重建端粒酶活性延长ptsA58H质粒转染的人胚肌腱细胞寿命

目的探讨以重建细胞端粒酶活性,达到延长经ptsA58H质粒转化的人胚肌腱细胞系(THETC)寿命的可行性。方法构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)cDNA的质粒pGRN145,体外转染THETC;通过形态学观察、平板克隆形成率检测、软琼脂培养、不同培养条件下细胞生长曲线的测定,免疫组化法染色分析胶原分泌类型,hTERTmRNA表达及端粒重复序列扩增-PCR法检测细胞端粒酶活性等,对转染前后的细胞生物学特性进行比较。结果经pGRN145质粒体外转染的THETC(telT)有端粒酶活性表达,并继续保持旺盛的增殖能力,寿命延长。telT保持原有的温度依赖性及血清营养依赖性生长的特点,并正常分泌I型胶原,无恶性转化趋向。结论重建端粒酶活性可以延长THETC寿命,为建立组织工程标准细胞系提供了新的实验手段。

人端粒酶逆转录酶真核表达质粒转染人成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究

目的 分析人端粒酶逆转录酶 (h TERT)真核表达质粒 p GRN14 5转染人成纤维细胞的生物学特性。方法 体外分离培养小儿包皮成纤维细胞 ,脂质体法将构建的 p GRN14 5转染人成纤维细胞 ,经潮霉素 B筛选 ,扩增培养阳性克隆。 RT- PCR法、TRAP- PCR法分析细胞端粒酶活性。流式细胞术检测细胞增殖周期及细胞凋亡率 ,对转染后细胞行染色体核型分析及免疫组织化学法检测胶原分泌能力。结果 转染后培养的人成纤维细胞形态与转染前相比无明显改变 ,转染细胞稳定地表达端粒酶活性 ,流式细胞术分析转染前后成纤维细胞的增殖周期无明显改变 ,细胞凋亡率较转染前降低。经 p GRN14 5转染的人成纤维细胞保持正常的二倍体核型 ,具有正常分泌 、 型胶原的能力。结论 p GRN14 5转染的人成纤维细胞稳定地表达端粒酶活性 ,细胞寿命明显延长。

组织工程化组织的低温冷冻保存研究

低温冷冻保存是活体组织长期保存的一种有效方法,主要通过降低细胞的代谢率来起到保护作用,冻伤是低温保护最大的负反应,其原因可能为冰晶所致的机械性损伤和渗透性损伤,组织与细胞冻伤的防治是低温冷冻保存成功的关键,目前研究主要集中在降温与复温速率的选择、防冻剂的应用和玻璃化保存等3方面。组织工程化组织是功能细胞与支架材料体外构建的具有生命的组织,同样实用于低温冷冻保存,已证实经过低温保存的组织工程皮肤具有良好的效果,但其他组织工程组织在低温保存方面的研究还需进一步深入,特别是防冻剂配方组合和防冻剂含量、降温和复温程序与速率以及降温所至温度的选择等。

细胞增殖寿命的延长研究进展

细胞具有增殖能力的关键是能顺利通过细胞周期的各个控制点.

组织工程研究与开发中的冻存技术

综述了有关组织工程种子细胞、支架材料和工程化组织的冷冻保存问题。对冻存技术在组织工程研究和开发中的重要作用进行了阐述。指出低温保存可能是长时间保存有活性的组织工程产品的有效方法之一。组织工程种子细胞采用低温冷冻保存 ;组织工程支架材料用冷冻干燥保存 ;工程化组织的保存采用玻璃化冷冻保存方法。

生物衍生骨在骨组织工程研究中的应用

支架材料的选取是骨组织工程研究的关键 ,生物衍生骨具有较好的生物相容性和材料界面 ,三维立体孔隙 -网架合理 ,可塑性强 ,可降解 ,并具备一定的力学强度 ,兼备良好的骨传导及一定的骨诱导能力。可作为种子细胞的支架材料应用于骨组织工程研究。

尺骨假关节成形术腕骨应力的实验研究

目的 :了解尺骨假关节成形术对腕骨应力的影响。方法 :用新鲜尸体上肢标本 9只 ,于头状骨、舟骨、月骨、三角骨背侧骨表面粘贴应变片 ,在尺骨完整和尺骨假关节成形术后 ,在前臂中立位 ,旋前和旋后 4 0°位 ,应用动态加载方法研究其应力变化。结果 :在尺骨完整和尺骨假关节成形术后 ,腕骨应力各不相同。尺骨完整时 ,在旋前位和旋后位 ,应力由大到小的顺序依次是月骨、头状骨、舟骨和三角骨 ;在中立位则是月骨、头状骨、三角骨、舟骨。尺骨假关节成形术后 ,月骨应力降低 ,低于头状骨。头状骨、舟骨和三角骨的应力增加。结论 :尺骨假关节成形术在改善前臂旋转功能和稳定腕关节的同时 ,改变了腕骨的应力状态 ,可能对腕关节造成不利影响。

含缓释生物活性因子的组织工程骨异位成骨

目的研究含重组人骨形态发生蛋白/转移生长因子-β(recombinanthumanbonemorphogeneticprotein/transforminggrowthfactor-β,rhBMP/TGF-β)和WO-1两种生物活性因子的缓释体构建组织工程骨的异位成骨能力。方法以猪部分脱钙骨为支架材料,用真空负压吸附法将rhBMP/TGF-β和WO-1分别涂层在支架材料上,然后再用聚乳酸(polylacticacid,PLA)涂层,制成缓释体。设计单纯材料组(A组),单纯材料复合成骨细胞(B组),含rhBMP/TGF-β为缓释体1(C组)、C组复合成骨细胞(D组)、含WO-1为缓释体2(E组)、E组复合成骨细胞(F组)6组,分别植入36只新西兰兔双后肢,每组6只。术后2、4、6、8周进行组织学、组织化学及生物化学检测,并进行统计学处理。结果在观察时限内,A组无成骨现象,B、D、F组成骨评分显著优于C、E组(P<0.05),C、E组的成骨活动明显延迟,D、F组成骨的质和量较B组提前2周,较C、E组提前4周。C、E组间差异无显著性。新增钙含量B、D、F组显著优于A、C、E组(P<0.05);A、C、E组钙含量递减幅度逐渐减少。结论含生物活性因子1、2的两种缓释体异位诱导成骨出现时间较复合成骨细胞后的成骨活性显著延迟,单纯材料无异位成骨能力。

组织工程化产品与玻璃化技术的基础及其应用

玻璃化是冷冻生物学中一项简单、快速、而有效的保存有生命的细胞、组织和器官的方法。综合大量的有关文献,介绍玻璃化的产生和发展;玻璃化溶液的成分及组成;影响玻璃化保存的因素;玻璃化的优缺点;玻璃化在细胞保存方面的应用,在组织保存方面的应用及其在器官保存方面的应用。提出了在组织工程人工化产品的保存目前尚未见文献报道,然而组织工程化产品与正常组织比较有其特殊性,需要深入研究。

工程化组织动物体内植入的生物力学测试

工程化组织逐渐成为修复病损组织最具挑战性的新型替代材料。这种材料具有生命活性,植入体内后被降解吸收的同时,可再生组织,从而修复组织缺损,达到牢固的自体组织愈合并重建功能。在研究工程化组织植入体内愈合的过程中,检测植入的工程化组织的生物力学特性是考察其愈合和修复效果的重要方面。本文介绍了工程化组织植入动物体内生物力学检测的样本制备及保存、基本试验方法、近似试验方法和有关对实验结果的影响因素,为工程化组织的体内检测提供重要参考。

从实验研究到临床应用

'组织工程学'是加世纪80年代后期提出来的新概念,其基本内涵是用活的细胞与可降解支架材料复合,在体外构建成为有生命的种植体,植人体内修复组织缺损,重建功能,达到治疗疾病、减少伤残、改善生活质量的目的.它提出了'体外复制生命'的新思想,标志着'生物科技时代的到来',是'一场意义深远的医学革命',使生命科学进入了'再生医学的新时代'.不仅具有重要科学意义,极好的社会效益,更具有极大的潜在经济效益.因此这一概念一经提出,很快就受到世界各国政府、科学家和企业家的高度重视,也成为世界各国科学研究的前沿及热点.我国政府也极为重视组织工程学研究,国家自然科学基金委员会(简称基金委)具体组织领导了组织工程学的基础研究工作,为推动我国组织工程学研究赶超国际先进水平起到十分重要的导向作用.

不同灭菌法对组织工程支架降解性和力学特性的影响

目的 研究不同灭菌方法对组织工程聚合物支架的灭菌效果以及灭菌处理对聚合物支架降解性和力学特性的影响。方法 选择聚合物支架PGA编织网和PLGA纤维 ,经环氧乙烷、紫外线、75 %酒精浸泡和γ射线照射 4种方法灭菌后 ,用细菌培养检测灭菌效果 ;用粘度法测定聚合物粘度 ,以观察聚合物的降解性 ;用拉伸实验测定聚合物支架的力学特性。结果 经 4种方法灭菌后 ,聚合物支架PGA编织网细菌检测均为阴性 ,都可达到灭菌目的。辐射剂量为 15kGy的γ射线照射和紫外线照射灭菌都可导致PLGA粘度下降 ,且均具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,即这两种灭菌方法使PLGA的降解明显 ;相反 ,75 %酒精和环氧乙烷灭菌对PL GA粘度下降的影响没有显著性意义 (P >0 .0 5 ) ,即降解不明显。各种灭菌方法处理后支架的断裂伸长率差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;经 15kGy的γ射线照射和紫外线灭菌后 ,支架的最大载荷、断裂能量及抗拉强度均降低 ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;经环氧乙烷和酒精浸泡灭菌方法处理的支架其最大载荷、断裂能量、抗拉强度均无明显改变 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 环氧乙烷和酒精浸泡灭菌对支架降解性和力学特性影响均较小 ,是可降解聚合物支架较理想的灭菌方法。