微RNA-146a反转牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜细胞成骨的抑制作用

目的探讨微RNA-146a（microRNA-146a，miR-146a）对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells，hPDLC）成骨分化的影响及机制，为牙周组织工程学研究提供实验依据。方法体外培养hPDLC，诱导成骨分化，将细胞分为5组：含5%胎牛血清的α-微量伊格尔培养基培养的hPDLC（非成骨分化培养组）；成骨分化液培养的hPDLC（成骨分化培养组）；成骨分化液＋1 mg/L Pg LPS处理的hPDLC（LPS组）；成骨分化液＋1 mg/L Pg LPS＋miR-146a模拟物处理的hPDLC（LPS＋miR-146a模拟物组）；成骨分化液＋1 mg/L Pg LPS＋miR-146a阴性对照处理的hPDLC（LPS＋miR-146a阴性对照组），每组设5个复孔。通过实时荧光定量PCR和茜素红染色法分别检测成骨标志物和矿化，同时应用非放射性转录因子检测hPDLC的核提取物中核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）p65的核活性。结果与成骨分化培养组相比，LPS组hPDLC中Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor-2，RUNX2）和骨钙蛋白水平显著降低（P〈0.05）；Pg LPS可以抑制矿化能力，刺激NF-κB p65的核转录活性的表达（成骨分化培养组：1.023±0.217，LPS组：6.252±0.613，P=0.008）；与LPS＋miR-146a阴性对照组相比，LPS＋miR-146a模拟物组第3天检测到hPDLC中除ALP（P=0.167）和RUNX2（P=0.580）外，Ⅰ型胶原（P=0.007）和骨钙蛋白mRNA（P=0.049）的表达均显著增加；第7和14天时Ⅰ型胶原、ALP、RUNX2和骨钙蛋白mRNA水平均显著增加（P〈0.05），并可以增强矿化能力，同时miR-146a模拟物可显著降低Pg LPS诱导的hPDLC中NF-κB p65的核转录活性（LPS＋miR-146a模拟物组：2.427±0.354；LPS＋miR-146a阴性对照组：5.863±0.482，P=0.019）。结论miR-146a可以通过促进hPDLC中成骨标志物的表达和抑制炎症通路，逆转Pg LPS对hPDLC成骨分化的抑制作用。