nm23-H1通过下调PKC信号通路抑制肺癌细胞侵袭

目的探讨nm23-H1基因调控肺癌细胞PKC信号通路抑制肺癌侵袭和转移的分子机制。方法应用Western-blot、Boyden-Chamber、MTT法和激光扫描共聚焦显微镜技术分别检测nm23- H1基因转染前后以及PKC抑制剂Calphostin C处理前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞膜、胞浆PKC的分布变化;体外侵袭力和增殖力的变化;以及细胞中PKC激活转位变化和Ca2+浓度的变化。结果 (1)L9981和L9981-pLXSN细胞中PKCα、PKCβⅡ蛋白在胞膜的表达量明显较L9981- nm23-H1增多(P<0．001),表明其处于活化状态的PKC明显增加;(2)PKCα、PKCβⅡ在L9981及 L9981-pLXSN细胞中主要位于胞核、核周和质膜,明显处于激活转位状态;在L9981-nm23-H1细胞中则主要位于胞浆内,处于无活性状态,前二者胞浆中Ca2+荧光表达强度显著高于后者(P<0．001); (3)L9981-nm23-H1体外增殖力、侵袭力显著低于L9981和L9981-pLXSN(P<0．001),但后二者间比较差异无统计学意义(P>0．05);(4)抑制剂处理后,L9981和L9981-pLXSN细胞中PKCα、PKCβⅡ在胞膜的蛋白表达量和胞浆中的Ca2+荧光表达强度均较处理前明显下降(P<0．001);3株细胞体外增殖力、侵袭力均较处理前明显下降(P<0．001)。结论nm23-H1基因可能通过PKC信号通路来发挥其肿瘤转移抑制作用,细胞内钙离子可能参与了这一过程。

检测非小细胞肺癌病人外周血和骨髓中肿瘤细胞的临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)外周血和骨髓中肿瘤细胞分子诊断的临床意义 ,以及二者相关性。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,对 31例肺癌病人、10例肺良性病变者和8名健康人外周血、骨髓中MUC1基因mRNA表达进行检测。结果 31例肺癌病人中 10例检测到外周血中有MUC1mRNA表达 ,检出率 32 3% ;7例骨髓中有表达 ,检出率 2 2 6 % ;二者之间存在显著正相关(P <0 0 5 ) ,且与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P TNM分期均存在密切关系 (P <0 0 5 )。而肺良性病变者和健康人中均未检测到MUC1mRNA表达。结论 肺癌病人外周血和骨髓中存在常规方法检测不出的肿瘤细胞 ;应用巢式RT PCR法检测肺癌病人外周血和骨髓中MUC1mRNA表达 。