肺炎链球菌内肽酶O及表面黏附素A联合蛋白疫苗免疫保护作用研究

目的原核表达肺炎链球菌内肽酶O(PepO)及肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA),评价其作为疫苗候选蛋白的免疫保护效果。方法设计pepO,psaA目的基因片段的特异性引物,经PCR扩增,构建重组质粒pET28a(+)-pepO,pET28a(+)-psaA,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达,经纯化后获得高纯度目的蛋白PepO及PsaA。经黏膜免疫BALB/c小鼠制备其特异性抗血清,ELISA检测抗体效价,Western blot分析验证目的蛋白抗血清的特异性。将BALB/c小鼠随机分为阴性对照组、PepO组、PsaA组及PepO+PsaA联合免疫组,每组18只。构建不同血清型肺炎链球菌感染模型,评估目的蛋白单用及联合使用的免疫保护效果。结果成功制备并获得目的蛋白PepO及PsaA,经Western blot验证目的蛋白抗血清特异性好。PepO组和联合免疫组小鼠唾液中IgA及血清中IgG效价比较差异无统计学意义(P>0.05),但均高于PsaA组(P<0.05)。PepO组、PsaA组及联合免疫组对鼻腔感染肺炎链球菌D39及CMCC31436小鼠的保护率高于阴性对照组(P<0.05),且PepO组及联合免疫组对鼻腔感染肺炎链球菌D39小鼠的保护率高于PsaA组(P<0.05)。抗定植实验结果显示,与对照组比较,PepO组、PsaA组及联合免疫组均能有效降低肺炎链球菌CMCC31693及CMCC31207在小鼠鼻咽部和肺部的定植(P<0.05),且联合免疫组对降低肺炎链球菌CMCC31207在小鼠肺部的定植效果更好(P<0.05)。结论 PepO+PsaA联合疫苗经黏膜途径免疫小鼠后,较单用对小鼠有更好的保护作用,能有效抵抗肺炎链球菌在鼻咽部、肺部的定植,是一组较有开发潜力的蛋白疫苗。