医学免疫学课程思政教育的探索与实践

课程思政教育是高等学校教学过程的重要组成部分,是实现立德树人教育目标的重要环节。如何将思政教育融入医学专业基础课程-医学免疫学,帮助学生树立正确的世界观、人生观、价值观,是高等医学院校专业课教师重要的研究课题。本文首先分析了在医学免疫学课程开展“课程思政”的重要性;其次深度挖掘和归纳医学免疫学课程思政教育元素及课程建设;最后,将我校2022级秋季临床医学五年制246名学生作为研究对象,探究医学免疫学课程思政教学效果,为医学免疫学课程思政教育的探索与实践提供参考。

EAE小鼠模型的构建及其免疫学机制的探讨

目的用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型并初步探讨EAE发病的免疫学机制。方法用MOG35-55抗原免疫C57BL/6小鼠,观察实验动物的症状及中枢神经系统的病理改变;应用MTT法测定EAE小鼠脾脏T淋巴细胞活化增殖程度;应用ELISA技术测定EAE小鼠血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体水平。结果EAE组发病率为100%,HE染色观察到脑脊髓炎性细胞浸润,白质脱髓鞘等病理改变;EAE小鼠脾脏MOG35-55反应性T淋巴细胞增殖活化,血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体随病情的加重而升高。结论用MOG35-55多肽成功诱导了C57BL/6小鼠EAE模型;并推断EAE的发生可能与MOG35-55反应性T淋巴细胞的活化、抗MOG35-55抗体和IFN-γ升高有关。

免疫毫微粒的内化作用及其逆转人肝癌细胞多药耐药性的研究

目的 观察免疫毫微粒能否内化进入人肝癌细胞及其多药耐药性 ( MDR)细胞 ,研究免疫毫微粒能否逆转 MDR。方法 将抗人肝癌阿霉素白蛋白免疫毫微粒 ( HAb18- ADR- HSA- NP)与人肝癌株 SMMC- 772 1细胞及其 MDR细胞 ( SMMC- 772 1/ MDR+ )共同孵育 ,采用扫描电镜 ,激光共聚焦显微镜 ,透射电镜技术观察免疫毫微粒与靶细胞的结合及免疫毫微粒的内化过程 ;采用 MTT比色分析法测定免疫毫微粒对靶细胞的杀伤率 ,计算免疫毫微粒对靶细胞的 IC50 和 MDR细胞的耐药倍数 ( RF)。结果 激光共聚焦显微镜观察 ,SMMC- 772 1细胞表面和胞浆中均有许多荧光毫微粒 ;透射电镜观察 ,免疫毫微粒与 SMMC- 772 1细胞及其 MDR细胞在 3 7℃孵育后 ,胞浆中可见有免疫毫微粒 ,随时间的延长细胞变性损伤越严重 ;当 SMMC- 772 1及其 MDR细胞预先经 HAb18抗体处理 ,再与 HAb18- ADR- HSA- NP孵育 ,则胞浆中未见免疫毫微粒 ;扫描电镜显示 ,多个 HAb18- ADR- HSA- NP紧密结合在 SMMC- 772 1/ MDR+ 表面 ,MDR细胞对于免疫毫微粒的耐药倍数 ( 2 .1)较其对于游离 ADR( 4.4)明显降低。结论 人肝癌特异性阿霉素白蛋白免疫毫微粒通过抗体介导能特异性内化进入人肝癌 SMMC- 772 1细胞及其 MDR细胞 ;该免疫毫微粒能增强

多异体脐血输注诱导产生免疫低反应性的实验与临床研究

目的 探讨多异体脐血输注诱导肾移植受者产生同种免疫低反应的可行性及对移植肾早期排斥反应的影响。方法 对 2 0例肾移植受者术前行多异体脐血输注 ,分别于输血前及输血后 1月、2月、3月 ,检测受者和供者特异性单向混合淋巴细胞反应 ( ML R)等指标的变化 ;并比较肾移植术后早期脐血组与对照组排斥反应的发生情况。结果 脐血输注后受者对供脐血的特异的 ML R显著降低 ( P<0 .0 1) ,对无关成人的 ML R亦有明显下降( P<0 .0 5 )。移植后三月脐血组无一例排斥反应发生。结论 多异体脐血输注能诱导肾移植受者产生同种免疫低反应性。这种低反应性可能对移植肾早期排斥反应的发生有抑制作用。

免疫毒素基因DT390真核表达载体的构建及功能研究

目的构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒。以PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,用免疫荧光检测重组质粒的表达;用MTT比色法测定重组免疫毒素质粒的生物学活性。结果构建了DT390-mIP10的真核表达载体SRα-DT390-mIP10,并在NIH3T3细胞中获得表达。表达的DT390-mIP10在体外能有效地杀伤活化的T细胞。结论免疫毒素基因重组真核表达载体DT390-mIP10的构建成功并在真核细胞中表达,为其在肿瘤及自身免疫性疾病治疗方面的进一步应用研究奠定了基础。

DNA修复基因XPD多态性在中国汉族(四川泸州)和泰国人群中的分布特点

目的:分析DNA修复基因着色性干皮病基因DLys751Gln基因型频率和等位基因频率在中国汉族(四川泸州)和泰国人群中的分布特点,并比较其在两个群体中的分布有无差异。方法:实验于2006-01进行。选择150名无血缘关系的泸州医学院附属医院健康体检者,均为汉族,25～65岁,平均45岁;140名泰国无血缘关系个体,均来自曼谷地区,年龄25～63岁,平均46岁。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性、聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显色方法检测所有受试者的Lys751Gln等位基因频率和基因型频率。采用Promega公司的统计学软件PowerStats进行Hardy-Weinberg平衡检测,应用χ2检验或Fisher确切概率法分析Lys751Gln等位基因及基因型频率在中国汉族、泰国及其他人群中的分布是否有差异,采用SPSS11.5软件完成。结果:290名受试者全部进入结果分析。①基因型Lys/Lys,Lys/Gln和Gln/Gln在泸州汉族人群中的频率分别为72.67%,27.33%和0.00%,在泰国人群中的频率分别为87.86%,12.14%和0.00%。②基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,采用χ2检验或Fisher确切概率法进行统计分析,两个人群中基因型频率和等位基因频率分布有显著性差异(P<0.05)。结论:Lys751Gln基因多态性在中国汉族(四川泸州)和泰国人群中的分布有显著性差异,其多态性分布存在地域和种族差异。

白介素-17在变应性鼻炎及鼻息肉患者血液和组织中的表达

目的研究白介素-17(IL-17)在变应性鼻炎、鼻息肉患者血液和组织中的表达情况,探讨其在变应性鼻炎、鼻息肉发生发展中的可能作用机制。方法收集变应性鼻炎、鼻息肉患者以及对照组共41例患者的血液以及鼻甲黏膜或息肉组织,采用ELISA法、免疫组化染色法检测血液中、组织内IL-17表达情况,HE染色法观察嗜酸性粒细胞浸润情况。结果鼻息肉患者血清中IL-17的含量及局部组织内IL-17阳性细胞计数,与对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05),其局部组织内IL-17表达情况与局部浸润的嗜酸性粒细胞数呈正相关(r=0.736,P=0.006);变应性鼻炎患者仅局部组织内IL-17阳性细胞计数高于对照组(P<0.001),血清中IL-17的含量低于鼻息肉患者(P<0.001),与对照组间的差异没有统计学意义(P=0.541)。变应性鼻炎患者组嗜酸性粒细胞计数与鼻息肉患者组间差异无统计学意义(P=0.893),但两者均高于正常对照组(P均<0.001)。结论IL-17对鼻息肉的发生发展具有重要的作用;而对于变应性鼻炎,IL-17可能是其发病的一个重要方面,需进一步的研究。

小鼠胚胎成纤维细胞的分离与培养

目的 探讨影响小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)分离和培养的一些因素 ,以建立稳定的 MEF培养体系。方法 取 BAL B/ c小鼠胚胎分离成纤维细胞 ,利用体外培养体系 ,对 MEF的生长形态、生长曲线及细胞周期进行观察 ,并对不同胚胎日龄以及不同胰酶作用时间对 MEF分离及培养的影响进行研究。结果 13.5 d胎龄鼠胚的 MEF分离效果优于 10 .5 d、18.5 d胎龄鼠胚 ;MEF在体外为贴壁生长型细胞 ,第三代细胞增殖旺盛 ;在室温条件下 ,0 .2 5 %胰酶消化 MEF时间以 3～ 5 min为宜。结论 MEF在第 3代增殖旺盛 。

质粒介导靶向c-myc的siRNA对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察靶向原癌基因c-myc的siRNA对MCF-7人乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达及细胞增殖的影响。方法以原癌基因c-myc mRNA 589-609位碱基为靶序列构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,用脂质体Lipo2000包裹转染MCF-7细胞。采用RT-PCR、Western blot检测c-myc mRNA及蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞增殖。结果与pEGFP-C1及p-Mis09-1比较,转染p-Mat01-1能够特异性抑制MCF-7细胞c-myc mRNA(24h:P<0.01)及蛋白(5d:P<0.01)表达,显著降低MCF-7细胞增殖能力(3d:P<0.05,5、7d:P<0.01)。结论采用siRNA表达质粒技术能够有效抑制MCF-7乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达,初步证实下调c-myc/c-Myc表达能够抑制MCF-7细胞增殖,为RNA干扰技术在乳腺癌生物治疗中的应用打下一定实验基础。

受体介导米托蒽醌白蛋白纳米粒肿瘤细胞靶向性研究

目的研究叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒(MTO-BSANP-FOLATE)的肿瘤细胞靶向性。方法采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒,采用叶酸活性酯在微碱性条件下与白蛋白纳米粒表面的活性氨基偶联制备叶酸偶联白蛋白纳米粒,再将其与米托蒽醌混合,戊二醛固化,制备MTO-BSANP-FOLATE。采用3HTDR掺入法和流式细胞术对其肿瘤细胞靶向性进行评价。结果所制备的MTO-BSANP-FOLATE包封率为(96.55±0.96)%,载药量为(9.66±0.10)%。3HTDR掺入法和流式细胞术结果表明MTO-BSANP-FOLATE组的肿瘤细胞抑制率及凋亡率均高于MTO-BSANP。结论MTO-BSANP-FOLATE可通过肿瘤细胞高表达的叶酸受体靶向于肿瘤细胞。

尿道瘢痕成纤维细胞培养及药物对其生长的影响

目的 探讨丹参和川芎嗪对尿道瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法 建立尿道瘢痕成纤维细胞的体外培养 ,并以此为模型研究丹参和川芎嗪对其生长的影响及其作用机理。结果 1丹参和川芎嗪能使尿道瘢痕成纤维细胞形态发生明显改变 ,细胞由梭形变为椭圆形。 2丹参和川芎嗪均可抑制尿道瘢痕成纤维细胞的增殖 ,当抑制率为 5 0 %时 ,药物浓度分别为 2 .5 mg/ m l和 75μg/ ml。其机制与药物抑制细胞分裂密切相关 ,而并非是使细胞产生坏死和降解。结论 丹参和川芎嗪可望成为有效的瘢痕抑制剂 。

bFGF-MAb抑制卵巢癌细胞及其腹腔移植瘤生长的实验研究

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子的单克隆抗体 b FGF- MAb对人卵巢癌细胞的增殖、卵巢癌腹腔移植瘤裸鼠的生存率和肿瘤血管生成的影响 ,为卵巢癌的临床生物治疗提供实验基础。方法 1将人卵巢癌细胞株 SKOV3接种于 2 4孔板 ,加入不同浓度的 b FGF- MAb,每日行结晶紫染色、Vector2 - 14 2 0多标记计数仪比色 ,测定 OD4 90 值 ;2将 SKOV3细胞接种于 BAL B/ c裸鼠腹腔形成卵巢癌腹腔移植瘤模型 ,每周 2次将 b FGF- MAb注射于腹腔 ,比较裸鼠生存时间 ;3解剖裸鼠 ,计数肠系膜上种植瘤的个数并称重 ;4对移植瘤组织进行 CD31 的免疫组化染色后测定肿瘤内微血管密度 (MVD)。结果 1b FGF- MAb在 0～ 15 μg/ ml的范围内 ,其抑制 SKOV3细胞增殖的作用呈浓度依赖性 ,实验第 4 d,15 μg/ m l组能抑制细胞增殖的 2 4 % ;2腹腔注射 b FGF- MAb的裸鼠生存时间较对照组平均延长 10 d;3b FGF- MAb组肠系膜上肿瘤种植灶的数目和重量分别是对照组的 70 .6 %和 6 9.2 % ;4 b FGF- MAb组腹腔移植瘤 MVD是对照组的 6 2 .8%。结论 b FGF- MAb能明显抑制卵巢癌的生长和肿瘤血管生成 。

多囊卵巢综合征患者红细胞胰岛素受体体内自身磷酸化研究

目的了解多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素受体在人体内环境不同胰岛素水平下自磷酸化状况及其与胰岛素抵抗(IR)状态的相关关系。方法40例PCOS患者以空腹胰岛素水平>15mIU/L为高胰岛素血症(HI)标准,按年龄、体重指数配对原则将其分为HI-PCOS组(n=20)和无HI(non HI-PCOS)组(n=20),并按年龄、体重指数配对设立有排卵及规律月经的育龄女性为正常对照组(n=20)。分别测定卵泡早期血清性激素水平,做75g口服葡萄糖耐量实验(OGTT)及胰岛素释放实验,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。并在OGTT的5个时间点(空腹及口服75g葡萄糖后30、60、120和180min)抽血获红细胞,夹心ELISA法分别检测红细胞的总胰岛素受体(TIR)及酪氨酸残基磷酸化胰岛素受体(APIR)。体内不同胰岛素水平下的胰岛素受体自身磷酸化程度用APIR/TIR表示。结果HI-PCOS组在OGTT5个时间点的红细胞APIR/TIR均低于non-HI-PCOS组及对照组,但仅口服75g葡萄糖后60min差异有统计学意义(P<0.05);non-HI-PCOS组与对照组的红细胞APIR/TIR无差异(P>0.05)。结论伴高胰岛素血症PCOS患者存在胰岛素受体体内自磷酸化异常,这可能是PCOS患者发生IR的分子机制之一。

阿霉素人血清白蛋白微球的制备及其性质的初步研究

目的 制备载阿霉素人血清白蛋白微球 (ADR- HSA- MS) ,并研究其药剂学性质和体外对肿瘤细胞的细胞毒作用。方法 以阿霉素 (ADR)、人血清白蛋白 (HSA)为材料 ,采用乳化高温固化法制备 ADR- HSA- MS;采用光镜、电镜技术观察 ADR- HSA- MS的形态 ;采用胃蛋白酶消化法、动态透析法分别测定 ADR- HSA- MS的载药量 ,体外释药性质 ;采用 MTT比色分析法测定 ADR- HSA- MS对人肝癌株 SMMC- 772 1细胞的细胞毒作用。结果ADR- HSA- MS圆球状 ,表面较光滑 ,平均粒径为 1.2 μm,外观为红色 ;ADR- HSA- MS表观载药量为 2 .73% ,有效载药量为 1.6 9% ,释药呈持续缓慢状态 ,至 5 d时 ,其累积释药分数达 5 0 % ,最大累积释药分数为 6 5 % ;ADR- HSA-MS与 SMMC- 772 1人肝癌细胞孵育 4 d后 ,对 SMMC- 772 1细胞具明显杀伤作用 ,在 0 .3～ 2 .5 μg/ m l ADR质量浓度范围内呈一定剂量依赖性 ,其杀伤曲线与游离 ADR接近。结论 采用乳化高温固化法能制备出具缓释性质的载阿霉素人血清白蛋白微球。

人外周血中树突状细胞的诱导及鉴定

目的 从健康人外周血中诱导高纯度树突状细胞 (dendritic cell,DC)。方法 用贴壁法从健康人外周血获取单核细胞 ,对传统的诱导方法加以改进 ,经 GM- CSF(10 0 ng/ ml)和 IL- 4(5 0 0 U/ m l)持续诱导 7天 ,在此期间不再补充新的细胞因子、新鲜培养基和促成熟因子 ,以获取高纯度 DC。结果 经上述方法处理后 ,从健康人外周血中诱导出了大量高纯度 DC,其能高表达 HL A- 、 类分子、共刺激分子和粘附分子 ,显示出成熟 DC的特征。这些 DC能强烈诱导同种异体淋巴细胞的增埴 ,其内吞能力在第 3天达最高 ,之后明显下降。结论 本研究所建立的从外周血获取大量成熟 DC的方法经济、简便 ,为

KAI1基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌CaSki细胞体外增殖和侵袭能力的影响。方法通过脂质体转染技术,将真核表达质粒pCMV-KAI1导入低表达的宫颈癌CaSki细胞,免疫组化及实时荧光定量RT-PCR法检测转染前后细胞内KAI1蛋白和mRNA的表达,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭力小室测定KAI1基因对细胞增殖能力及侵袭能力的影响。结果转染目的基因的CaSki细胞中KAI1 mRNA水平及蛋白表达明显增强(P<0.05),细胞体外增殖能力明显弱于未转染组和转染空载体组(P<0.05),细胞穿膜数量明显少于未转染组和转染空载体组(P<0.05)。结论肿瘤转移抑制基因KAI1对宫颈癌细胞体外增殖及侵袭能力有一定抑制作用。

重组复合高效干扰素抗人乳腺癌细胞的体外实验研究

目的了解重组复合高效干扰素(rSIFN-co)在体外抗乳腺癌细胞的作用,以及与抗肿瘤药物合用的协同抗肿瘤作用,并初步探讨其可能的作用机理。方法采用MTT比色法和流式细胞仪技术,检测rSIFN-co、干扰素(干复津)、抗肿瘤药物(盐酸表柔比星),以及联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞及人乳腺癌阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞增殖、凋亡的影响,采用免疫组化SABC法检测经过各药物处理的MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞中P53、Bcl-2、CerbB-2蛋白的表达。结果rSIFN-co对MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞均具有增殖抑制、促进凋亡作用,作用强于干复津,且有剂量依赖性及时间依赖性倾向;rSIFN-co与盐酸表柔比星联用具有协同增效的作用;rSIFN-co可下调MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞P53、CerbB-2蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达水平。结论rSIFN-co诱导MCF-7细胞及MCF-7/ADR细胞凋亡、抑制其增殖作用可能与下调肿瘤细胞P53、CerbB-2蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达水平有关。

中国成都汉族与泰国人群P-选择素基因遗传多态性的研究

目的研究P-选择素(P-selectin)基因启动子区-2123C/G、-1969G/A、-1817T/C和第十三外显子Thr715Pro多态性在中国成都汉族与泰国人群中的分布,同时比较不同种族间P-selectin基因型及等位基因频率分布的差异。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)测定法检测120名成都汉族人和110名泰国人P-selectin基因-2123C/G、-1969G/A、-1817T/C和Thr715Pro多态性,比较两组人群4个位点的基因型和等位基因的分布频率,并结合文献与其他种族研究结果进行比较。结果P-selectin基因启动子区-2123C/G、-1969G/A、-1817T/C多态性分布在成都汉族与泰国人群中比较差异无统计学意义(P>0.05);但与其他种族人群(英国、美国)比较,3个位点的基因型及等位基因频率分布的差异具有统计学意义(P<0.001)。本次实验未检测到Thr715Pro基因多态性。结论中国成都汉族与泰国人群中存在P-selectin基因启动子区-2123C/G、-1969G/A、-1817T/C多态性,这种基因多态性分布在成都汉族与泰国人群中比较无明显差异,与其他种族人群比较则存在显著性差异。

番茄红素对大鼠肺纤维化的干预作用

目的观察番茄红素对博莱霉素诱导的大鼠实验性肺纤维化的干预作用,并探讨其作用机制。方法SD大鼠60只,雌雄不拘,随机分为正常对照(C)、模型(M)和番茄红素干预(L)3组。M和L组用博莱霉素经气管注射建立大鼠肺纤维化模型,造模当日起L组用番茄红素灌胃(5ml/kgbw,1/d),共28d,D3、D7、D14和D28处死大鼠,采集肺组织及血浆,测定肺系数和血浆MDA含量及SOD活性;肺组织作常规固定后进行HE和Masson染色,对肺泡炎症及肺纤维化程度评级。结果大鼠实验性肺纤维化模型成功;与M组相比,L组肺系数(D14、D28P<0.05)、肺泡炎(D7、D14P<0.05及肺纤维化等级(D14、D28P<0.05)降低,血浆MDA含量低于M组,D3有显著性差异(P<0.05),而血浆SOD活性高于M组,D28有显著性差异(P<0.05)。结论番茄红素能部分减轻博莱霉素诱导的大鼠实验性肺纤维化程度,其作用机制可能与番茄红素的抗氧化功能有关。

抗人SOCS3单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的制备高效价的抗人SOCS3单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力。结果筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blotting显示在相对分子质量为6.3×104处出现特异性反应带。杂交瘤细胞培养上清效价为1∶640,腹水效价为1∶25600,Ig亚类为IgG2a,相对亲和力达4.84×106L/mol。结论成功制备能特异性识别人SOCS3的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS3在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础。