流式细胞仪及其在医学研究中的应用

流式细胞术是20世纪70年代初发展起来的一项高新技术,常用来做细胞分析和细胞分选,在医学基础研究、临床诊断和检测中具有广泛的应用前景。本文以BD公司推出的BD FACSAriaⅡ流式细胞仪为例,分别从仪器的基本结构、工作原理、主要参数及数据处理、医学研究及应用、注意事项及日常保养这几个方面系统阐述流式细胞仪的使用。

乳铁蛋白对MPP^(+)诱导的帕金森病细胞模型炎症损伤的保护作用及机制研究

目的探讨外源性乳铁蛋白对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP^(+))诱导的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞帕金森病(PD)模型炎症损伤的保护作用及其机制。方法以250μmol/L的MPP^(+)诱导N2a细胞损伤构建PD细胞模型,将模型随机分为对照组、乳铁蛋白组、MPP^(+)组和乳铁蛋白+MPP^(+)组。采用CCK-8法检测细胞存活率;Annexin FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst33342染色检测细胞早期凋亡情况;检测各组的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞IL-4、IL-6、IL-13、IL-1β、TNF-αmRNA的表达;Western blotting检测不同浓度MPP^(+)(0、100、250、500、1000μmol/L)N2a细胞的酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)蛋白的表达,检测各组的Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK蛋白的表达。结果MPP^(+)组细胞凋亡率较对照组上升(P<0.05),乳铁蛋白+MPP^(+)组细胞凋亡率较MPP^(+)组下降(P<0.05);MPP^(+)组细胞核亮染阳性数目较对照组增加(P<0.05),而乳铁蛋白+MPP^(+)组亮染阳性数目较MPP^(+)组减少(P<0.05);与对照组比较,MPP^(+)组Bax蛋白相对表达量升高(P<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量减少(P<0.05),Cleaved Caspase-3/Caspase-3相对表达量升高(P<0.05);与MPP^(+)组比较,乳铁蛋白+MPP^(+)组Bax蛋白相对表达量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05),Cleaved Caspase-3/Caspase-3相对表达量降低(P<0.05)。与MPP^(+)组比较,乳铁蛋白+MPP^(+)组TH和DAT蛋白相对表达量升高(P<0.05),GSH-Px活性升高,MDA水平下降(P<0.05)。与MPP^(+)组比较,乳铁蛋白+MPP^(+)组促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-αm RNA相对表达量降低,抑炎因子IL-4、IL-13 mRNA相对表达量升高(P<0.05)。与对照组比较,MPP^(+)组p-p38、p-JNK和p-ERK蛋白相对表达量升高,p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK/ERK比值增加(P<0.05);与MPP^(+)组比较,乳铁蛋白+MPP^(+)组p-p38、p-JNK和p-ERK蛋白相对表达量降低,p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK/ERK比值降低(P<0.05)。结论乳铁蛋白可能抑制MAPKs信号通路的活化,以及该通路活化所诱导的炎症反应,从而改善MPP^(+)所致N2a细胞的炎症损伤。

研究型医院促进党建工作和科技工作协同发展的路径探索

研究型医院是现代医院发展和管理的一种新模式,其核心在于从多层面激发医院科技创新活力并转化为现实竞争力,从而推动医疗、教学和研究水平均衡发展。本文通过探索党建工作与科技工作协同发展路径,充分发挥基层党组织在医疗卫生体系中的政治核心与战斗堡垒作用,提升医院科技竞争力,开创研究型医院建设与发展的新局面。

京尼平交联脱细胞猪真皮基质材料的研究

分别采用0、2%、4%、8%、16%(质量分数)的京尼平(GP)交联脱细胞猪真皮基质(pADM),检测交联后材料(GP-pADM)的基本性能。研究结果表明,随着交联剂GP用量的增加,材料的收缩温度逐渐提高,抗张强度降低;电镜扫描图显示交联后材料的孔隙有缩小的趋势,并导致了吸附水率、吸湿率和溶胀率的逐渐下降;红外图谱表明交联后材料中含有共轭双键;细胞毒性试验显示,GP-pADM细胞毒性为0级,急性经口毒性实验未见明显急性毒性。

miR-17-92基因簇在肿瘤发生发展中作用的研究进展

肿瘤是威胁全世界人类健康和影响社会经济的重要因素.近年来,随着经济的发展,肿瘤的发病率呈明显上升趋势,但是其病因尚未完全阐明.越来越多的证据显示肿瘤的发生和遗传因素有关,随着病理生理学和遗传学的发展,许多学者认为生物标志物可以预测癌症甚至指导临床治疗.微小RNA(microRNA,miRNA)是非编码小分子RNA,在发育、生理、病理过程以及肿瘤发生等环节中起着重要的调节作用.miR-17-92基因簇是研究较为深入、最有特点的miRNA,被认为是原癌基因miRNA的代表,在多种肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用.本文就miR-17-92基因簇在肿瘤发生发展中的作用及功能进行综述.

基于家庭视角的婴幼儿照护服务现状及需求分析

目的:从婴幼儿照护服务需求方角度出发,了解四川省0-3岁婴幼儿家庭照护服务的需求特征及影响因素,为制定符合四川省实际情况的婴幼儿照护服务政策提供数据支撑和对策建议。方法:采用自编问卷,以四川省0-3岁婴幼儿家长为调查对象,通过随机抽样调查,收集婴幼儿照护服务相关数据资料,剖析不同家庭背景需求特征,共回收有效问卷24 376份。结果:调查结果显示,孩子越少、年龄越大、家庭收入越高、母亲受教育程度越高、父母有工作的家庭更愿意选择将孩子送至托育机构接受照护(P <0.01)。婴幼儿家庭倾向于选择幼儿园托班,收费在3 000元以下,全日制早送晚接,提供餐食且离家近的托育机构。准备送托家庭希望婴幼儿照护服务人员的学历在大专及以上,更看重其生活照护能力。无送托计划的家庭不愿送托的首要原因是“认为孩子太小”,此部分家庭中,孩子的主要照护人受教育程度在高中及以下的占83.83%。结论:四川省不同家庭背景在婴幼儿照护服务需求上存在差异,提示应以家庭意愿为导向,大力发展多元普惠托育、鼓励提供多样化托育服务、多途径规范托育机构管理、增强家庭科学育儿能力,不断提升照护服务质效,为婴幼儿健康成长保驾护航。

微电场通过非整合素途径活化粘着斑激酶促进滋养细胞迁移/侵袭研究

目的探讨生理性微电场促进体外培养的人胎盘滋养细胞迁移/侵袭功能是否与滋养细胞表面整合素(integrin)表达有关。方法用150 m V/mm的直流微电场刺激滋养细胞,时间分别为5、10和15 h,测定其迁移情况并观察细胞形态变化。Western blot检测刺激前后1 h内粘着斑激酶FAK活化情况和细胞表面integrinα1、integrinα5、integrinαV和integrinα1蛋白表达水平。结果在含有10%胎牛血清的培养基中,150 m V/mm电场刺激下滋养细胞向负极定向迁移,迁移速度和距离较对照组明显增加(P=0.021),胞体拉长,垂直于电场方向排列;胞内FAKTyr397位点于刺激后5、10、30、60 min内迅速活化并逐渐加强(P<0.05);刺激前后滋养细胞表面integrinα1、integrinα5、integrinαV、和integrinα1蛋白表达水平无明显改变(P>0.05)。结论生理性直流微电场可能通过非整合素途径活化FAK从而促进滋养细胞迁移/侵袭功能,但其详细机制仍需进一步研究。

流式细胞分析术的教学改革初探

流式细胞分析术是一种多参数、定量且高效的检测分析技术,是科学研究重要的技术手段之一,也是研究生必须掌握的一门实验技术。现行流式细胞分析术的教学存在“重理论、轻实践”的问题,学生在具体科研中难以开展相关实验项目。本文探索推行以研究需求为导向的流式教学改革,充分考虑专业差异,多维的教学模式极大调动了学生的自主能动性,提高了学生科研工作的实际能力。

γδT细胞的分类及其功能特质研究的新进展

γδT细胞是一群不同于αβT细胞的T淋巴细胞群,其表面T细胞受体由γ链和δ链组成。而γδT细胞本身亦是一群高度异质性细胞,其亚类种类多、表型多变、功能丰富。γδT细胞除传统的Vδ1、Vδ2和Vδ3γδT细胞外,还可根据其功能差异分为调节性γδ、产生IL-17的γδ、产生干扰素的γδT细胞、人类错配修复基因2特异性γδT细胞以及白细胞介素6γδT细胞。γδT细胞各亚类间生物学特性各异,在机体肿瘤、感染及自身免疫性疾病等的发生、发展中均有重要作用,被认为是机体连接天然免疫与适应性免疫功能的桥梁。

美花圆叶筋骨草化学成分研究

研究美花圆叶筋骨草Ajuga ovalifolia var.calantha的化学成分和生物活性。实验采用硅胶柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱、ODS柱色谱和半制备型高效液相色谱等分离纯化方法,从美花圆叶筋骨草全草70%丙酮提取物乙酸乙酯部位中分离得到了12个化合物,根据波谱学数据进行结构鉴定为:2-methoxy-4-(2-propenyl)-phenyl-β-D-glucopyranoside(1)、oct-1-en-3-yl-β-glucopyranoside(2)、异地黄苷(3)、20-羟基蜕皮素-20,22-单丙酮化合物(4)、n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、(2S)-3-O-octadeca-9Z,12Z,15Z-trienoylglyceryl-O-β-D-galactopyranoside(6)、地黄苷(7)、乙酰哈巴苷(8)、水龙骨素B(9)、香草乙酮(10)、筋骨草内酯(11)、α-(9Z,12′Z,15′Z)-octadecatrienoicacidmonoglyceride(12),其中化合物1~6、8、12为首次从该属植物中分离得到,化合物1~9、11~12为首次从美花圆叶筋骨草中分离得到。运用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7生成NO的细胞模型对化合物3、4、7、9、11进行抗炎活性筛选和磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)活性测定。所筛化合物均无抗炎活性,化合物7对PHGDH具有一定的抑制作用。

肾细胞癌立体定向体部放疗的研究进展

肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)传统上被认为是放射治疗抵抗性肿瘤,手术是原发性RCC的标准治疗手段。因高龄及临床并发症丧失手术机会的患者,可通过立体定向体部放疗(stereotactic body radiation therapy,SBRT)提高RCC局部控制(local control,LC)率,并显示较好的疗效。SBRT结合图像引导放疗(image-guided radiation therapy,IGRT)技术实现靶区的精确定位,对周围正常组织损伤小,具有LC率高、毒性低并可延长无法手术患者生存期等优点。因SBRT应用于RCC的LC率、不良反应以及生存期等结果,根据机器及放射剂量的不同而有所变化,本文将就SBRT应用于转移性和原发性RCC的研究进展进行综述。

基于PDCA模式的医院科研实验室安全管理实践

目的:应用PDCA模式进行实验室安全管理,以发现和整改安全管理过程中存在的隐患和问题,提高安全管理效率。方法:以我院23个科研实验室为研究对象,比较PDCA安全管理模式实施前后5项核心安全指标的改进情况。结果:实施PDCA安全管理模式后,所有实验室的5项安全指标的合格率均显著高于实施前,差异均具有统计学意义。结论:应用PDCA管理方法,能有效提高实验室安全管理质量,减少实验室安全隐患,保障实验室人员的职业安全。

微电场对滋养细胞迁移/侵袭相关MMPs/TIMPs表达的影响

目的探讨生理性微电场对体外培养的人胎盘滋养细胞迁移/侵袭相关分子金属基质蛋白酶(MMPs)/组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)表达的影响。方法用150mV/mm的直流微电场刺激滋养细胞,测定其迁移情况并观察形态变化。实时荧光定量PCR和Western blot检测刺激前后MMP2、MMP9和TIMP1、TIMP2基因和蛋白表达水平。结果未加电刺激的滋养细胞,其运动缓慢,迁移方向随机;在含有10%小牛血清的培养基中,150mV/mm电场刺激下滋养细胞向负极迁移,迁移速度和距离明显增加(P<0.01),胞体拉长,垂直于电场方向排列。电场刺激后,胞内MMP2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),MMP9、TIMP1和TIMP2表达水平无明显变化。结论生理性直流微电场可介导滋养细胞定向迁移和排列,MMP2表达水平的上调可能与微电场促进滋养细胞迁移/侵袭功能有关。

大鼠钝性脊髓损伤后BMPRIa型受体的表达

目的观察脊髓损伤后BMPRIa型受体的表达。方法运用免疫组织化学方法,首先检测3种BMP受体(BMPR)Ia、Ib、II型在正常成体大鼠脊髓中的表达分布。运用大鼠钝性脊髓损伤模型,以150kdyn的撞击力直接撞击脊髓,观察动物撞击后1、3、7、14、30、60d后脊髓中BMPRIa的表达改变。结果在正常成年大鼠脊髓中,BMPRIa、II型受体主要在少突胶质细胞、灰质神经元中表达,在部分星形胶质细胞和大多数小胶质细胞中表达。灰质神经元中未检测到Ib型受体的表达或表达很低。脊髓损伤后,BMPRIa在星形胶质细胞中表达激剧增加,高表达可持续至损伤后1个月;脊髓损伤诱导脊髓小胶质细胞活化,活化的小胶质细胞中表达BMPRIa明显增加。结论大鼠脊髓损伤后,诱导BMPRIa受体在星形胶质细胞、小胶质细胞激剧增加,BMPRIa高表达提示BMP信号在胶质细胞的重要病理生理作用,这一发现为进一步研究BMP信号的功能作用提供基础。

缺氧后胚鼠神经元自噬及凋亡相关蛋白的表达

目的观察缺氧致胚鼠神经元损伤后,凋亡和自噬的发生及变化情况,并探讨其在脑细胞缺血缺氧中的意义。方法取大鼠的胚鼠皮质神经元进行体外原代培养,建立缺氧(oxygen deprivation,OD)损伤模型,通过Western blot方法检测不同缺氧时间点自噬微管相关蛋白轻链3抗体(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)以及半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)的表达情况。结果神经元于缺氧后可观察到自噬的发生,同时凋亡也随之出现,两者的标志蛋白于OD 0.5h开始表达,并且表达逐渐增加,于OD 4h时间点到达高峰,OD 6h时后凋亡标志蛋白caspase-3继续上调,自噬的标志蛋白LC3表达不再增强。结论 (1)除凋亡外,单纯缺氧能诱导胚鼠神经元发生自噬现象;(2)缺氧所致神经元的损伤过程中,凋亡与自噬同时发生,且表达趋势在OD 4h内一致,OD 4h后细胞凋亡增强。

蜘蛛香化学成分及其抗肿瘤活性

目的研究蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones的化学成分及其抗肿瘤活性。方法蜘蛛香95%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS、制备薄层色谱和半制备型高效液相色谱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。磺酰罗丹明B(SRB)法进行抗肿瘤活性筛选。结果从中分离得到5个化合物,分别鉴定为(3S,4S,5S,7S,8S,9S)-3,8-ethoxy-7-dihydroxy-4,8-dimethylperhydrocyclopenta-[c]pyran(1)、desoxidodidrovaltrate(2)、valtral C(3)、8-hydroxyl-pathouli alcohol(4)、3, 4-二甲氧基肉桂醛(5)。化合物2～3对胃癌MGC803和肝癌HepG2增殖均显示一定的抑制活性,其IC_(50)分别为4.28、1.90μmol/L和4.96、2.54μmol/L。结论化合物5为首次从该属植物中分离得到,化合物2～3有较强的抗肿瘤活性。

微电场对胎盘滋养细胞迁移/侵袭相关信号通路活性的影响

目的：探讨滋养细胞迁移/侵袭相关促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶（MAPK/ERK）,磷酸肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）和蛋白酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3（JAK/STAT3）信号传导通路在微电场刺激下的活化水平。方法将胎盘滋养细胞用场强为150 mV/mm 的直流微电场加以刺激,通过蛋白质印迹法（Western blot）测定电刺激前和后各时间点滋养细胞 MAPK/ERK、PI3K/Akt 和 JAK/STAT3信号传导通路相关活性分子的活化水平。滋养细胞在加电前分别用 MAPK 抑制剂 PD980599（100μmol/L）和 Akt 抑制剂 LY294002（20μmol/L）处理1 h,在上述相应含抑制剂的培养基中用场强为150 mV/mm 直流微电场刺激5 h,观察抑制剂对微电场刺激细胞行为的影响。结果Western blot 结果显示,滋养细胞在150 mV/mm 微电场作用下,p42/44 MAPK Thr202/Thr204位点、Akt Ser473位点于5 min 开始活化,10-60 min 内逐渐加强,STAT3 S727位点在微电场作用下上述各时间点无明显磷酸化水平改变。相应信号通路抑制剂处理后滋养细胞对微电场刺激的应答反应均受到明显抑制。结论微电场对滋养细胞迁移/侵袭功能的影响与 MAPK/ERK、PI3K/Akt 信号通路的活化有关。

微电场通过活化黏着斑激酶信号通路促进缺氧条件下绒毛外滋养细胞的迁移/侵袭

目的探讨微电场刺激及缺氧条件对黏着斑激酶(FAK)信号通路的作用及对人胎盘绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo迁移/侵袭的影响。方法划痕实验分析绒毛外滋养细胞在缺氧条件下的迁移情况;western blot检测微电场刺激后绒毛外滋养细胞FAK Tyr397和p Y576/577位点及其下游柱蛋白(paxillin)分子磷酸化水平,并检测微电场刺激5、10 h后HTR-8/SVneo细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平;2、5、10μmol/L FAK抑制剂PF-573228处理HTR-8/SVneo细胞后观察细胞行为,并用western blot检测其MMP-2的表达水平。结果微电场刺激能改善缺氧条件下HTR-8/SVneo细胞的迁移速度;与对照组比较,缺氧条件下微电场刺激可促使FAK Tyr397位点磷酸化水平及paxillin分子表达水平明显升高(P均<0.05),而p Y576/577位点则无明显改变;经微电场刺激5、10 h后,HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达水平均升高(P均<0.05);经FAK抑制剂处理后,HTR-8/SVneo细胞对微电场的应答反应明显受抑制,其MMP-2表达水平降低。结论微电场可能通过活化FAK信号通路促进缺氧培养绒毛外滋养细胞的迁移/侵袭。

Huwe1-shRNA靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1表达

目的探讨Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,是否可以靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1基因。方法将体外培养的L2.3神经干细胞分成3组:huwe1-shRNA未转染组(control组)、阴性序列转染组(control shRNA组)、huwe1-shRNA转染组(Huwe1shRNA组)。Control组:仅常规体外培养L2.3神经干细胞。不将阴性序列和Huwe1-shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞。Control shRNA组:阴性序列通过慢病毒转染体外培养的L2.3神经干细胞。Huwe1shRNA组:Huwe1-shRNA通过慢病毒载体成功感染体外培养L2.3神经干细胞。分别收集三组体外培养的L2.3神经干细胞,应用western blot方法分别检测三组L2.3神经干细胞Huwe1蛋白的表达。结果与control组、control shRNA组比,Huwe1shRNA组体外培养的L2.3神经干细胞huwe1蛋白表达条带显著减弱、变细(P<0.05)。与control组Huwe1蛋白的相对表达量比,Huwe1shRNA组Huwe1蛋白的相对表达量是control组的25%(P<0.05)。与control组比,control shRNA组和Huwe1shRNA组在慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,L2.3神经干细胞存活率无明显下降(P>0.05)结论 Huwe1shRNA通过慢病毒载体转染L2.3神经干细胞,可以靶向沉默L2.3神经干细胞Huwe1基因,却不影响L2.3神经干细胞的存活率。

微电场刺激血管内皮细胞培养上清对缺氧培养滋养细胞迁移/侵袭的影响

目的探讨微电场(electric field,EF)刺激血管内皮细胞培养上清对缺氧培养滋养细胞迁移/侵袭能力的影响。方法 200 m V/mm微电场刺激血管内皮细胞(HUVEC)5 h,收集培养上清。Transwell体外侵袭实验和划痕实验观察EF刺激内皮细胞条件培养基对3%O2物理缺氧培养滋养细胞迁移/侵袭功能的影响。采用Western blot和荧光定量RT-PCR检测EF刺激的血管内皮细胞条件培养基与滋养细胞共培养24 h后对缺氧培养滋养细胞MMP-2(Matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及MMP-9(Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)分子表达的影响。结果 Transwell小室体外侵袭实验和划痕实验结果显示,EF 200m V/mm刺激血管内皮细胞5 h条件培养基(conditioned medium,CM)与滋养细胞共培养,可促进缺氧培养滋养细胞迁移/侵袭功能,其穿膜细胞数目是单纯缺氧的3.62倍(P<0.05),迁移速度是单纯缺氧的1.56倍(P<0.05)。EF刺激的血管内皮细胞条件培养基与滋养细胞共培养24 h,可以促进缺氧培养滋养细胞的MMP-2表达;对MMP-9分子表达的影响不明显。结论EF刺激的血管内皮细胞培养上清能促进缺氧培养滋养细胞的迁移/侵袭能力,可能与内皮细胞作用于滋养细胞、促进MMP-2分子表达增加有关。