2-脱氧葡萄糖对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的探讨糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose,2-DG)对乳腺癌MCF7/ErbB2细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法用不同浓度的2-DG(0,0.5,1,2,4,8,16,32mM)处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用MTS试剂盒测定细胞的增殖;用Transwell实验检测不同浓度2-DG(0,0.5,1,2mM)对MCF7/ErbB2细胞的迁移和侵袭的影响;用不同浓度2-DG(0,0.5,1,2mM)处理MCF7/ErbB2细胞48h后,用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,并计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量;用1mM 2-DG处理MCF7/ErbB2细胞0、4、8、12、24h后,用Western blot检测己糖激酶II(hexokinase II,HKII)蛋白表达水平。结果与2-DG未处理组比较,2-DG(0.5~32mM)能抑制MCF7/ErbB2细胞的增殖;2-DG(0.5,1,2mM)能显著抑制MCF7/ErbB2细胞的迁移和侵袭(P<0.001),同时显著降低葡萄糖摄取量和乳酸生成量(P<0.001),而且上述抑制作用均表现出对2-DG剂量的依赖性;1mM 2-DG显著下调MCF7/ErbB2细胞中HKII的蛋白水平。结论 2-DG通过下调HKII蛋白表达降低糖酵解水平,从而抑制乳腺癌MCF7/ErbB2细胞的增殖、迁移和侵袭。

Heregulin-β1诱导硬脂酰辅酶A去饱和酶1促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨heregulin-β1(HRG-β1)诱导硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase-1,SCD1)的表达及SCD1活性对乳腺癌细胞MCF7和SK-BR-3增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法用PBS(对照组)或不同浓度和作用时间下HRG-β1处理MCF7和SK-BR-3细胞,采用RT-qPCR和Western blot检测细胞SCD1 mRNA和蛋白表达。MTT实验检测HRG-β1和SCD1抑制剂A939572处理后的MCF7和SK-BR-3细胞增殖能力。划痕实验和Transwell实验分别检测HRG-β1、A939572和油酸(oleic acid,OA)处理后的MCF7和SK-BR-3细胞迁移和侵袭能力。结果用HRG-β1处理MCF7和SK-BR-3细胞,两种细胞的SCD1 mRNA和蛋白表达水平均增加,且均表现出时间-剂量依赖关系;与对照组比较,HRG-β1处理后两种细胞的增殖率明显增加(P<0.01),而加入A939572后,两种细胞的增殖率明显下降(P<0.01);与对照组比较,HRG-β1处理后MCF7和SK-BR-3细胞划痕迁移率和侵袭细胞数显著增加(P<0.01)。HRG-β1与A939572联用后,划痕迁移率和侵袭细胞数明显降低(P<0.01),而回补OA后,划痕迁移率和侵袭细胞数均显著增加(P<0.01)。结论 HRG-β1能上调SCD1的表达水平,且HRG-β1对乳腺癌细胞MCF7和SK-BR-3的增殖、迁移和侵袭的促进作用部分是由SCD1介导的。

人血浆凝血因子Ⅷ柱纯化前处理方法的比较

目的对人血浆凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,FⅧ)制备过程中4种柱纯化前处理方法进行比较并分析其优缺点,为血源FⅧ的纯化制备提供借鉴与参考。方法冷沉淀经Tris溶解后的上清,分别用甘氨酸沉淀法、PEG沉淀法、酸沉淀法和氢氧化铝凝胶吸附法处理;用活化部分凝血活酶(APTT)法测定样品上清中FⅧ活性,计算总活性回收率和样品的比活性,用非还原性SDS-PAGE电泳比较去除杂蛋白的效果。结果 4种处理方法中,甘氨酸沉淀法总活性回收率最高[(94.00±7.60)%],其次是酸性沉淀法[(89.47±2.60)%]、PEG沉淀法[(80.92±9.67)%],氢氧化铝吸附法的总活性回收率最低[(78.65±7.52)%];甘氨酸沉淀法与PEG沉淀法去除杂蛋白的效果优于酸性沉淀法和氢氧化铝吸附法;经4种不同方法处理后,甘氨酸沉淀法所得样品中FⅧ比活最高[(0.6856±0.1258)IU/mg],其次是PEG沉淀法[(0.5773±0.0787)IU/mg]、酸性沉淀法[(0.3885±0.0301)IU/mg],氢氧化铝吸附法所得样品比活最低[(0.2879±0.0472)IU/mg]。结论在上述方法中,甘氨酸沉淀法和PEG沉淀法的总体效果较佳,且因后者操作更加简便、快捷,在实际生产过程中采用PEG沉淀法较为合适。

干扰乳酸脱氢酶A表达对ErbB2高表达乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨体外干扰乳酸脱氢酶A(LDHA)表达对人类表皮生长因子受体2(ErbB2)高表达乳腺癌SK-BR-3和MDA-MB-453细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法用si LDHA转染(以转染scramble siRNA为阴性对照)SK-BR-3和MDA-MB-453细胞干扰LDHA的表达;Western blot法检测LDHA蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞的LDH活性;采用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量。结果与阴性对照组比较,si LDHA下调SK-BR-3和MDA-MB-453细胞LDHA的蛋白水平(P<0.01);降低细胞的迁移和侵袭能力(P<0.001);下调SK-BR-3细胞的LDH活性,减少两种细胞葡萄糖摄取量和乳酸生成量,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论干扰LDHA表达通过降低糖酵解从而抑制ErbB2高表达乳腺癌细胞的迁移和侵袭。