一株水源分离军团菌的分子生物学鉴定和系统发育学及毒力分析

目的对我室2009年分离获得的一株疑似军团菌菌株(编号为CD-1)进行分子生物学鉴定、系统发育学及毒力分析。方法对CD-1株进行PCR扩增军团菌属特异性16SrRNA作为分子生物学鉴定,扩增其rpoB基因片段并测序进行系统发育学分析。对CD-1株进行PCR扩增以检测其毒力基因mip,并用CD-1株感染BABL/c小鼠以研究其毒力。结果 PCR扩增军团菌属特异性16SrRNA显示CD-1株在650bp处有特异条带,说明CD-1株为一株军团菌,系统发育学分析显示CD-1株与长滩军团菌(Legionella longbeachae)聚为一枝,其后验概率为1.00。对CD-1株进行军团菌毒力基因mip扩增,扩增产物在650bp处有特异条带,显示CD-1株携带有mip基因。动物实验结果显示当感染菌量浓度达到107 cfu/mL时,实验组小鼠全部死亡。结论 CD-1株为一株长滩军团菌,对BALB/c小鼠具有较强毒力,并且有可能对人体致病。这是四川地区分离获得的首株长滩军团菌,也是国内首次对水源分离军团菌毒力进行报道。

结核分枝杆菌三种特异性抗体ELISA检测方法的建立

目的 建立以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68为包被抗原检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA检测方法。方法 利用本室构建并纯化的结核分枝杆菌特异性抗原蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68,建立结核分枝杆菌特异性抗体检测的间接ELISA检测方法:ESAT6-ELISA、CFP10-ESAT6-ELISA、ESAT6-PPE68-ELISA。并与PPD-ELISA同时检测220例结核病人血清、30例非结核呼吸疾病病人血清和50例健康人群血清,分别对三种方法的敏感性与特异性进行统计学分析。结果 ESAT6-ELISA的敏感性为25%,特异性为95%;CFP10-ESAT6-ELISA的敏感性为45%,特异性为93%;ESAT6-PPE68-ELISA的敏感性为48%,特异性为85%。结论 三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的敏感性均低于PPD-ELISA,但三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的特异性均高于PPD-ELISA,其中CFP10-ESAT6-ELISA检测的效果最佳,PPE68可作为结核特异性诊断的候选抗原。