同型半胱氨酸对内皮细胞一氧化氮合酶系统的损伤机制及叶酸的拮抗效应

本实验探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮合酶(eNOS)的损伤机制及叶酸(FA)的拮抗效应。HUVEC原代培养,传至第3代后,将其与不同浓度Hcv(10μmol/L、30μmol/L、100μmol/L和300μmol/L)、FA(100μmol/L)或两者联合共同培养72h,用RT-PCR和免疫组织化学技术分别估测细胞eNOS mRNA水平及eNOS蛋白质量;高效液相色谱测定细胞内不对称二甲基精氨酸(ADMA)含量;并分别测定二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)、eNOS活性及一氧化氮(NO)含量。HUVEC与不同浓度Hcy培养72h后,eNOS mRNA和蛋白质表达皆受到抑制;eNOS活性降低;NO生成减少。同时,DDAH活性降低;细胞内ADMA含量呈剂量依赖性增加。加入FA后,eNOS蛋白质水平上调;eNOS活性增强;NO生成增多。同时,DDAH活性增强,ADMA蓄积减少;但eNOS mRNA表达没有改变。Hcy对内皮细胞eNOS的损伤机制涉及eNOS酶蛋白和eNOS的基因表达两个层面,其对eNOS酶蛋白的抑制机制可能通过DDAH-ADMA通路,FA可拮抗Hcy对eNOS酶蛋白的抑制作用,显示出对HHcy有一定的保护作用。但FA对HHcy所导致的eNOS基因表达的抑制无保护效应。

恶性肿瘤组织的氧化还原态及其抗氧化能力的改变

目的探讨恶性肿瘤组织的氧化-还原态及其抗氧化能力的改变。方法42例原发性消化道恶性肿瘤(食管癌13例、胃癌14例及结直肠癌15例),以其相对应的癌旁正常粘膜组织为对照,测定其谷胱甘肽氧化还原对(GSH、GSSG)的含量及辅酶Ⅱ氧化还原对(NADPH、NADP+)的含量,并据此计算出GSH/GSSG、NADPH/NADP+比值以及GSH/GSSG氧化还原电位值、NADPH/NADP+氧化还原电位值。结果癌组织中的GSH、NADPH含量明显高于癌旁组织(P<0.01)。GSH/GSSG、NADPH/NADP+的氧化-还原电位轻度还原偏移(P<0.05)。而GSSG含量及NADP+含量则与对照组无明显差异(P>0.05)。结论消化道恶性肿瘤组织的GSH、NADPH含量明显升高,提示其抗氧化能力明显增强;而在此基础上,其氧化-还原电位仅较癌旁组织轻度偏向还原方向,提示癌组织内仍存有较明显的氧化应激态。

间隔区寡核苷酸分型技术用于结核分枝杆菌多重感染的初步研究

目的初步评价间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)技术在鉴定结核分枝杆菌多重感染中的应用。方法选取结核分枝杆菌临床分离株,5μm孔径滤膜过滤法制备单个细菌菌悬液,平板接种37℃培养,选取生长良好的单个菌落培养增菌,提取基因组DNA,Spoligotyping进行基因分型鉴定,比较临床分离株与相应的单克隆分离株的分型结果。结果共选取32株结核分枝杆菌临床分离株,获得306个单克隆分离株。Spoligotyping分型鉴定结果显示30株结核分枝杆菌临床分离株与相应的单克隆分离株的分型结果一致,2株临床分离株的单克隆分离株呈现了多种基因型,多重感染率为6.25%。结论 Spoligotyping可用于快速,有效地区分结核分枝杆菌多重感染。

银杏叶提取物对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究银杏叶提取物(EGb)对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞损伤的保护作用。方法:用硝酸还原酶法和化学比色法测定细胞NO生成量及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性;并分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术检测同型半胱氨酸和EGb对内皮细胞eNOS mRNA和蛋白表达的影响。结果:同型半胱氨酸使内皮细胞eNOS mRNA和蛋白表达减少,eNOS活性降低,NO生成减少。与同型半胱氨酸组相比,EGb干预组可上调eNOS mRNA和蛋白的表达,增强eNOS活性,使NO生成增多。结论:同型半胱氨酸通过下调eNOS表达损伤内皮细胞功能,而EGb可预防这一影响从而对内皮细胞产生保护作用。

蔓越莓抗菌作用研究进展

蔓越莓(Vaccinium macrocarpon Ait.)是北美三大水果之一。一直以来,蔓越莓因其预防泌尿道感染的功能而受到广泛关注。大量的研究表明蔓越莓具有抑菌、抗细菌黏附等作用。本综述主要涉及其化学成分、抑菌作用、抗黏附作用及其机制。

抗体催化的臭氧生成及其在动脉粥样硬化发病中的潜在作用

本文采用靛蓝胭脂红褪色反应检测抗体是否能催化经佛波酯(PMA)激活的THP-1单核细胞产生臭氧(O_3),并借助荧光分光光度法检测细胞内胆固醇的积聚,以及高效液相色谱法(HPLC)分析细胞内胆固醇的臭氧氧化产物5,6-secosterol生成的情况,探讨抗体催化水的氧化作用对动脉粥样病变形成潜在的影响。结果显示,THP-1单核细胞经人IgG、PMA共同孵育后,显著产生了O_3的化学信号,对靛蓝胭脂红具有明显的褪色作用,过氧化氢酶能加强这种褪色反应,而乙烯苯甲酸具有显著的抑制作用；THP-1单核细胞经人IgG、PMA及低密度脂蛋白(LDL)共同孵育后,其细胞内积聚的总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)及胆固醇酯占总胆固醇的比值均明显增多,并显著产生了胆固醇的臭氧氧化产物5,6-secosterol,乙烯苯甲酸对它们均有抑制效应。以上结果表明：激活的THP-1单核细胞在抗体的催化下具有产生臭氧的能力,可能是动脉粥样硬化形成过程中一种新的重要机制。

婴儿双歧杆菌黑色素瘤靶向性的探讨

目的 :探讨婴儿双歧杆菌对黑色素瘤组织的靶向性。方法 :用3H TdR标记婴儿双歧杆菌 ,进行放射性体内参入示踪分析 ;组织切片革兰氏染色 ,进行图像分析。结果 :仅瘤组织内放射性强度随时间延长持续增强 ,且存在大量革兰氏染色阳性紫蓝色深染区。结论

N-乙酰-L-半胱氨酸对H_2O_2引起的血管内皮细胞损伤的拮抗效应

目的 观察N 乙酰 L 半胱氨酸 (NAC ,痰易净 )对H2 O2 引起的血管内皮细胞损伤的影响。方法 通过测定乳酸脱氢酶 (LDH)释放率和脂质过氧化物 (LPO)值 ,MTT法测定细胞增殖活性 ,流式细胞术测细胞凋亡率 ,研究体外培养的人脐静脉内皮细胞在不同浓度H2 O2 作用下的细胞损伤及凋亡 ,以及NAC对抗细胞损伤及凋亡的效应。结果 随着H2 O2 浓度增加 ,细胞凋亡率明显增高 ,细胞增殖活力降低 ,细胞脂质过氧化物生成增加 ,LDH释放率增加 ,并在一定范围内呈剂量 效应关系。在H2 O2 中同时加入 0 5mmol/LNAC ,可使细胞活力增强 ,凋亡率降低 ,细胞脂质过氧化物生成显著减少 ,LDH释放率降低。结论 NAC可以对抗H2 O2 引起的血管内皮细胞损伤。

内源性抗生素肽HMGN2抗细菌内化作用及机制初探

目的探讨HMGN2抗细菌内化作用及其机制。方法利用生物学在线软件对人及常见医学模式生物HMGN2进行生物信息学分析;用免疫打点杂交技术检测临床标本HMGN2表达;设置以HMGN2预处理Klebsiella pneumoniae细菌后感染细胞组(简称共孵育组)和HMGN2预刺激细胞后再感染KP组(简称预刺激细胞组),平板菌落计数法检测两种状态下胞内活菌数;用荧光显微镜、流式细胞术观测各组细胞微丝形态和构成变化,用光镜观测HMGN2处理菌及未处理菌细胞骨架表型变化。结果不同属种生物HMGN2具有很高同源性,带阳离子电荷,具有α螺旋结构,分子量小于10kD;在炎性和非炎性标本中均可见HMGN2阳性信号,而在炎性标本中信号强度更大。HMGN2共孵育组和HMGN2预刺激细胞组胞内活细菌数与对照组相比较都明显减少,但共孵育组比预刺激细胞组胞内活菌数减少更为明显;荧光显微镜观察显示,两组微丝均有解聚成颗粒状向核周聚集现象,流式细胞术检测发两组细胞骨架微丝蛋白的平均荧光量减少,而油镜下HMGN2处理菌与未处理菌比较,其菌体长短径无明显的变化。结论 HMGN2属于内源性抗菌肽家族分子,可能通过促进细胞内微丝蛋白解聚成单体,减弱了KP内化入膀胱上皮细胞。

腺病毒载体在肿瘤基因治疗和基因疫苗领域的应用研究进展

腺病毒载体是目前应用最为广泛的基因治疗病毒载体之一。相较其他病毒载体,腺病毒具有较高的基因转导效率,广泛的组织亲和性,不整合入宿主基因组等优点。腺病毒可以被改造为复制缺陷病毒载体和选择性复制的溶瘤病毒载体。腺病毒载体较强的免疫原性使其可以被应用于基因疫苗和抗癌治疗中。目前众多的临床试验都证实了腺病毒载体在上述治疗试验中的安全性和有效性。

卵巢癌多药耐药治疗的研究进展

卵巢癌化疗多药耐药(multidrug resistance,MDR)的发生和发展是多基因参与的极其复杂的过程,其发生机制目前尚不十分明确。既往的研究着重在开发小分子抑制剂靶向多药耐药基因编码的P-糖蛋白逆转多药耐药,但效果不佳。本文总结了近年来对卵巢癌多药耐药发生机制的研究进展以及克服卵巢癌治疗中MDR问题的新方案,包括新型的P-糖蛋白抑制剂,靶向肿瘤干细胞和微小核糖核酸(miRNAs),自噬信号通路调节等,为临床卵巢癌多药耐药的治疗提供参考。

活性氧促进中性粒细胞与骨髓基质细胞黏附及机制初探

目的:探讨活性氧对中性粒细胞与骨髓基质细胞(BMSCs)黏附的影响及其机制。方法:采用密度梯度离心法从小鼠胫骨和股骨分离骨髓中性粒细胞,并用DMSO诱导HL60细胞分化为成熟中性粒细胞(d HL60细胞)。利用分光光度法检测CFDA-SE标记的小鼠骨髓中性粒细胞和d HL60细胞在H_2O_2刺激下与BMSCs的黏附。利用荧光显微成像技术和Western blot检测携带去谷胱甘肽化酶谷氧还蛋白1(Grx1)表达载体的慢病毒感染的d HL60细胞中Grx1的表达。PCR检测Grx1敲除小鼠的基因型。结果:(1) Diff-Quick染色显示,分离的骨髓中性粒细胞纯度高于90%; H_2O_2处理后,中性粒细胞与BMSCs黏附率显著增加(P <0. 01)。(2)荧光显微镜观察和Western blot结果表明,Grx1稳转株d HL60细胞中Grx1的表达水平较空载体稳转株细胞显著增加;体外黏附实验表明过表达Grx1的d HL60细胞较对照组d HL60细胞,在相同H_2O_2浓度下,黏附到BMSCs程度显著下降(P <0. 01)。(3)经PCR鉴定,实验所用基因敲除小鼠在全基因水平上未见Grx1;且敲除Grx1的小鼠较野生型小鼠,在相同浓度H_2O_2刺激下,其骨髓中性粒细胞与BMSCs黏附率显著升高。(4)血管细胞黏附分子1(VCAM-1)抗体预处理BMSCs后,由H_2O_2引起的d HL60与BMSCs之间的黏附增强回复到了静息水平。结论:活性氧促进骨髓中中性粒细胞与BMSCs的黏附,其可能的机制是通过诱导VCAM-1黏附信号的S-谷胱甘肽化。