槲皮素、芦丁及葛根素抑制LDL氧化修饰作用的研究

目的:研究黄酮类中药槲皮素、芦丁及葛根素抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰的作用。方法:按一次性密度梯度超速离心法分离人血清LDL,分别加入5.0μmol.L-1槲皮素、芦丁及葛根素与LDL温育3 h,然后利用Cu2+介导体外氧化修饰脂蛋白的方法,观察LDL氧化修饰不同时间,其A234,相对电泳迁移率(REM),硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)及载脂蛋白羰基含量的动力学改变,并与对照组比较。结果:Cu2+介导LDL氧化修饰时,在2,4,6,8,12,24 h后,其A234,REM,TBARS及载脂蛋白羰基含量均逐步增加;加入5.0μmol.L-1槲皮素、芦丁及葛根素的实验组,Cu2+介导LDL的氧化修饰分别延迟2~6 h,2 h和2 h,其A234,REM,TBARS及载脂蛋白羰基含量较对照组降低;槲皮素实验组分别较对照组降低27.7%~49.6%,24.1%~38.6%,19.8%~34.3%及36.4%~56.8%;芦丁实验组分别降低12.8%~39.3%,15.7%~32.0%,19.0%~28.1%及12.8%~50.3%;葛根素实验组分别降低3.3%~19.2%,7.0%~22.5%,19.5%~22.8%及8.6%~47.0%。结论:槲皮素、芦丁及葛根素均可抑制Cu2+诱导的LDL的氧化修饰,且槲皮素的抗氧化作用较芦丁及葛根素强。

异鼠李素及橙皮甙抑制LDL氧化修饰作用的研究

目的:研究黄酮类中药异鼠李素及橙皮甙是否具有抑制LDL氧化修饰的作用。方法:按一次性密度梯度超速离心法分离人血清LDL,分别加入5.0μmol/L异鼠李素及橙皮甙与LDL温育3 h,然后利用Cu2+介导体外氧化修饰脂蛋白的方法,观察LDL氧化修饰不同时间,其A234、REM、TBARS及蛋白质羰基的动力学改变,并与对照组比较。结果:Cu2+介导LDL氧化修饰时,在2、4、6、8、12及24 h后,其A234、REM、TBARS及蛋白质羰基含量均逐步增加;加入5.0μmol/L异鼠李素及橙皮甙的实验组,Cu2+LDL的氧化修饰分别延迟2~4 h和2 h,其A234、REM、TBARS及载脂蛋白羰基含量较对照组降低;异鼠李素实验组分别较对照组降低23.5%~40.4%、20.5%~37.7%、18.6%~30.3%及20.1%~52.4%(P<0.001);橙皮甙实验组分别降低11.1%~21.2%、9.2%~28.3%、13.7%~21.3%及5.0%~43.8%(P<0.001,P<0.01,P<0.001及P<0.05)。结论:异鼠李素及橙皮甙均可抑制Cu2+诱导的LDL的氧化修饰,且异鼠李素的抗氧化作用较及橙皮甙强。

Aurora A表达对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究Aurora A表达增高对人前列腺癌细胞LNCaP生物学行为的影响,以了解其在人前列腺癌发生发展中的作用。方法克隆Aurora A全长基因,将其转染入LNCaP细胞中表达,采用四唑盐(MTT)法细胞增殖实验检测Aurora A表达升高的阳性细胞生长情况,采用改良的Transwell侵袭小室方法检测细胞侵袭能力;同时与转染空质粒(pcDNA3.1)细胞和未转染细胞进行比较。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Full Length Aurora A。Aurora A高表达的LNCaP细胞增殖速度较空质粒转染细胞和未转染细胞快,培养3d后LNCaP-Aurora A组细胞较pcDNA3.1质粒转染细胞及未转染的LNCaP细胞增多,差异有统计学意义(P<0.05)。在体外细胞移动实验中,LNCaP-Aurora A组细胞也较另两组细胞表现出更强的穿膜能力(P<0.01)。结论Aurora A表达增高与人前列腺癌细胞的恶性表型具有密切相关性,Aurora A在人前列腺癌发生发展中可能发挥重要作用。

表达sFlt-1的小鼠骨髓间充质干细胞介导的抗肿瘤作用研究

目的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于骨髓中的一种具有多向分化潜能和很强增殖能力的细胞。经静脉输注的MSCs能特异性地聚集于新生组织,如伤口和肿瘤等,本实验将MSCs作为基因治疗靶向载体,研究其在肿瘤组织内的抗血管作用。方法从雄性小鼠股骨骨髓中分离和培养MSCs,用流式细胞仪检测CD34、CD29、CD44的表达。再用sFlt-1(VEGF-R1)重组腺病毒感染后,给荷瘤小鼠静脉注射。结果间充质干细胞聚集在肿瘤内表达sFlt-1,使得肿瘤血管生成受抑制、肿瘤细胞凋亡增加、肺转移灶减小、生存时间延长。结论本研究表明,MSCs作为基因的运载工具在抗肿瘤领域可能有一定的应用价值。

Aurora A在人前列腺癌中的表达

目的观察Aurora A在人前列腺癌中的表达情况,探讨Aurora A是否在前列腺癌发生发展中起一定作用。方法采用RT-PCR、免疫组织化学和Western blot,检测在前列腺癌组织及其细胞系中Aurora A mRNA和蛋白表达。同时,在前列腺癌细胞系PC3中导入靶向Aurora A mRNA的DNA核酶,观察抑制Aurora A对前列腺癌细胞生长的影响。结果91%的前列腺癌组织和三种前列腺癌细胞系(PC3、LNCaP和Du145)中Aurora A表达阳性,而且,靶向Aurora A mRNA的DNA核酶导入PC3细胞后抑制了Aurora A表达,使PC3细胞停滞在G2/M期,并促进细胞凋亡。结论Aurora A可能在前列腺癌形成中起一定作用,Aurora A可望成为前列腺癌治疗中有价值的靶点。

抗AIB1-N单克隆抗体的制备及鉴定

目的获得有生物活性的抗乳腺癌扩增性抗原1氮端(amplifiedinbrestcancer1-Nterminal,AIB1-N)单克隆抗体。方法以谷胱甘肽转硫酶耦联的抗乳腺癌扩增性抗原1氮端蛋白(GST-AIB1-N)为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AIB1-N单克隆抗体,用间接ELISA和Western-blot鉴定其亚类和抗原结合特异性。结果成功筛选出一株稳定分泌抗AIB1-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类为IgG1,经Western-blot鉴定该McAb特异性高,亲和力强。结论成功制备了抗AIB1-N单克隆抗体,为深入研究AIB1的表达及临床应用提供了有力的工具。

Aurora A表达与人前列腺癌细胞对紫杉醇敏感性的相关性研究

目的探讨前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性的相关性,明确Aurora A表达是否影响紫杉醇对前列腺癌的治疗效果。方法以激素非依赖性前列腺癌细胞Du145为研究对象,通过转染Aurora A全长基因得到稳定高表达Aurora A的细胞系Du145-Aurora A,细胞用不同浓度紫杉醇处理,用MTT细胞增殖实验检测细胞生长抑制率,用流式细胞仪分析细胞凋亡情况,比较Aurora A表达上调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化。同时,用核酶技术使细胞Aurora A表达下调,检测Aurora A表达下调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化。结果Aurora A表达上调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均降低(P<0.01),而Aurora A表达下调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均增高(P<0.01)。结论人前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性具有相关性,抑制Aurora A可望提高紫杉醇对前列腺癌的治疗效果。

产前诊断技术及其临床应用

产前诊断是实现优生预防缺陷儿出生的重要手段,其为可能出现遗传病或与遗传因素有关的疾病以及具有其他导致畸胎因素的高风险家庭提供了充足可靠的信息,使他们能够在妊娠期对异常的胎儿作出自己适当的选择。随着我国产前诊断技术的不断发展以及产前诊断在国内诸多医院的逐步开展,有效的降低了部分先天缺陷胎儿的出生率。但目前采用的产前诊断技术也存在诸多问题,诊断水平还远远不能达到优生优育的需要,因此,进一步提高现有产前诊断技术的特异性和敏感性将是今后产前诊断研究的重要方向。

异鼠李素及橙皮甙抑制HDL氧化修饰作用的研究

目的研究异鼠李素及橙皮甙对高密度脂蛋白(HDL)氧化修饰的抑制作用。方法按一次性密度梯度超速离心法分离人血清HDL,分别加入5.0μmol/L异鼠李素及橙皮甙温育3h,然后利用Cu2+介导体外氧化修饰脂蛋白的方法,观察HDL氧化修饰不同时间,其234nm吸光度(A234)、相对电泳迁移率(REM)、硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)及蛋白质羰基的动力学改变。结果Cu2+介导HDL氧化修饰2、4、6、8、12及24h后,其A234、REM、TBARS及蛋白质羰基含量均逐步增加;加入5.0μmol/L异鼠李素及橙皮甙的实验组,Cu2+介导HDL的氧化修饰分别延迟2~6h和2~4h;其A234、REM、TBARS及载脂蛋白羰基含量较对照组降低,异鼠李素实验组分别降低16.3%~46.9%、0.6%~25.2%、9.2%~28.4%及11.6%~45.2%;橙皮甙实验组降低1.5%~30.0%、1.4%~13.3%、6.6%~18.8%及14.4%~62.0%。结论异鼠李素及橙皮甙可抑制Cu2+诱导的HDL的氧化修饰,且异鼠李素的抗氧化作用比橙皮甙强。

儿童急性淋巴细胞白血病单个核细胞转铁蛋白受体2表达及其意义

目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿单个核细胞转铁蛋白受体2(TFR2)基因表达情况,分析其与儿童ALL不同预后因素的相关性。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应法测定56例新发ALL患儿和15例对照患儿骨髓或外周血单个核细胞TFR2相对表达量。结果泼尼松敏感组患儿TFR2相对表达量(中位数为0.0848)显著高于泼尼松不敏感组(中位数为0.0126,P=0.038)。低危组、中危组和高危组TFR2相对表达量的中位数分别为0.1677、0.0728和0.0125,差异具有统计学意义(P=0.003)。初诊时外周血白细胞(WBC)计数WBC<50×109/L、(50～100)×109/L和≥100×109/L3组患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0974、0.0294和0.0078,差异也具有统计学意义(P=0.013)。另外,B细胞ALL和T细胞ALL患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0636和0.0065,B细胞型TFR2表达水平显著高于T细胞型(P=0.004)。秩相关统计分析表明,ALL患儿单个核细胞TFR2表达量与初始外周WBC总数、外周血幼稚细胞比例、幼稚细胞绝对计数的秩相关系数分别为-0.398、-0.307、-0.421,具有负相关关系(P分别为0.003、0.022、0.001)。结论TFR2可能为儿童ALL一个新的分子生物学预后因素,在ALL患儿预后评估和指导个体化治疗方面可能具有临床应用价值。

子痫前期患者内皮素受体A基因G-231A多态性的研究

目的:探讨内皮素受体A(EDNRA)G-231A基因多态性与子痫前期有无关联。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP),对成都地区220例子痫前期患者(其中轻度71例,重度149例)和270例健康对照组孕妇EDNRA基因G-231A多态性进行检测。结果:子痫前期组和正常孕妇组EDNRA基因G-231A位点A等位基因频率分别为35.9%、31.3%,两组之间等位基因频率分布无显著差异(P>0.05);重度子痫前期组与轻度子痫前期组比较,A等位基因频率分别为36.3%、35.2%,二者无显著差异(P>0.05)。此外,子痫前期组和正常孕妇组不同基因携带者收缩压和舒张压水平无统计学差异(P>0.05)。结论:本研究未发现EDNRA基因G-231A多态性与子痫前期发病有关联。

白三烯受体拮抗剂和激素对哮喘小鼠精氨酸酶-Ⅰ转录水平影响的研究

目的观察哮喘小鼠模型的病理特点及精氨酸酶-I在哮喘小鼠中的转录水平及白三烯受体拮抗剂和激素干预对精氨酸酶-I转录水平的影响。方法建立小鼠哮喘模型;实验分为对照组、哮喘组、孟鲁司特(MK)干预组、地塞米松(DXM)干预组;图像分析肺内支气管平滑肌厚度;阿尔新兰染色,观察粘液分泌情况;半定量PCR检测精氨酸酶-I mRNA水平。结果哮喘组出现管壁增厚、平滑肌增生、粘液分泌增加、炎症细胞浸润等特征,精氨酸酶-I mRNA水平明显增高;MK组、DXM组与哮喘组比较,炎症反应轻微,平滑肌增生、粘液分泌不明显;DXM组精氨酸酶-mRNA水平降低,与哮喘组比较差异有显著性。结论少量、多次变应原吸入可导致气道炎症和重构,精氨酸酶-I在哮喘小鼠中的表达水平升高,DXM干预可降低精氨酸酶-I mRNA水平,一定程度上延缓气道重构的发生。

中国检测D-二聚体诊断试验的文献质量评价

目的评价国内关于D-二聚体的检测文献方法学质量。方法电子检索中国学术期刊网(1994～2006)和中国生物医学数据库(1978～2006),收集免疫比浊法、乳胶凝集法、胶体金免疫渗透法、酶联免疫吸附法检测D-二聚体的方法学研究文献。结果共检索到相关文献63篇,最终纳入7篇文献,其中仅有一篇文献可提取四格表数据进行临床诊断准确性评价。结论目前国内检测D-二聚体的诊断试验文献不多,质量较低。今后关于检测D-二聚体的研究应注重临床诊断敏感度和特异度的研究,以给读者提供更多有价值的信息。

微小病变型肾病综合征患儿肾组织HS结构分析

目的探讨微小病变型肾病综合征(minimal change nephritic syndrome,MCNS)患儿肾脏组织硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)结构特点。方法应用4种分别识别不同HS结构的抗-HS单克隆抗体:10E4、J M403、Hepss1和3G10,对13例MCNS患儿肾脏活检组织和5例正常肾组织进行间接免疫荧光染色,分析不同HS位点表达变化,同时用ELISA法测定MCNS患儿在活检时尿液HS浓度。结果MCNS极期患儿肾脏10E4、J M403和Hepss1表达IOD值分别为42.89±14.90、30.13±8.10和38.67±10.68,均较正常肾组织(50.16±9.14、35.55±7.01和47.58±10.03)降低(P<0.05),MCNS缓解期患儿肾脏Hepss1表达(38.26±8.83)较正常组降低,J M403肾脏表达(43.21±6.78)却较正常组升高,10E4表达变化无统计学意义,MCNS激素依赖组患儿10E4、J M403和Hepss1与正常对照组差异均无统计学意义;在3组MCNS患儿3G10肾组织表达与正常组相比无明显变化。MC-NS患儿尿液HS浓度(257.17±52.27)μg/mL较正常对照组(172.77±54.50)μg/mL增高(P<0.01)。结论肾脏HS丢失可能与MCNS蛋白尿发生有关;而肾脏HS丢失原因可能是由于MCNS患儿肾脏HS结构异于常人,比较容易与呼吸道病毒发生结合,从而直接和/或间接导致肾脏HS表达降低。

高凝状态大鼠主动脉表达上调新基因HCR2的克隆及生物信息学分析

目的获得高凝状态大鼠主动脉上调表达新基因HCR2的全长cDNA,并对该基因进行生物信息学分析。方法从高凝大鼠主动脉中表达显著上调的序列标签(EST,GenBank登录号为BQ901227)出发,利用cD-NA末端快速扩增(rapidamplificationofcDNAend,RACE)和巢式PCR技术扩增其全长cDNA,利用NCBI的数据库对其进行生物信息学分析。结果成功地获得了HCR2的全长cDNA,在GenBank中的登录号为AY234417。用RT-PCR证实HCR2是高凝大鼠表达上调基因。生物信息学分析显示,该基因cDNA序列全长为1275bp,定位于大鼠染色体4q11,编码由78个氨基酸组成、相对分子质量为8841.7、pI为8.59的蛋白质;无信号肽序列和跨膜序列,很可能是一种核蛋白;与已知蛋白无明显同源性。结论HCR2的成功克隆为进一步研究其生物学功能及其在高血凝的发生、发展中的作用奠定了坚实基础。

癌细胞转移扩散的分子机制

目的对癌细胞扩散的研究进行综述。方法广泛查阅今年国外癌细胞扩散机制的相关文献，进行回顾与综合分析。结果癌细胞扩散机制的研究进展为肿瘤分子靶向治疗提供了思路。结论肿瘤分子靶向治疗有广阔的应用前景。

机械心脏瓣膜置换术后孕早期肝素替代华法林抗凝治疗对妊娠结局影响的Meta分析

目的比较机械心脏瓣膜置换术后孕早期肝素替代华法林抗凝治疗对妊娠结局的影响。方法采用Cochrane系统评价方法,检索MEDLINE(1980～2007)、EMbase(1984～2004)、CBM(1980～2007)、CNK(I1994～2007)等电子资料库,由2名评价者共同评价纳入研究质量,对同质研究进行Meta分析。结果共纳入7个研究、469例患者、629孕次;其中5篇为回顾性研究,2篇为前瞻性研究。机械心脏瓣膜置换术后孕早期肝素替代华法林抗凝治疗与法华林治疗比较,母体不良结局发生率差异无统计学意义;胎儿不良结局发生率差异也无统计学意义。结论目前的研究证据表明,机械心脏瓣膜置换术后孕早期肝素替代华法林抗凝治疗并不能减少胎儿不良结局发生率。整个孕期口服小剂量华法林抗凝治疗,生产前停华法林改为肝素是可行的方案,但需与患者充分沟通。

中国人内源性高甘油三酯血症患者胆固醇酯转运蛋白基因Taq IB和-629C/A多态性

目的研究胆固醇酯转运蛋白(cholesterol ester transfer protein,CETP)基因多态性是否与中国人内源性高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia,HTG)有关联,为探讨本病的分子遗传基础提供依据。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法,对成都地区汉族214名正常人及135例HTG患者CETP基因TaqIB和-629C/A多态性位点进行分析。结果中国人CETP基因TaqIB多态位点B2等位基因频率为0.418,-629C/A多态位点A等位基因频率为0.479。HTG组和对照组TaqIB位点和-629C/A之间等位基因的频率差异无统计学意义(0.382vs0.418,P>0.05;0.489vs0.479,P>0.05)。两位点连锁关系分析提示其存在强的连锁不平衡(D′=0.881)。对照组TaqIB位点B2B2基因型携带者其血清高密度脂蛋白水平较B1B1携带者高(P<0.05),而低密度脂蛋白较B1B2者显著降低,按性别划分为亚组后,差异仅在对照组男性存在(P<0.05);对照组-629C/A位点CC基因型携带者其血清低密度脂蛋白水平较AC基因型者显著降低(P<0.01),而载脂蛋白AⅡ则显著升高(P<0.05)。两位点联合基因型的分析显示,对照组B2B2CC基因型携带者血清高密度脂蛋白较B1B1CC型者显著升高(P<0.05),B2B2CC型者与B1B1CC型者比较,甘油三酯水平显著降低(P<0.05)。结论中国成都地区汉族人CETP基因TaqIB多态性与血清高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量有一定关联,-629C/A多态性与血清低密度脂蛋白和载脂蛋白AⅡ有一定关联,但未见这些位点与内源性高甘油三酯血症有关。

中国人内源性高甘油三酯血症患者ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性研究

目的研究ATP结合盒转运子A1（ATP binding cassette Al，ABCA1）基因R219K多态性是否与中国人内源性高甘油三酯血症（hypertriglyceridemia，HTG）有关联，为探讨本病的分子遗传基础提供依据。方法应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析法，对成都地区309名汉族人（200名正常人和109例内源性高甘油三酯血症患者）ABCA1基因R219K多态性位点进行分析。结果中国人ABCA1基因R219K多态位点K等位基因频率在对照组和H他组分别为0．472与0．436；HTG组和对照组R219K位点之间基因型和等位基因的频率差异无统计学意义。对照组和HTG组KK基因型携带者血清高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）水平均较相应组RR基因型携带者显著升高[（1．48±0．45）mmol／L vs（1．27±0．29）mmol／L，P〈0．05；（1．07±0．30）mmol／Lvs（0．87±0．19）mmol／L，P〈0．05]；对照组RK型携带者血清甘油三酯水平较RR型携带者显著降低[（1．22±0．37）mmol／L vs（1．41±0．84）mmol／L，P〈0．05]，HTG组血清甘油三酯在RR、RK、KK型之间有逐渐降低的趋势[（3．82±2．02）mmol／L vs（3．42±1．67）mmol／L vs（3．33±1．43）mmol／L，P〉0．05]；HTG组K等位基因携带者（RK或KK型者）总胆固醇（total cholesterol，TC）／HDL-C比值均较RR型携带者显著降低（KK vs RK vs RR：4．82±1．28vs5．42±1．62vs6．33±1．70，P〈0．05）。结论ABCA1基因R219K多态性不仅与中国成都地区正常汉族人血清HDL-C、甘油三酯含量有关，而且还与内源性高甘油三酯血症患者血清HDL-C水平、TC／HDL-C比值相关联。

成都地区重度子痫前期患者雌激素受体α基因PvuⅡ和XbaⅠ多态性的研究

目的探讨雌激素受体α（estrogen receptor，ESRα）基因变异是否与重度子痫前期发病有关联。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法对成都地区131例重度子痈前期患者和223名健康孕妇ESRα基因PvuⅡ和XbaⅠ多态性进行分析。结果ESRα基因PvuⅡ位点T、C等位基因的频率在重度子痫前期组为0．580、0．420，在正常孕妇组为0．576、0．424；XbaⅠ位点A、G等位基因的频率在重度子痫前期组为0．763、0．237，在正常孕妇组为0．807、0．193。上述位点在两组间等位基因的频率差异均无统计学意义（P〉0．05）。经调整年龄和体重指数因素后，正常孕妇组PvuⅡ位点T等位基因携带者（TT或TC基因型者）收缩压水平显著高于CC纯合型者[（114.00±1．44）mmHg或（114．33±1．21）mmHg vs （108．62±1．91）mmHg，P〈0．05]；未见重度子痫前期组该位点对血压水平存在影响。也未见正常孕妇组和患者组XbaⅠ位点与血压水平有关联。结论ESRa基因PvuⅡ和XbaⅠ多态性与成都地区汉族人重度子痫前期的发病无关联，但PvuⅡ多态性与正常妊娠妇女的收缩压水平有关。