脑源性神经营养因子对缺氧胚脑皮质神经元发挥保护作用的细胞内信号传导机制

目的:通过胚脑皮质神经元的体外培养,探讨遭受缺氧刺激时,脑源性神经营养因子(Brain derivedneurotrophic factor,BDNF)对神经元发挥保护作用时所启动的细胞内信号传导通路。方法:对胚鼠皮质神经元进行体外培养,提取不同缺氧时间点单纯缺氧的对照组及BDNF干预组的细胞蛋白,采用免疫印记(western blotting)方法检测两组神经元在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinase,ERK1/2)/磷酸化ERK1/2、蛋白激酶Akt/磷酸化Akt、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 Mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)/磷酸化P38MAPK表达上的差别。结果:与单纯缺氧组比较,加入BDNF可引起磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT表达的增强,而磷酸化的P38MAPK在两组均没有表达。结论:BDNF引起磷酸化ERK1/2及磷酸化AKT表达的上调可能为BDNF发挥对缺氧神经元保护作用的机理之一。

神经元原代培养方法的改进

本研究主要讨论近年来本课题组不断改进体外神经元培养方法以获得高纯度高活性的大鼠皮质神经元的研究结果。结果表明,联合使用低浓度胰酶及DNaseⅠ进行消化,在培养基的组成成分中用Glutamax代替glu-tamine,并将胎牛血清比率降为5%,于接种后48小时加入细胞分裂抑制剂-阿糖胞苷以抑制神经胶质细胞生长,可获得高纯度高活性的大鼠皮质神经元。