其海马β1和β2肾上腺素受体m RNA含量的变化。结果抑郁症大鼠海马的β1和β2肾上腺素受体m RNA表达增加;rTM S能够缩短抑郁症大鼠在强迫游泳实验中的悬浮时间,并减少其海马β1和β2肾上腺素受体m RNA的表达。结论rTM S对抑郁症有明显的治疗作用,且作用机制与海马β1和β2肾上腺素受体表达减少有关。

节律基因Period2对肿瘤细胞生长及放射敏感性的影响

目的探讨Period2(Per2)基因对细胞生长及放射敏感性的影响。方法体外培养C6神经胶质瘤细胞(C6g liom a ce lls),使用脂质体包裹法将Per2表达质粒(pcDNA3.1-Per2)转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的C6细胞在正常情况下和γ射线照射后的凋亡、生长。结果未经γ射线照射的Per2阳性表达的C6细胞较对照组细胞增殖减慢、凋亡率增加,但γ射线照射后的较对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少。结论节律基因Per2过表达会增加肿瘤细胞的凋亡,但在射线照射情况下会降低肿瘤细胞对射线的敏感性。

近日节律基因Clock对雄性小鼠生殖功能的影响

目的通过干扰小鼠睾丸节律基因Clock的表达,研究Clock对雄性小鼠生殖能力的影响。方法通过RNA干扰技术干扰雄性小鼠睾丸节律基因Clock的表达,以Western blot检测干扰效果,研究干扰Clock表达后对小鼠体内胎仔数和精子数量、精子活力、体外受精率的影响。结果Clock干扰质粒使小鼠睾丸Clock蛋白的表达明显下调。在体内实验不但影响了雄性小鼠的胎仔数,而且其相对应的精子体外受精能力也明显下降。结论节律基因Clock与雄性小鼠的生殖功能有密切的关系。

节律基因mPeriod2过表达对体外Lewis肺癌细胞γ射线敏感性的影响

目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠Lew is肺癌细胞(LLCs)60Coγ-射线放射敏感性的影响。方法采用脂质体介导方法将mPer2基因转染至LLC细胞,以空白组及空载体质粒pcD-NA3.1为对照,采用RT-PCR及流式细胞术检测mPer2基因在LLC细胞中的表达,给予60Coγ-射线4Gy单次照射后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化、细胞集落形成实验检测细胞增殖及存活情况。结果60Coγ-射线照射后,与转染空载体质粒组及空白组比较,转染mPer2基因细胞表现为G2/M期阻滞,凋亡率下降(contro l:8.10±0.03;pcDNA3.1-vector:11.20±0.07;pcDNA3.1-mPer2:4.40±0.02;P<0.05),细胞克隆形成增加(contro l:14%;pcDNA3.1-vec-tor:11%;pcDNA3.1-mPer2:32%;P<0.01)及PCNA阳性表达增加(contro l:+,pcDNA3.1-vector:+,pcDNA3.1-mPer2:+++,P<0.05)。结论节律基因mPer2过表达使60Coγ-射线照射的小鼠Lew is肺癌细胞凋亡下降,细胞增殖明显,降低了该细胞对放射损伤的敏感性。

黄芪体外作用对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌SCF的影响

目的 研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子 (SCF)的影响。方法 在贫血小鼠骨髓基质细胞培养体系中 ,分别加入 0 .1mL不同浓度的AMI(终浓度分别为 4 0mg/L、4 0 0mg/L)作为药物 1组、药物 2组 ,对照组加入等量的IMDM培养液 ,检测各实验组培养体系中骨髓成纤维细胞集落 (CFU F)数。同时 ,分别收集培养上清液 ,透析浓缩成冻干粉 ,经IMDM液稀释后作为条件培养液 ,分别加入到高增殖潜能的集落形成细胞 (HPP CFC)培养体系中 ,检测各实验组培养上清液中所含SCF的水平。结果 与对照组相比较 ,药物组的CFU F数及骨髓基质细胞条件培养液 (BMSCM )中SCF的水平均明显升高。结论一定浓度的AMI可促进贫血小鼠骨髓CFU F增殖 。

大黄素对急性坏死性胰腺炎大鼠肺炎性细胞因子的作用(英文)

目的研究大黄素(1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌)是否能减轻急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺组织的炎症反应。方法通过胰腺被膜下注射3%牛磺胆酸钠制造大鼠急性坏死性胰腺炎模型,大黄素以灌肠的方式给药,检测在急性坏死性胰腺炎给药后3、6和12h的血浆淀粉酶变化,用半定量RT-PCR方法检测大鼠肺组织IL-1β,IL-6和IL-10的表达,免疫组化方法观察肺内IL-1β转化酶(ICE,又称caspase-1)的改变。结果在未造模组血浆淀粉酶(1611.20±218.72)IU/L。在造模后3、6和12h,急性坏死性胰腺炎模型组(未用大黄素治疗组)血浆淀粉酶分别为(1981.40±56.81)IU/L,(3287.40±612.37)IU/L和(4914.60±746.82)IU/L,与未造模组比较有显著性差异(P<0.05),在给予大黄素治疗后血浆淀粉酶3、6和12h分别为(1617.20±136.80)IU/L,(2323.40±318.19)IU/L和(2670.20±390.03)IU/L。RT-PCR表明给药组与未给药组比较IL-1β和IL-6mRNA的表达随着时间的改变而降低,IL-10在mRNA上表达增加。免疫组化显示IL-1β转化酶(ICE)在各时间点给药组与未给药组比较其表达减少。结论大黄素对大鼠急性坏死性胰腺炎肺组织炎症反应有一定的抗炎作用,其抗炎作用的机制可能与大黄素下调IL-1β和IL-6mRNA的表达和上调IL-10mRNA的表达有关。

喹诺酮类药物对豚鼠心电图的影响

目的 观察比较环丙沙星、左氧氟沙星和司帕沙星的心脏毒性。方法 记录腹腔给药后豚鼠心电图 ,探讨对心电图各项指标的影响。结果 环丙沙星、左氧氟沙星及司帕沙星均能引起豚鼠心电图异常 ,出现 QT间期显著延长、室性早搏、房室传导阻滞等 ,而其他指标未见显著改变。在同等剂量下 ,左氧氟沙星对心电图影响最小 ,环丙沙星与左氧氟沙星接近 ,而司帕沙星而对心电图影响最大。结论 环丙沙星、左氧氟沙星及司帕沙星均可引起豚鼠心电图改变 ,但左氧氟沙星及环丙沙星的作用低于司帕沙星。

不同光暗循环下小鼠自发活动生物节律周期的频率分析

目的探讨不同光-暗循环条件下小鼠的自发性活动是否存在3.5d节律、7d节律以及10d节律。方法以小鼠为动物模型,排除社会活动因素对生物节律的影响,采用红外线检测系统检测小鼠自发性活动,对不同光-暗循环作用下小鼠自发活动的多频率生物节律进行了研究。结果用余弦法的频谱分析发现:在10h光照(L)/10h黑暗(D)环境下,小鼠的自发活动存在明显的τ=20h的近日节律和τ=10h的近半日节律(P<0.001),以及较弱的近7d节律和近3.5d节律,P<0.01;在12h(L)/12h(D)环境下,存在很强的24h为周期的近日节律和12h为周期的近半日节律,P<0.001,未见近7d节律存在;在14h(L)/14h(D)环境下,以τ=28h为周期的近日节律和τ=14h的近半日节律表现明显(P<0.001),同时亦有较弱的近7d节律。上述情况下,小鼠均未发现10日节律。结论生物体存在多种频率的生物节律,其节律的特征受到光-暗循环的影响。

PCR介导嗜肺军团菌疫苗候选基因lvgA和Hsp60的融合及其在大肠杆菌中表达的初步研究

目的采用PCR法进行嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的拼接融合,克隆并检测该融合基因在原核系统中表达情况,为进一步研究其免疫性能作必要的准备。方法采用重组聚合酶链反应,设计引物首先分别从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得待融合端互补的军团菌毒力基因(lvgA)和热休克蛋白60基因(Hsp60),经琼脂糖电泳纯化回收,再以适量lvgA和Hsp60为模板变性、退火、重叠延伸,实现二基因的PCR水平融合,随后采用外引物进行新一轮扩增,扩得足量lvgA/Hsp60融合基因的PCR产物,继而将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒,转化宿主菌BL21,经PCR、酶切及测序鉴定后,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析等鉴定。结果扩增出了约2292bp的lvgA/Hsp60融合基因,构建了原核表达重组质粒pGlvgA/Hsp60,并检测到Mr约117000的GST-lvgA-Hsp60融合蛋白表达条带。结论采用PCR法实现了嗜肺军团菌lvgA和Hsp60二基因的融合,构建了其原核表达重组质粒,并使该融合蛋白在原核系统中得到了有效的表达,为进一步研究该融合基因的免疫学特性奠定了基础.

冠心病患者同型半胱氨酸与PPARα γ mRNA、蛋白表达相关性分析

目的探讨冠心病患者同型半胱氨酸与过氧化体增殖剂激活的受体的关系。方法采用高效液相色谱法测定287例冠心病患者和50例健康体检者(健康对照组)空腹血清Hcy的水平,根据测量结果将冠心病患者Hcy的水平分为冠心病Hcy正常、轻、中、重组,实时RT-PCR、westernblot检测各组血浆单核细胞PPARα、PPARγ mRNA和蛋白表达。结果冠心病轻、中、重组患者的PPARα、PPARγ mRNA、蛋白表达明显低于健康对照组(P<0.05)和冠心病Hcy正常组(P<0.05),并与Hcy呈明显负相关。结论冠心病患者Hcy较高而PPARα、PPARγ等的表达较低,提示高Hcy血症通过某种方式抑制PPARα、PPARγ等的表达,是其导致动脉粥样硬化的机制之一。

层粘连蛋白受体Ⅰ与hPeriod1相互作用的研究

目的寻找与节律蛋白hPeriod1(hPer1)相互作用的蛋白,并对筛选出的层粘连蛋白受体Ⅰ(Lamr1)在节律系统中的功能作初步研究。方法分别构建pGAD rec脑/cDNA文库和pGBKT7/hPer1bH LH-PAS重组诱饵蛋白质粒,酵母双杂交筛选下丘脑里与hPer1相互作用的蛋白。利用RT-PCR技术检测新蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织中的表达及在SH-SY5Y细胞中的节律性质。通过RNA干扰技术研究新蛋白与hPer1的关系。结果通过酵母双杂交筛选,证明Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用。该蛋白在脑、肺、心、肝、肾组织广泛表达,灰度比较显示经马血清诱导后的SH-SY5Y细胞的hPer1表达呈现近日节律,而Lamr1表达无节律变化。RNA干扰显示hPer1表达下调不影响Lamr1的表达。结论Lamr1能与hPer1蛋白发生相互作用,但其表达在RNA水平无节律变化。Lamr1参与细胞的黏附、转移和侵袭。其前体蛋白作为核蛋白参与细胞蛋白的合成。Lamr1可能参与hPer1相关的生物节律系统的信号传出。

小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究

目的研究小鼠节律基因Period2(Per2)对小鼠乳腺癌细胞(EMT6)的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法将pcDNA3.1(+)-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3.1(+)入细胞的对照组。以RT-PCR、Westernblot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达;采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用;通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果小鼠节律基因Per2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡率增加。结论本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。

嗜肺军团菌flaA基因DNA疫苗的构建及其免疫保护性研究

目的构建flaA基因的DNA疫苗,观察其对嗜肺军团菌感染的免疫保护作用。方法用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-flaA上切下flaA基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),重组子经限制性酶切分析、PCR鉴定正确后,命名为pcDNA3.1-flaA。将18只BALB/c雌性小鼠随机分为3组,pcDNA3.1-flaA实验组肌肉接种pcDNA3.1-flaA质粒100μg,2w后加强免疫一次,2个对照组分别肌肉注射等体积的生理盐水和100μg空质粒,加强免疫后3w小鼠鼻腔滴注嗜肺军团菌Lp1菌液进行攻击感染,感染4w后,检查小鼠肺组织带菌量,观察肺组织病理形态学改变。结果成功构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1-flaA,攻击感染实验表明,pcDNA3.1-flaA免疫组肺组织带菌量显著少于生理盐水对照组和空质粒对照组(P<0.05),且肺组织病理变化症状较pcDNA3.1对照组和生理盐水对照组的肺轻微。结论由flaA基因构建的嗜肺军团菌DNA疫苗能诱导小鼠产生保护性免疫。

结核分枝杆菌RD1区PPE68/GST融合蛋白表达质粒的构建及表达

目的:构建结核分枝杆菌PPE68/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌JM109中诱导表达.方法:利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Rv3873基因,并将其定向克隆pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并转化E.coliJM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.采用GST蛋白纯化试剂盒进行重组融合蛋白纯化,SDS-PAGE和WesternBlot鉴定重组表达产物.结果:成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并表达出约Mr63000大小的PPE68/GST融合蛋白,占总菌体的40%.WesternBlot检测该融合蛋白能和结核患者多价抗血清发生反应.结论:成功地构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873,并在大肠杆菌得到表达.