循证医学在疾病防治中的应用

随着科学技术的飞速发展,在疾病的防治中,新药和新的防治措施层出不穷,如何在这浩如烟海的世界中,迅速寻找到最新最佳的治疗证据,如何在疾病的防治中实践循证医学,是我们临床医生面临的新问题。本文结合具体实例就在疾病的防治中如何实践循证医学作一简单介绍。

CXCR4-siRNA逆转录病毒载体对宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用

对人宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用。方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering摘要目的:构建针对趋化因子受体CXCR4的RNA干扰逆转录病毒载体,检测由逆转录病毒介导的RNA干扰RNA,siRNA)片段,将其插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体质粒pSOS,测序正确后进行重组,转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清用其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测其对Caski细胞CXCR4表达的抑制作用。结果:成功构建pSOS-siCXCR4逆转录病毒载体,筛选出高效抑制序列,与对照组比较,在Caski细胞的mRNA水平,CXCR4-siRNA在24h、48h和72h对CXCR4mRNA表达的抑制率分别为29.9%、56.8%和62.8%,而在蛋白水平对CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%、49.6%和62.9%。结论:pSOS-HUS-siCXCR4干扰载体可以有效抑制Caski细胞中CXCR4表达。

Ru-486、安宫黄体酮、环孢菌素、维拉帕米对非P-g介导的卵巢癌耐顺铂细胞株COC1／DDP耐药性的逆转

目的在同一实验系统中比较Ru-486、MPA、VP、CsA对非P-g介导的卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP耐药性的逆转作用并对其作用机制进行探讨,为临床克服耐药提供参考依据。方法采用MTT法从细胞代谢,DNA凝胶电泳从细胞凋亡方面系统观察比较DDP、Ru-486、MPA、VP、CsA 5种药物对卵巢癌多药耐药细胞系COC1/DDP的影响及相互关系,检测上述5种药物与COC1/DDP作用时细胞内GSH-ST和GSH-Px活性的变化,并采用westernblotting以Bcl-2抗体为分子探针对上述5种药物与COC1/DDP作用时细胞内Bcl-2基因的表达进行测定对其逆转机制进行探讨。结果1)Ru-486、CsA、MPA对COC1/DDP有直接抑制作用,其抑制率随浓度增高进行性升高,而VP对COC1/DDP没有直接抑制作用。和DDP联用时,Ru-486、MPA、VP、CsA都能显著增强COC1/DDP对DDP的敏感性,达到一定浓度后,可以完全逆转COC1/DDP对DDP的耐药性。这种逆转是通过抑制细胞代谢、诱导细胞凋亡的结果。2)单纯2.5μg/ml的DDP能使GSH-Px及GST活力上升,除VP外,Ru-486等药物可降低GSH-Px和GST活力,与DDP联用时亦如此。提示,Ru-486、CsA、MPA可以通过抑制GSH转移酶系统阻止对细胞损伤的修复而达到对耐药性的逆转。3)单独的DDP、Ru--486等药物非但对Bcl-2的表达没有抑制作用,反而促进了其表达,以MPA最甚。与DDP联用时,却出现了一个有趣的现象,即可以抑制Bcl-2的表达,Ru-486与DDP联用时Bcl-2的表达几乎完全被阻截。结论:VP、Ru-486、CsA和MPA对卵巢癌多药耐药细胞系COC1/DDP的耐药性有确切逆转作用。其逆转机制可能与降低GSH转移酶系统活性有关。当与DDP联用时可以通过降低Bcl-2蛋白表达来逆转耐药。

逆转录病毒介导的siRNA对宫颈癌细胞CXCR4表达的抑制及对侵袭能力的影响

目的:观察逆转录病毒介导RNA干扰抑制宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的效率。方法:人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,装入带有绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒载体pSOS,先转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清,再将其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达受抑的情况,并通过Transwells小室检测对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果:成功构建pSOS-CXCR4载体,并发现在24h,48h和72h,CXCR4mRNA的抑制率分别为29.9%,56.8%和62.8%,CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%,49.6%和62.9%。pSOS-CXCR4对Caski细胞的侵袭能力的抑制率为57.91%。结论:逆转录病毒介导RNA干扰能有效抑制宫颈癌细胞CXCR4表达并能降低癌细胞的侵润能力。

1080例不规则阴道流血的临床病理观察

目的 :分析不规则阴道流血的原因 ,探索规律为临床医生提供参考。方法 :对我院 10年中的 10 80例宫内膜标本的病理、临床资料进行回顾性分析。结果 :不规则阴道流血的主要病理原因为功能性子宫出血 74 2例 ,占 6 8 70 %。年龄主要分布在 4 4岁左右。结论 :引起不规则阴道流血的病理诊断依次为功血、妊振有关疾病、正常内膜、炎症、肿瘤等。

增殖细胞核抗原及肿瘤转移抑制基因nm23在外阴鳞状细胞癌的表达及其临床意义

目的通过检测增殖细胞核抗原(PCNA)及nm23在不同外阴组织中的表达情况,了解PCNA指数及nm23蛋白表达与外阴鳞状细胞癌临床参数的关系及其临床意义。方法采用ABC免疫组织化学方法,对正常外阴上皮、VIN及外阴鳞状细胞癌组织中PCNA及nm23的表达进行检测。结果 nm23蛋白均在正常外阴上皮、VIN及外阴鳞状细胞癌中表达;外阴鳞状细胞癌较VIN及正常外阴上皮显著降低(P<0.05),不同级别VINnm23蛋白阳性值差异无统计学意义(P>0.05);VINⅡ、Ⅲnm23蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。高分化癌与中分化癌及高分化癌与低分化癌之间nm23蛋白表达的阳性值差异有统计学意义(P<0.05),中分化癌与低分化癌nm23蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05);淋巴结有转移者,原发灶nm23阳性值与转移灶nm23蛋白阳性值差异无统计学意义(P>0.05);但淋巴结无转移者原发灶与淋巴结有转移者原发灶nm23蛋白阳性值差异有统计学意义(P<0.05),nm23蛋白的表达与临床分期及预后有关,而与绝经状态及年龄无关。对PCNA在不同外阴组织表达进行检测表明正常外阴上皮、VIN及外阴鳞状细胞癌PCNA指数差异有统计学意义(P<0.05),PCNA指数随VIN级别的增加而升高,VINⅠ与ⅢPCNA指数差异有统计学意义(P<0.05),而VINⅠ与Ⅱ及VINⅡ与ⅢPCNA指数差异无统计学意义(P>0.05);外阴鳞状细胞癌PCNA指数随着组织学分级的增加而升高,其中Ⅰ、Ⅱ级PCNA指数差异无统计学意义(P>0.05);而Ⅲ级与Ⅰ、Ⅱ级PCNA指数差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结有转移者原发灶PCNA指数较淋巴结无转移者原发灶PCNA指数明显升高,但两者差异无统计学意义(P>0.05);在淋巴结有转移患者PCNA指数在原发灶与转移灶之间差异有统计学意义(P<0.05),转移灶较原发灶高。PCNA指数随着外阴鳞状细胞癌临床期别增加而升高(P<0.05),Ⅰ期与Ⅳ期PCNA指数差异有统计学意义(P<0.05),年龄及绝经状态对PCNA指数无影响,死亡患者nm23蛋白阳性值低,PCNA指数高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VIN和外阴鳞状细胞癌PCNA指数较正常外阴上皮高而nm23蛋白表达降低,在外阴鳞状细胞癌中,随着组织学分级增加,PCNA有升高趋势,nm23蛋白表达有下降趋势,反之亦然。Nm23蛋白的表达与肿瘤转移呈负相关,PCNA指数与肿瘤转移呈正相关,故对于PCNA指数高,而nm23蛋白表达阴性的未转移病例应加强随访,密切注意病情变化。