c血清型变形链球菌致龋相关基因/DNA片段的批量克隆与高通量筛选

目的 筛选含致龋相关基因/DNA片段的阳性克隆,为探究变形链球菌致龋的分子机制奠定基础。方法 将抑制消减杂交方法获得的高毒力株特异的消减PCR产物与T/A载体pCR2 .1连接,将连接产物转化E .coliTOP1 0F′感受态细胞,进行蓝白筛选。对96个转化子进行ColonyPCR ,将PCR产物点样于同一尼龙膜上,分别与地高辛标记的变形链球菌高、低毒力株基因组DNA/AluI酶切产物杂交,高通量筛选阳性克隆。结果 随机挑取了96个白色或白色中央有蓝色的菌落,经过ColonyPCR ,其中有1个转化子的扩增产物为双带,其余均为0 .2～2kb之间的单一条带。经过杂交,以与高毒力株基因组有杂交信号,而与低毒力株基因组无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆,筛选的阳性率为5 0 %左右,阳性克隆中含有c血清型变形链球菌致龋相关的基因/片段。结论 对抑制消减杂交方法获得的变形链球菌高毒力株特异的消减PCR产物进行批量克隆和高通量筛选,获得了致龋相关的基因/DNA片段。