Bcr/abl特异性RNA干扰真核表达载体的构建

目的:构建特异性的抗慢性髓细胞白血病融合基因bcr/ablmRNA的siRNA真核细胞表达载体,探索RNA干扰(RNAi)分子靶向治疗慢性髓细胞性白血病(CML)的作用。方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(SmallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER/shRNA1、pTER/shRNA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。结果:构建慢性粒细胞白细胞bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER/shRNA1、pTER/shRNA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。结论:抗慢性粒细胞白细胞bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体的构建成功。

颈动脉血管分叉模型内流场分布的PIV测量和数值模拟比较研究

目的:通过对比分析颈动脉血管分叉模型内流场分布的数值模拟计算和粒子成像测速(particle imaging velocimetry,PIV)法量的结果,为今后流场分布的描述选择相适应的方法提供科学依据。方法:分别应用数值模拟方法和PIV定量检测方法,对颈动脉血管分叉模型颈内动脉窦(internal carotid artery sinus,ICAS)区域流场进行模拟计算和实际测量,得到边壁切应力(wall shear stress,WSS)的分布情况。对两种方法得到的结果进行对比统计学分析。结果:从切应力总体分布变化趋势看数字模拟方法与PIV测量计算结果大体一致,但数字模拟方法得到的低切应力核心区域的范围比PIV测量计算得到的范围要小,并且数字模拟方法得到的切应力的绝对值大小比PIV测量计算的数值要大。结论:在反映局部流场分布趋势的时候,应用数值模拟方法更为简单、方便,但若需要详尽的描述局部流场切应力的分布情况,PIV测量方法则为首选。

不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究不同剪切力对内皮细胞表面凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,将其种植于载玻片上,放入流室系统分别施加以不同的剪切力.按施加剪切力的不同分为实验组和对照组：实验组分为低剪切力组（4.2 dyne/cm2,n=5）、中等剪切力组（8.4 dyne/cm2,n=5）和高剪切力组（15.0 dyne/cm2,n=5）;对照组（n=5）静态条件下培养,不施加剪切力.剪切力加载1、2、4、8 h后RT-PCR测定各组内皮细胞LOX-1 mRNA的表达.结果 低剪切力（4.2 dyne/cm2）作用下,内皮细胞LOX-1表达随时间延长而增加.与对照组比较,中等剪切力（8.4dyne/cm2）作用2、4、8 h内皮细胞LOX-1的表达水平均降低[2 h：0.2346±0.0397比0.2948±0.0128,4 h：0.1747±0.0585比0.2985±0.0204,8 h：0.0256±0.0067比0.2968±0.0175,均P＜0.05].高剪切力（15.0dyne/cm2）作用下,血管内皮细胞LOX-1表达一直维持在极低水平.结论 不同剪切力可以影响内皮细胞的LOX-1表达水平.