脾酪氨酸激酶在血小板源性生长因子诱导的肺血管平滑肌细胞表型转换中的作用

目的 观察在血小板源性生长因子（PDGF-BB）诱导增殖的肺血管平滑肌细胞（VSMC）中,脾酪氨酸激酶（syk）的特异性抑制剂piceatannol对VSMC表型转换的影响.方法 以SD大鼠VSMC为基础,设空白对照组（不作任何处理）、对照组（PDGF-BB培养）和药物干预组（PDGF-BB和piceatannol培养）.[3H]-TdR掺入量测定DNA合成;透射电镜观察细胞超微结构变化;用RT-PCR和Western blot对syk、平滑肌α肌动蛋白（α-SM-actin）及平滑肌22α蛋白（SM22α）表达活性进行检测;激光共聚焦显微镜观察F-actin的改变,并对荧光的改变程度进行定量分析.通过以上方法 观察syk在VSMC增殖和表型转换过程中所起的作用.结果 和空白对照组比较,对照组[3H]-TdR掺入量明显升高（2429.25±253.36 vs.242.75±14.33,P〈0.01）;细胞超微结构呈现增殖状态;syk mRNA（1.70±0.25 vs.1.01±0.12,P〈0.05）和蛋白表达水平明显上升;α-SM-actin（0.10±0.00 vs.1.00±0.00,P〈0.01）和SM22α（0.18±0.00 vs.1.00±0.01,P〈0.01）的mRNA和蛋白表达水平明显下降;细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度降低（263.75±19.21 vs.1146.23±62.61,P〈0.01）.piceatannol可明显抑制这些生物学效应（药物干预组）.结论 piceatannol可以抑制血小板源性生长因子介导的VSMC内SM22α和α-SM-aetin的表达,从而抑制VSMC表型的转换,进而抑制VSMC的增殖.说明在VSMC中,PDGF-BB是通过syk信号通路对其表型转换进行调控,进而影响VSMC的迁移和增殖.

腺病毒介导的脾酪氨酸激酶对血管平滑肌细胞表型转换的影响

目的构建脾酪氨酸激酶(Syk)重组腺病毒并感染血管平滑肌细胞(VSMC),观察Syk对VSMC表型转换的影响。方法运用pDC315-GFP腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的基因Syk腺病毒重组质粒pDC315-GFP-Syk,经过包装、扩增、纯化后获得Syk重组腺病毒;测定病毒滴度并感染体外培养的大鼠VSMC,饥饿处理24 h,用Real-time PCR法和Western blot法对Syk、平滑肌22α蛋白(SM22α)及平滑肌α肌动蛋白(-αSM-actin)表达活性进行检测,观察Syk对平滑肌细胞表型转换的影响。结果成功构建携带Syk基因的重组腺病毒,纯化后滴度为1011pfu/mL,腺病毒感染VSMC后5 d,与空病毒组和对照组相比,Syk mRNA(741638.70±35213.53)和蛋白表达水平(2.14±0.71)增高(P<0.01);-αSM-actin(0.80±0.04)和SM22αmRNA表达水平(1.00±0.01)下降(P<0.05),同时,二者的蛋白表达水平也降低(0.61±0.10和0.18±0.06,P<0.01)。结论在VSMC中,Syk通过对其表型转换进行调控,进而影响平滑肌细胞的增殖和迁移。

基因多态性对人胎盘ABCG2基因mRNA及其蛋白表达的影响

目的评估单核苷酸多态位点对人胎盘ABCG2基因mRNA及蛋白表达的影响。方法选择2013年3月至5月在四川大学华西第二医院产科待产分娩的46例汉族正常孕产妇及新生儿为研究对象,收集其胎盘及脐带标本(本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,获得胎盘及脐带标本时均取得产妇及家属的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书)。其中,脐带标本用于胎儿DNA的提取,胎盘标本用于ABCG2基因的RNA及蛋白提取;通过测序确定ABCG2基因421C>A及34G>A多态位点的基因型;分别通过实时荧光定量(RT)-PCR及Western-blotting法获得ABCG2基因的mRNA及蛋白表达情况。对ABCG2基因421C>A及34G>A多态位点不同基因型之间mRNA及蛋白相对表达量进行比较。ABCG2基因421C>A及34G>A多态位点不同基因型之间孕产妇及新生儿一般临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结果对于421C>A多态位点,携带CC、CA、AA各基因型的胎盘标本的平均mRNA及蛋白表达水平比较,其差异均无统计学意义(F=1.060,3.051;P>0.05);对于34G>A多态位点,携带GG基因型的胎盘标本平均mRNA及蛋白表达水平较携带AA基因型的胎盘标本高,且差异均有统计学意(q=3.540,4.720;P<0.05),而携带GA基因型的胎盘标本,其平均mRNA及蛋白表达水平分别与携带其他2种基因型的胎盘标本比较,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 421C>A多态位点对人胎盘ABCG2基因mRNA及蛋白的表达无影响,而34G>A多态位点对人胎盘ABCG2基因mRNA及ABCG2蛋白(BCRP)的表达均有影响。

母体肥胖对人胎盘P-糖蛋白表达水平的影响

目的评估母体肥胖对人体胎盘中P-糖蛋表达水平的影响,为制定地高辛产前干预胎儿心力衰竭个体化给药方案提供理论依据。方法选择2013年3-6月,在四川大学华西第二医院产科分娩的25例孕期正常且足月妊娠的产妇为研究对象,按照孕前体质指数（BMI）将其分为：肥胖组（n=10,BMI≥27.9kg/m2）及正常组（n=15,18.5kg/m2≤BMI〈23.9kg/m2）。在孕妇分娩时获取其自然娩出的胎盘组织,对其采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blotting法检测P-糖蛋白的编码基因ABCB1的ABCB1mRNA及P-糖蛋白相对表达量,并进行统计学分析。本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象知情同意,并与之签署临床研究知情同意书。结果1肥胖组孕前及产时BMI均显著高于正常组,且差异有统计学意义（t=20.88,11.66;P〈0.001）;而两组间母亲年龄、孕龄、孕次及产次,新生儿性别构成比、出生体质量及身长,胎盘重量比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。2肥胖组胎盘组织中ABCB1mRNA及P-糖蛋白相对表达量均显著低于正常组,且差异有统计学意义（t=-2.146,P=0.043;t=-3.862,P=0.005）。结论母体肥胖可能使孕期用药时胎儿侧血药浓度升高,在制定地高辛产前干预胎儿心力衰竭个体化给药方案时,应减少母体肥胖者地高辛用药剂量。