吡非尼酮与仑伐替尼联合应用对人胆管癌细胞系HuCCT1的增殖克隆抑制作用及其机制

目的观察吡非尼酮(PFD)联合仑伐替尼(Len)对人胆管癌HuCCT1细胞增殖、克隆形成、自噬的影响,并探讨其可能机制。方法人胆管癌HuCCT1细胞经PFD、Len或PFD联合Len处理后,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,免疫荧光染色检测细胞自噬体数目,蛋白免疫印迹检测AMPK、mTOR、S6蛋白磷酸化水平及自噬标记蛋白LC3-Ⅱ蛋白水平。结果与PFD单药组和Len单药组相比,联合组的细胞增殖活力、克隆形成数目、LC3-Ⅱ表达水平及自噬体形成数目都显著降低,P均<0.05;与PFD单药组和Len单药组相比,联合组的AMPK蛋白磷酸化水平升高,mTOR、S6蛋白磷酸化水平降低,P均<0.05。结论PFD联合Len可抑制HuCCT1细胞增殖、克隆形成,机制可能是其通过上调AMPK磷酸化水平,下调mTOR的磷酸化水平,进而抑制mTOR信号通路,促进细胞自噬。

吡非尼酮对人胆管癌HuCCT1细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探究吡非尼酮(PFD)对人胆管癌HuCCT1细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法CCK-8法检测不同浓度PFD(0、0.25、0.5、0.75、1 g/L)对HuCCT1细胞增殖的抑制情况;平板克隆形成实验检测PFD对HuCCT1细胞克隆形成能力的影响;划痕修复实验和Transwell实验检测PFD对HuCCT1细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测PFD对HuCCT1细胞上皮间质转化(EMT)标志分子N-cadherin、E-cadherin及Vimentin蛋白表达水平的影响。结果与对照组相比,PFD显著抑制HuCCT1细胞的增殖及克隆形成能力(P<0.05);划痕修复实验及Transwell实验结果显示PFD抑制HuCTT1细胞的迁移及侵袭能力(P<0.05);Western blot实验结果显示PFD显著上调HuCCT1细胞E-cadherin蛋白表达水平,同时下调N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平(P<0.05)。结论PFD抑制胆管癌HuCCT1细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT进程。

利用CRISPR/Cas9技术繁育基因修饰猪在医学领域的研究进展

猪在解剖学、生理病理学、营养代谢和疾病特征等方面都与人类相似度较高,基因修饰猪现已是疾病发生机制、病理毒理研究、治疗药物评估等众多领域所需的重要动物模型。但是大型基因修饰动物模型生产难度大、步骤繁琐、耗时长、成本高昂。随着基因编辑技术的突破,规律性短重复回文序列簇(CRISPR)和CRISPR相关蛋白9(Cas9)构成的CRISPR/Cas9技术大大提高了基因突变效率,降低了基因修饰动物模型的造模成本,同时简化了步骤,推进了基因修饰猪的广泛应用。本文主要综述了基因修饰猪的生产方法以及利用CRISPR/Cas9技术生产人类疾病动物模型猪的研究进展。