骨髓间充质干细胞在去卵巢大鼠骨质疏松发病机理中潜在的作用

为探讨去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(Bone m arrow m esenchym a l stem ce lls,M SC s)成纤维细胞集落生成单位(CFU-F s)、细胞周期、成骨分化能力和成脂分化能力的变化,选用3月龄和6月龄健康雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松动物模型,动物实验分为4组:(1)3月龄正常组(con tro l-3);(2)3月龄卵巢切除组(OVX-3);(3)6月龄正常组(con tro l-6);(4)6月龄卵巢切除组(OVX-6)。采用密度梯度离心方法分别获取各组M SC s,体外培养,选用第3~4代M SC s用于实验。倒置相差显微镜观察CFU-F s;流式细胞技术检测细胞周期、细胞增殖指数(pro liferation index,P I)和细胞凋亡指数(apoptotic index,A I))。加入成骨诱导剂,采用碱性磷酸酶活性蛋白检测法(IFCC推荐法)检测M SC s碱性磷酸酶(a lka line phosphatase,ALP)分泌量;采用同位素标记方法检测骨钙素(O steoca lc in,OCN)分泌量;茜素红染色观察钙结节形成。加入成脂诱导剂,油红O染色观察M SC s内脂滴形成;RT-PCR方法检测M SC s脂蛋白脂酶(lipoprote in lipase,LPL)mRNA的表达。结果表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组CFU-F s、P I值明显降低(P<0.05),A I值明显增加(P<0.05);OVX-6组CFU-F s、P I值的降低和A I值的增加都明显大于OVX-3组(P<0.05)。成骨诱导表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组ALP、BGP分泌量以及钙结节形成的数量均明显降低(P<0.05),OVX-6组的降低最为明显。成脂诱导表明:与相应对照组比较,OVX-3组和OVX-6组,LPL mRNA的表达量明显增加(P<0.05),OVX-6组LPL mRNA的表达量的增加明显高于其他各组(P<0.05)。结论:去卵巢骨质疏松大鼠M SC s增殖能力明显下降,向成骨细胞分化能力下降,向脂肪细胞分化能力增强,其中6OVX组M SC s的变化最明显。提示:去卵巢骨质疏松大鼠M SC s向成骨细胞分化能力的降低和向脂肪细胞分化能力的增强,可能与绝经后骨质疏松症的发生相关。

小剂量17β-雌二醇在大鼠颈动脉损伤修复过程中内皮祖细胞的作用

目的研究17β-雌二醇对大鼠颈动脉内膜损伤后外周血中内皮祖细胞数量以及颈动脉内膜修复的影响。方法对人工绝经雌性大鼠造成颈动脉内皮损伤,术前1周和术后1周分别使用17β-雌二醇生理剂量、低于生理剂量以及安慰剂进行干预。应用流式细胞术观察外周血中内皮祖细胞(CD34+和CD133+)数量。以伊文思兰染色,测量颈动脉内皮损伤面积。结果 17β-雌二醇生理剂量极低于生理剂量组,内皮损伤术后1周后外周血中内皮祖细胞数量明显高于安慰剂组,损伤面积小于安慰剂组。结论生理剂量与低于生理剂量的17β-雌二醇均可通过促进内皮祖细胞动员、提高外周血中内皮祖细胞数量,从而促进颈动脉损伤后内膜修复。生理剂量与低于生理剂量的17β-雌二醇作用效果无明显差别。