成体间充质干细胞在再生医学领域中的应用前景

1再生医学基本概念再生医学狭义而言是指缺损器官的修复替代和再生,广义而言不仅仅是缺损器官,包括一切因外伤疾病衰老而导致的损伤组织的内源和外源性的修复与再生。利用生命科学、材料科学、计算机和工程技术等学科的原料和方法,或治疗修复功能障碍,或替代再生人体的缺损器官,以提升生命及生活的质量,这是我们所理解的再生医学的含义。

铜调控低氧诱导因子1转录活性的研究进展

低氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)是由α亚基(HIF-1α)和β亚基(HIF1β)组成的异源二聚体转录因子,在低氧情况下调控细胞组织进行血管新生等对低氧环境的反应性活动,使细胞组织适应低氧环境,是组织中调控氧稳态的关键因子。在低氧情况下,HIF-1特异性的促进一系列血管新生相关因子的表达,这一过程需要微量元素铜的参与。铜对于这一过程中HIF-1转录复合物形成及其与DNA结合都是必须的。但是当组织长期处于缺氧/低氧的环境中时,铜从组织中流失,从而导致了HIF-1调控的这些血管新生相关因子的表达受到抑制,组织的血管新生受到抑制。因此对铜特异性调控HIF-1转录活性的深入理解能够帮助我们深入理解缺血缺氧性疾病,从而为治疗缺血缺氧性疾病提供新的思路。

雾化吸入甘草酸减轻博莱霉素所致小鼠肺纤维化的机制研究

目的研究雾化吸入甘草酸(GA)对博莱霉素所致小鼠肺纤维化的保护作用及机制。方法 SPF级雄性昆明小鼠90只随机分成6组:对照组、模型组、GA_(250)灌胃(IA)组、GA_(12)组、GA_(24)组及布地奈德雾化(AI)组,每组15只。模型组及各给药组予以5 mg/kg的博莱霉素溶液气管滴注,复制小鼠肺纤维化模型。24 h后GA_(250)灌胃组按250 mg/kg的剂量以GA溶液灌胃,GA_(12)及GA_(24)组分别给予12和24 mg/ml剂量的GA溶液4 ml雾化吸入;布地奈德组雾化吸入0.25 mg/ml的布地奈德混悬液4 ml;对照组和模型组分别雾化等量的生理盐水,各组每天雾化1次,连续21 d。第7、14和21天,各组随机处死5只小鼠,作HE、Masson染色,评价肺组织炎症及纤维化程度;血清HYP及肺组织IL-6含量检测胶原水平及炎症因子;Western blot检测小鼠肺组织IL-6、IL-17、p-Smad2及TGF-β_1蛋白表达水平。结果 IL-6表达在复制模型后第7天升高后逐渐降低,而IL-17表达逐步升高,与其相对应TGF-β_1、p-Smad2表达也逐步升高。GA_(12)和GA_(24)组IL-17、TGF-β_1及p-Smad2水平降低,优于AI和IA组。结论雾化吸入GA可能通过抑制肺纤维化中IL-17/TGF-β/Smads通路的表达来抑制肺纤维化。

长链非编码RNA Dnm3os在心肌成纤维细胞活化中的作用研究

目的长链非编码RNA Dnm3os在肌腱周围组织纤维化、肝纤维化和肺纤维化中发挥了重要作用,但其是否参与心肌纤维化过程,目前尚不清楚。探索Dnm3os在心肌成纤维细胞活化过程的作用及其机制,为其在治疗心肌纤维化的潜在应用提供实验依据。方法通过胸主动脉缩窄术(TAC)建立压力超负荷所致的小鼠心肌肥厚/纤维化模型。

LncRNA Gm29233通过miR-221/222-TGFBR1轴调节心肌纤维化的研究

目的 mRNA、非编码RNA等分子间存在着复杂的交互作用,共同参与了心肌纤维化过程。通过全转录组测序获得mRNA和非编码RNA的表达情况,结合生物信息学,从分子的交互、表型关联等方面研究心机纤维化过程中的关键分子。方法对小鼠进行胸主动脉缩窄(TAC)手术,提取左心室组织进行RNA-seq,通过WGCNA、GSEA等生物信息学方法从测序数据中挖掘关键lncRNA;采用RT-PCR、Western blot、RNA干扰等方法,观察lncRNA对心肌成纤维细胞活化的影响。

干细胞多能性与线粒体融合分裂调控关系的研究

近年来,随着再生医学的迅猛发展,干细胞作为一类具有多向分化潜能的细胞群体,在细胞治疗领域占据重要地位。但是,干细胞在体外富集培养的过程中容易发生自我分化,满足不了临床治疗的需要,因而在前期体外培养的环境中维持干细胞的多能性显得至关重要。研究表明,线粒体作为细胞的能量工厂,不仅源源不断地为细胞提供新陈代谢所需的能量,也参与干细胞多能性的调节过程。鉴于线粒体融合分裂是维持线粒体正常形态、功能的基础,本文将结合现阶段国内外对于干细胞多能性的研究进展,着重阐述线粒体融合分裂对干细胞多能性的调节。

一种新型富血小板因子血浆制剂的动物实验安全性研究

目的本研究旨在评价一种采用新型制备方法获得的富血小板因子血浆(platelet factor rich plasma,PFRP)的临床前安全性。方法全血经传染病检测后,通过离心冻融的方式富集血小板中的生长因子得到PFRP;将30只C57小鼠随机分为低剂量组(low dose group,LD)、高剂量组(high dose group,HD)和对照组(Control group);第0、14、28d时,LD组(3倍正常剂量)和HD(10倍正常剂量)组分别尾静脉注射PFRP溶液,Control组注射等体积的生理盐水;每周对各组小鼠的体重、精神行为以及肢体活动进行评价;第42d时,采用脏器百分比和HE染色分别对各组小鼠的脏器大小及组织结构进行评价。结果所有试验小鼠注射PFRP后未发现精神行为及肢体活动异常;注射2周后HD组小鼠体重较Control组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),其它时间点各试验组小鼠体重没有明显变化;第42d时,脏器百分比的比较显示,除HD组心脏出现显著增大外,其它脏器百分比与Control组相比均未有明显差异;HE染色显示各组小鼠脏器的组织结构均正常。结论采用新型的制备方法获得的富血小板因子血浆PFRP,注射3倍正常剂量至受试动物体内是安全的。

基于狂犬病毒感染特性的犬猫人畜共患病防控策略

狂犬病是由狂犬病病毒引起的高致死性传染病,因其具有典型的恐水特征,又被称作恐水症,是危害全世界公共卫生安全与人类生命健康的人畜共患病,哺乳类动物极易感染,该病毒感染后的致死率为100%。狂犬病临床表现为特异性恐风、恐水、咽肌痉挛以及进行性瘫痪等,多见于虎、狼等野生动物及犬、猫、猪等家畜中,犬科和猫科动物最容易感染。狂犬病毒感染性极强,传播途径主要为被患病或病毒携带动物抓伤或咬伤,病毒一旦进入人体就会入侵身体的中枢神经系统,导致动物或人出现神经症状,破坏机体的正常运作。

逍遥散对产后抑郁大鼠海马中单胺类神经递质含量的影响

目的:研究逍遥散对产后抑郁大鼠海马中单胺类神经递质含量的影响。方法:将48只卵巢切除的雌性大鼠分为4组:对照组,模型组,氟西汀组(阳性对照组)和逍遥散组。前23 d,除对照组外,其余大鼠每天皮下注射雌激素模拟大鼠的怀孕状态;接下来的30 d,各组大鼠分别灌胃给予受试物。实验结束后,观察大鼠的行为学指标;取出海马组织,用酶联免疫法测定海马组织中单胺类神经递质去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)、多巴胺(dopamine,DA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA)的含量。结果:与对照组相比,模型组行为学表现明显处于产后抑郁状态,海马中5-HT、NE和DA显著降低(P<0.01),5-HIAA显著增加(P<0.01);而中药逍遥散可显著改善行为学指标,并增加海马组织中5-HT、NE和DA的含量,降低5-HIAA的含量(P<0.01)。逍遥散的效果与氟西汀类似。结论:逍遥散可显著调节大鼠海马中单胺类神经递质的含量,发挥抗抑郁作用。

雌激素受体在骨生长、代谢及其力学响应中的作用和机制

力学信号在骨组织的生长、重建和疾病治疗中发挥着重要的作用。近年来的研究发现雌激素受体(estrogenreceptor,ER)能介导雌激素效应调节骨组织细胞的增殖、凋亡以及功能活性,从而影响骨形成和骨吸收,在骨组织生长、骨重建中发挥重要作用;同时参与骨组织及其细胞对力学刺激的响应过程。骨组织响应力学刺激的效应要受到ER数量和(或)功能活性的影响。这些研究提示了力学刺激和雌激素可能通过一些共同的信号通路来调节骨组织细胞的功能活性。本文着重关注ER在骨组织及其力学响应中的作用和机制。

石墨炉原子吸收法测定大鼠血清中铜的含量

目的：采用石墨炉原子吸收光谱法测定SD大鼠血清中铜的含量.方法：大鼠血清样品采用湿法消化前处理,灰化温度850℃,原子化温度2100℃条件下检测,结果：铜的线性范围为1.00～10.00 μg.L-1,r=0.9976,检出限为0.0850μg·L-1;加样回收率在99.1％～105.8％之间.日内、日间精密度RSD＜5.0％（n=5）;结论：所建立的石墨炉原子吸收法能够准确测定大鼠血清中铜的含量,方法具有重复性好,操作简便等特点,能为生物样品分析微量元素提供参考.

高效液相色谱法测定Cu(ATSM)混悬剂的含量

目的建立测定Cu(ATSM)混悬剂中Cu(ATSM)含量的高效液相色谱法.方法采用RP-HPLC法,用ODS柱,乙腈-水(含0.1%三氟乙酸)的梯度洗脱系统,检测波长为305 nm.结果 Cu(ATSM)在浓度为5~100!g·m L^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9967),检测限为2 ng(S/N=3),加样回收率为103.0%,RSD为1.98%(n=6).结论所建方法简便,灵敏度高,准确度好,专属性强,可为Cu(ATSM)制剂的质量评价提供可行的方法参考.

小儿阴茎异常勃起的治疗与预防策略

阴茎异常勃起（priapism，PP）是指男性阴茎在没有性刺激或性刺激后阴茎持续勃起超过4h的一种病理状态，该病是一种相对少见的疾病，其发病率约为10万分之1．5。阴茎异常勃起可发生在任何年龄段，包括新生儿阶段，但5～10岁的儿童和20～50岁的成人是两个高发期。

超级酶基因治疗在阴茎康复中的应用

勃起功能障碍(ED)是前列腺癌根治术后常见的并发症。虽然阴茎康复的概念已被临床工作者广为接受,但目前常用的阴茎康复方法仍存在疗效欠佳、费用高、使用不方便和患者依从性差等亟待解决的问题。阴茎勃起是阴茎海绵体平滑肌松弛、动脉扩张等完整过程。前列环素(PGI2)是诱导平滑肌松弛最主要的血管保护剂。但PGI2极不稳定,不能直接给药。超级酶是一个创新的产品,它把生成PGI2的两种酶(环氧化酶和PGI合成酶)直接联系在一起。超级酶在阴茎组织能持续性、特异性、靶向性的促进PGI2合成,帮助前列腺癌根治术后ED患者的阴茎康复。该疗法在阴茎康复及ED治疗上具有广阔的前景,本文就目前该新疗法在阴茎康复中的研究进行了总结。

CD38蛋白下调炎症因子的表达减轻脂多糖联合D-氨基半乳糖诱导的急性肝脏损伤

目的研究CD38蛋白在脂多糖联合D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)所诱发的小鼠急性肝损伤中的作用。方法野生型C57BL/6小鼠(WT)和CD38基因敲除小鼠(CD38 KO)随机分为正常对照组,模型早期组和模型晚期组。在造模后2 h和6 h处死动物,检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),实时荧光定量PCR检测肝脏组织炎症因子的表达,HE染色检测组织病理改变。结果在LPS/D-GalN诱导的模型小鼠中,与WT小鼠相比,CD38 KO小鼠血清ALT和AST水平显著升高,肝脏组织中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及γ干扰素(IFN-γ)的表达水平显著升高;病理组织学检测显示肝脏组织出血严重,肝实质细胞空泡变形明显增多,肝细胞死亡显著增加。结论 CD38蛋白通过下调炎症因子的表达,减少肝细胞死亡,减轻LPS/D-GalN诱导的急性肝脏损伤。

基质金属蛋白酶3在晶状体上皮细胞中的表达及其意义

背景后发性白内障是现代白内障囊外摘出术后导致视力下降的常见并发症。基质金属蛋白酶（MMPs）是参与降解除多糖以外全部细胞外基质（ECM）的重要蛋白酶，探讨MMP-3对后发性白内障的基因治疗一直是研究热点，而纤连蛋白（FN）是MMP-3的主要降解底物，能间接反映MMP-3的表达情况。目的构建pEGFP—N1-MMP-3真核重组质粒并转染晶状体上皮细胞（LECs），观察MMP-3在LECs中的表达，探讨后发性白内障基因治疗的可能性。方法取6只新鲜猪晶状体，将囊膜用组织块法进行原代培养，获得LECs。用E．coli DH5α MMP-3和E．coli DH5α pEGFP—N1质粒构建MMP-3的真核表达重组质粒pEGFP—N1-MMP-3，通过双酶切，DNA测序分析鉴定人MMP-3片段的准确性。将构建的pEGFP—N1-MMP-3转染至猪LECs中，通过绿色荧光蛋白（GFP）间接观察MMP-3在猪LECs中的表达，用Westernb lot法检测pEGFP—N1-MMP-3真核重组质粒转染后LECs表达产物FN的相对表达量，间接评估MMP-3的表达量。结果双酶切鉴定结果符合质粒pEGFP—N1及目的片段MMP-3大小。软件分析测序结果表明，重组质粒pEGFP—N1-MMP-3中的MMP-3基因与GenBank中的人MMP基因序列相似性达99．6％，表示目的片段已正确插入pEGFP—N1载体。原代培养猪LECs，将重组质粒pEGFP—N1-MMP-3转染人猪LECs，荧光显微镜下可见明显的GFP绿色荧光。Western blot检测表明，FN在pEGFP—N1-MMP-3真核重组质粒转染组的表达量为0．666±0．008，空质粒转染组FN的表达量为0．326±0．071，差异有统计学意义（P=0．000）。结论成功构建了pEGFP—N1-MMP-3质粒，并能够在猪LECs中表达，为进一步研究该蛋白在LECs中的表达与功能奠定了基础。

正常与缺血性心肌梗死及心肌肥厚大鼠超声心动图参数变化趋势比较

目的通过对正常和心血管疾病状态下的大鼠进行连续超声心动图检测,获得客观准确的大鼠心脏超声参数的变化趋势。方法建立缺血性心肌梗死和压力负荷增高诱导心肌肥厚的大鼠模型,分别在术前、术后1、2和4周进行超声心动图检测,在相同时间点对正常大鼠进行超声心动图检测,并记录超声参数数据。结果正常大鼠各心脏参数随时间的变化均有所升高,属正常生长状态。心肌梗死大鼠心脏变化以心室重构和功能障碍为主,心室内径和心室容积随时间变化显著增加,射血分数和短轴缩短率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。心肌肥厚大鼠心脏变化以形态改变为主,左室前、后壁厚度随着时间的延长显著增加,收缩末期容积显著下降,射血分数和短轴缩短率代偿性升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论应用超声心动图可获得正常和疾病状态下较为客观准确的大鼠心脏超声数据,为后续应用大鼠实验模型研究各种心血管疾病提供了数据参考。

病理性基质刚度对心肌成纤维细胞活化的影响

目的心肌的胞外基质力学微环境参与了心肌细胞及心肌成纤维细胞多种生物学行为的调控,但心肌基质刚度如何参与调控心肌成纤维细胞活化需深入研究。探究不同基质刚度对心肌成纤维细胞活化表型的影响及其细胞膜上的P2X嘌呤受体表达水平的影响。方法在胸主动脉缩窄(TAC)诱导的压力超负荷所致小鼠心肌肥厚模型中,检测心肌组织不同P2X受体的mRNA表达变化。在体外模拟心肌肥厚不同阶段的心脏组织细胞外基质刚度变化。

miR-146a-5p在不明原因复发性流产蜕膜组织中的表达及其意义

目的:探讨miR-146a-5p在不明原因复发性流产(URSA)蜕膜组织中的表达变化并分析其可能作用机制。方法:选取2019年1—12月在成都西囡妇科医院因URSA行清宫术患者(URSA组)及因无生育计划行人工流产术的正常妊娠者(正常妊娠组)各10例,收集2组所有对象的蜕膜组织。比较2组蜕膜组织中miR-146a-5p水平,利用生物信息学方法预测miR-146a-5p潜在靶基因和相关分子机制,并检测蜕膜组织中关键靶分子水平并分析其与miR-146a-5p水平之间的相关性。结果:URSA组miR-146a-5p水平低于正常妊娠组(P<0.001)。在至少3个数据库均预测到的miR-146a-5p靶基因共35个,其中IRAK1、CD80和TRAF6富集于Toll样受体(TLR)信号通路;IRAK1、SORT1和TRAF6富集于神经营养素(NT)信号通路,miR-146a-5p预测靶基因编码的功能蛋白之间存在3对相互作用关系。URSA组IRAK1、CD80、TRAF6和SORT1基因和蛋白水平均高于正常妊娠组(P<0.05),miR-146a-5p水平与这4个分子基因和蛋白水平均呈负相关(P<0.05)。结论:蜕膜组织中miR-146a-5p可能通过调控TLR和NT信号通路参与URSA发病机制,为后续URSA防治策略研究提供了新的思路和靶点。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D调控H9c2细胞中HIF-1α/VEGF通路(英文)

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(histone-lysine N-methyltransferase 2D,KMT2D)作为主要的组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶,在调控胚胎发育、组织分化、代谢和肿瘤抑制方面发挥重要作用。在小鼠体内,敲除Kmt2d会导致严重的心脏发育缺陷最终造成胚胎期死亡。低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)作为调节细胞应对低氧的关键转录因子,能够调控多种下游基因转录。有相关研究揭示,表观遗传调控者能够调节HIF-1α的稳定性和活性。同样,作为表观遗传调控者的组蛋白甲基转移酶KMT2D是否参与低氧条件下HIF-1α对下游基因的调控,目前仍未知。在本研究中,观察在Kmt2d正常或缺乏的情况下,心肌细胞H9c2对低氧环境的应答反应。结果显示,与常氧条件相比,低氧状态下HIF-1α、组蛋白乙酰化酶P300、KMT2D及其介导的H3K4一甲基化(H3K4 mono-methylation,H3K4me1)的蛋白质水平增加(P<0.05);HIF-1α下游基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,Vegf)的mRNA表达水平明显上调(P<0.01)。染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP-qPCR)检测结果显示,H3K4me1和组蛋白3第27位赖氨酸乙酰化(histone 3 lysine 27 acetylation,H3K27ac)在Vegf基因启动子区域的结合丰度明显增加(P<0.05)。低氧条件下沉默Kmt2d之后,H3K4me1蛋白水平和Vegf的mRNA表达下降(P<0.05)。本研究表明,低氧条件下KMT2D参与调控HIF-1α和下游基因Vegf的表达。