人内皮抑素重组腺病毒的构建及鉴定

目的:利用Adeasy1系统,构建并鉴定人内皮抑素(hES)重组腺病毒。方法:从真核表达载体pEGFP-N1-ASP-hES中将ASP-hES扩增,亚克隆至pAdTrackCMV穿梭质粒中,与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达。结果:重组腺病毒载体经PCR鉴定正确,病毒滴度为1×108PFU/ml。结论:成功构建了人内皮抑素重组腺病毒Ad-ASP-hES,为内皮抑素基因治疗新生血管的进一步研究奠定了基础。

腺病毒介导mda-7/IL-24基因感染对卵巢癌耐药细胞凋亡的影响

背景与目的:Mda-7/IL-24基因是一个具有选择性的诱导肿瘤细胞凋亡和细胞因子免疫调节功能双重作用的基因,在抗肿瘤基因治疗方面有很好的应用前景,本研究利用构建的mda-7/IL-24重组腺病毒感染卵巢癌耐药细胞株,了解其对卵巢癌耐药细胞的抗肿瘤作用。方法:利用腺病毒AdEasy1载体构建含目的基因的Ad.mda-7/IL-24,感染两种卵巢癌耐药细胞株OVCAR-3和OVCAR-8/TR,Westernblot法检测感染后MDA-7/IL-24蛋白表达,用Hoechst33258凋亡染色和流式细胞仪检测感染后细胞的凋亡和细胞周期改变。结果:Ad.mda-7/IL-24经测序、酶切电泳、感染后Westernblot检测MDA-7蛋白表达,表明构建成功;感染Ad.mda-7后72h内OVCAR-3细胞最高凋亡率为14.1%,OVCAR-8/TR细胞为32.4%,明显高于空载体组和未感染组。结论:成功构建了Ad.mda-7/IL-24重组腺病毒,用其感染卵巢癌耐药细胞可诱导细胞凋亡。

甲状腺相关眼病患者眼眶组织糖皮质激素受体mRNA的表达

目的探讨糖皮质激素受体（GR）α和β mRNA在甲状腺相关眼病（TAO）患者眼眶组织中的表达。方法眼外肌和（或）眼眶脂肪组织标本取自在我科行手术治疗的17例严重TAO患者，意外死亡的10例健康成年人眼外肌和（或）眼眶脂肪组织标本作为对照。提取眼外肌或眶脂肪组织总RNA，将RNA逆转录为cDNA，用荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法实时检测GRα和GRIβ的PCR扩增全过程，计算各个样本GRα和GRIβ mRNA的表达量。结果眼外肌和眶脂肪组织均表达GRα和GRβ mRNA。TAO患者GRα mRNA表达量为（40．15±11．37）拷贝／μ1，正常对照为（20．64±7．07）拷贝／μl。TAO患者GRα mRNA表达量与GRβ mRNA表达量的比值（GRα／GRβ比值）为77．76±18．77，正常对照为148．34±23．86，差异具有统计学意义（P＜0．05）。眼外肌与眶脂肪组织之间，甲状腺机能正常、亢进及低下患者之间，使用糖皮质激素治疗与未使用糖皮质激素患者之间GRα mRNA表达量和GRα／GRβ比值比较，差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论TAO患者眼眶组织GRα mRNA的表达增强；GRα／GRβ比值降低可能在TAO的病理发生和糖皮质激素的治疗反应中起一定作用。