学生眼里的病理生理学双语学习体会

目的:从学生眼光总结病理生理学双语学习过程,并对病理生理学双语教学效果的改进和提高提出一些思考。方法:从病理生理学双语学习的授课对象、教材和教学内容的选取、课前课后的准备、学习方法、教学模式等方面进行分析和讨论。结果:大多数学生对双语教学表示赞同。结论:病理生理学应灵活地选择多种形式相结合的双语教学模式。

雷公藤甲素对血管生成的抑制作用

利用体外培养人脐静脉内皮细胞,经不同浓度的雷公藤甲素(0、5、10、20、30μg/L)处理后,MTT法显示雷公藤甲素可抑制内皮细胞的增殖,5μg/L雷公藤甲素的抑制率达29.15%;琼脂凝胶立体细胞培养系统检测发现内皮细胞经雷公藤甲素作用后,其游走能力降低;鸡胚尿囊膜试验观察到雷公藤甲素可有效抑制血管的生成;荧光定量RT-PCR检测发现雷公藤甲素可下调内皮细胞u-PAmRNA的表达。因此认为,雷公藤甲素可能在基因水平上干扰内皮细胞u-PAmRNA的表达,减少u-PA蛋白的生成,从而有效地抑制血管内皮细胞的增殖和移行,这可能是雷公藤甲素抑制血管生成的主要机制之一。

门冬氨酸钾镁对肝细胞代谢的影响

目的:探讨门冬氨酸钾镁溶液对人肝细胞代谢的影响及其相关机制。方法:对培养的人肝细胞L 02株分为 3组,分别于培养基中加入门冬氨酸钾镁复盐溶液(研究组),硫酸镁与氯化钾的混合液(对照组 )及空白对照 (空白组 )。测定肝细胞内K+,Mg2+的浓度;检测肝细胞胞膜Na+ K+ ATP酶活性;测定ATP含量及线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶 (CCO)的活力。加入适量铵盐后测定各组NH4+和尿素的浓度以了解各组肝细胞对氨的清除能力。结果:与空白组和对照组相比,研究组的K+,Mg2+进入细胞内的量明显增多(P<0.05或P<0. 01 );其胞膜的Na+ K+ ATP酶活性升高(P<0. 01);氨清除加快,尿素生成增多(P<0.05或P<0.01);ATP浓度升高 (P<0. 01),与能量代谢密切相关的线粒体CCO活性和SDH活性增高,能量代谢能力明显增强 (P<0. 01)。结论:门冬氨酸钾镁溶液能显著增强人肝细胞的代谢能力。

动脉粥样硬化病人雌激素受体基因的甲基化与高同型半胱氨酸血症关系的研究

目的探讨动脉粥样硬化(AS)患者雌激素受体(ER-α)基因启动子区CpG岛的甲基化改变,及其与血总同型半胱氨酸(tHcy)水平的关系。方法82例研究对象分为AS组(54例),对照组(28例),所有入选对象均行颈部血管彩超检查。巢式甲基化特异性PCR(nMSP)法检测研究对象ER-α启动子区CpG岛的甲基化状态,荧光生化法检测血tHcy水平,spearman等级相关分析甲基化程度与tHcy的相关关系。结果54例AS患者中有38例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化,甲基化率为70.4%;28例健康对照者中有8例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化,甲基化率为28.6%;两组甲基化率差异有显著性(P<0.05)。同时,AS组tHcy水平显著高于对照组(P<0.05),经spearman等级相关分析,ER-α基因启动子区甲基化程度与tHcy相关系数为r=0.809(P<0.05)。且随tHcy升高,AS病损程度亦递次加重。结论AS患者ER-α基因启动子区CpG岛高度甲基化,且甲基化程度与血tHcy浓度呈正相关,提示高Hcy血症很可能通过干扰ER-α基因的甲基化而促进AS的发生、发展。

雷公藤甲素对血管内皮细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达的影响

背景与目的已有研究发现雷公藤具有抗肿瘤的作用,本研究旨在观察雷公藤甲素(triptolide,T10)对血管内皮细胞增殖和尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-typeplasminogenactivator,u-PA)表达的影响,探讨T10抑制血管生成的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,传至第三代,加入不同浓度的T10(0、5、10、20、30μg/L)、地塞米松(300mg/L)后培养不同时间,计数细胞以了解细胞的增殖情况;培养48h,采用[3H]-TDR掺入法检测DNA的合成情况;利用鸡胚尿囊膜在体观察T10对血管生成的影响;免疫组织化学染色检测内皮细胞u-PA的蛋白表达;荧光定量RT-PCR检测u-PAmRNA的表达。结果T10可抑制内皮细胞的增殖,并且呈明显的剂量依赖性,5μg/LT10的抑制率达28.93%;可明显抑制鸡胚尿囊膜的血管生成(P<0.05);减少内皮细胞u-PA的蛋白表达,并呈剂量依赖趋势,5μg/LT10使内皮细胞u-PA表达降低41.05%;荧光定量RT-PCR结果显示,T10可下调u-PAmRNA的表达。结论雷公藤甲素可有效抑制血管内皮细胞的增殖,减少内皮细胞u-PA的表达,这可能是其抑制血管生成的主要机制之一。

门冬氨酸钾镁抗心律失常及抗氧化损伤的机制研究

目的探讨门冬氨酸钾镁对冠心病心绞痛和冠心病心律失常患者的氧化应激态及脂质氧化损伤的保护效应,及其对心律失常影响的可能机制。方法采用单盲随机原则将98例冠心病心绞痛和冠心病心律失常患者随机分为试验组（65例）和对照组（33例）。试验组在心血管疾病常规治疗基础上加用门冬氨酸钾镁,而对照组仅用心血管疾病常规治疗。两组分别在用药前和用药1周时检测血浆中还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、丙二醛（MDA）及氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）的含量,并连续监测24h心律。结果与对照组比较,试验组用药后1周GSH含量及GSH/GSSG比值均明显升高（P均〈0.01）,而GSSG、MDA及ox-LDL的含量均明显下降（P均〈0.01）。试验组期前收缩总数减少86.5%,对照组期前收缩总数只减少了47.4%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;且患者氧化应激态指标（GSH/GSSG比值、MDA、ox-LDL）的改善与期前收缩总数的减少呈显著的直线相关关系（P均〈0.01）。连续应用门冬氨酸钾镁1周未发现有药物不良反应事件发生。结论门冬氨酸钾镁能显著改善冠心病心绞痛和冠心病心律失常患者机体的氧化应激态,降低脂质氧化损伤程度,并对频发期前收缩有良好的治疗效应。门冬氨酸钾镁对频发期前收缩的治疗效果与其抗氧化损伤效应间具有显著的相关性,提示氧化应激可能是冠心病心律失常的发生机制之一。

改良式全肝血流阻断包膜外切除肝巨大血管瘤

目的评估自体回输血配合常温下全肝血流阻断治疗紧贴重要血管的肝巨大血管瘤包膜外切除的可行性。方法从2001年2月至2006年12月采用全自动自体血液回输机,32例紧贴重要血管的肝巨大血管瘤,瘤体大小12cm×15cm～18cm×40cm。常规在肝上下腔静脉、肝下下腔静脉、第一肝门放置阻断带,根据术中需要行不同时间的全肝血流阻断使手术顺利完成。结果全组32例均完整切除瘤体并痊愈出院,其中1例游离肝脏时瘤体破裂未能及时行全肝血流阻断致大出血,术中输血6000ml;4例术中输外源性同型血400～800ml;其余27例术中未输外源性同型血。术中有8例仅采用Pringle法切肝,其余24例用全肝血流阻断法,阻断时间5～30min,平均16min。结论采用自体回输血常温下全肝血流阻断技术对紧贴重要血管的肝巨大血管瘤包膜外切除是安全可行的。

动脉粥样硬化病人LDL受体基因启动子序列的高甲基化改变

探讨动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)病人LDLR基因启动子区12个CpG二核苷酸结构甲基化的改变。改进并联合应用巢式、Touchdown-PCR,甲基化敏感单链构象分析法(methvlation- sensitive-single-strand conformation analvsis,MS-SSCA),对61例AS病人及28例健康对照者的LDLR基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行检测。在AS患者中发现三种不同的甲基化模式,即完全甲基化、部分甲基化和非甲基化。61例AS患者中有2例完全甲基化,13例部分甲基化,其余为非甲基化,甲基化率为24.59%;28例正常对照者中仅1例发生部分甲基化,甲基化率为3.57%。两组甲基化率差异有显著性(P<0.05)。AS病人LDLR基因启动子区甲基化程度增高,在LDLR基因调控区的高甲基化修饰可能参与了AS的发病。同时,改进并联合应用的巢式PCR、T0uchdown- PCR,MS-SSCA法降低了对DNA模板严格度的要求,提高了灵敏度和特异性,在检测基因甲基化中具有方便、经济、效率高的优点,有良好的应用前景。

82例结直肠癌组织HPV16 DNA表达的研究

目的:分析不同部位、分期的结直肠腺癌及癌旁正常粘膜组织中人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)16的表达。方法:应用PCR方法检测82例手术切除的结直肠癌新鲜标本及癌旁正常黏膜组织中HPV16E7DNA的表达。结果:结直肠癌组织HPV16E7DNA的阳性表达率(42/82)明显高于癌旁正常黏膜组织(4/82,P<0.01);直肠癌组织中HPV16E7的表达(64.10%)明显高于升结肠癌(18.18%,P<0.05);HPV16阳性率与Dukes分期相关(P<0.01),与癌组织分化程度无相关性。结论:结直肠癌组织HPV16E7DNA的表达率明显高于癌旁正常黏膜组织,提示部分结直肠癌存在HPV16感染。癌灶部位距肛门越近,感染率越高;Dukes分期越低感染率越高。

同型半胱氨酸干扰胰岛素样生长因子2和H19的印迹表达及其与血管平滑肌细胞增殖的关系

目的采用动脉粥样硬化的独立危险因子同型半胱氨酸刺激脐静脉血管平滑肌细胞,观察同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞胰岛素样生长因子2和H19表达的干扰作用,分析二者与血管平滑肌细胞增殖的关系及其在动脉粥样硬化发病中的可能作用。方法将培养的脐静脉血管平滑肌细胞分为0、50、100、200、500及1000μmol/L同型半胱氨酸组,以0μmol/L同型半胱氨酸组为空白对照组。用不同浓度的同型半胱氨酸刺激血管平滑肌细胞48 h后,MTT法检测血管平滑肌细胞的增殖水平;半定量逆转录聚合酶链反应法检测血管平滑肌细胞胰岛素样生长因子2和H19的mRNA表达水平,Western Blotting法检测血管平滑肌细胞胰岛素样生长因子2的蛋白表达水平。结果与空白对照组相比较,同型半胱氨酸各浓度组血管平滑肌细胞的增殖活力明显增加,以高浓度(500及1 000μmol/L)组为著(P<0.05)。同时,同型半胱氨酸组血管平滑肌细胞H19的mRNA表达水平增加,500及1000μmol/L浓度组(0.548 6±0.063 3及0.733 3±0.049 6)明显高于空白对照组(0.202 2±0.012 4)(P<0.05);胰岛素样生长因子2的mRNA和蛋白表达均下降,尤以高浓度组为著,500及1 000μmol/L浓度组的mRNA(0.258 8±0.024 8及0.168 9±0.069 6)和蛋白(0.116 7±0.015 5及0.083 7±0.018 0)表达水平均明显低于空白对照组(0.515 8±0.018 9和0.244 3±0.042 3)(P<0.05)。结论同型半胱氨酸能干扰胰岛素样生长因子2和H19的表达,并可能进一步促进血管平滑肌细胞的增殖。

同型半胱氨酸通过下调胰岛素诱导因子1mRNA表达增加巨噬细胞胆固醇合成

目的探讨同型半胱氨酸对THP-1巨噬细胞胆固醇合成的直接影响及其可能的作用靶位。方法佛波酯诱导体外培养的THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,逆转录聚合酶链反应检测5mmol/L同型半胱氨酸作用于巨噬细胞0、4、8、18h及24h后胰岛素诱导因子1mRNA和3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶mRNA的表达。酶比色法检测细胞内总胆固醇水平。结果细胞内总胆固醇水平随同型半胱氨酸作用时间的延长而增加,18h和24h组细胞内总胆固醇水平与0h组比较明显增加(P<0.01)。同型半胱氨酸呈时间依赖性降低胰岛素诱导因子1mRNA的表达,8、18、24h组与0h组比较,差异有显著性(P<0.05和P<0.01)。3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶mRNA表达水平随同型半胱氨酸作用时间的延长而增加,18h和24h组3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶mRNA表达水平与0h组比较,明显增加(P<0.01)。结论同型半胱氨酸诱导巨噬细胞内脂质堆积、进而形成泡沫细胞的一个可能机制是下调胰岛素诱导因子1表达、进而上调3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶表达导致巨噬细胞内胆固醇合成异常增加。

厌氧菌作为肿瘤基因治疗转移载体的研究进展

实体瘤内存在低氧坏死区域 ,故可利用具有趋低氧特性的厌氧菌作为肿瘤基因治疗的转移载体。研究表明厌氧菌作为基因载体肿瘤靶向性较强 ,且使用较安全 ,是一种新型的基因治疗转移载体。

细胞内GSH耗竭逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM对阿霉素的耐药性

目的:探讨癌细胞内GSH浓度在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法:以马来酸二乙酯(DEM)处理人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM 3小时,以消耗其细胞内还原型谷胱甘肽(GSH),MTT法检测DEM处理前后MCF-7/ADM细胞对ADM耐药程度的变化,并采用荧光分光光度法同步检测其细胞内GSH的消耗程度,分析细胞内GSH浓度的变化与MCF-7/ADM细胞对ADM耐药程度变化间的相关关系。结果:0.1umol/L DEM使细胞内GSH浓度减少37.4%(P<0.01);ADM亦使细胞内GSH含量呈ADM浓度依赖性的下降;DEM与ADM合用时,GSH浓度显著下降,其下降程度大于DEM和ADM单独应用之和。随着细胞内GSH数量的减少,MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性增强、耐药性下降(P<0.01)。结论:DEM耗竭细胞内GSH的作用与ADM有协同效应,耗竭细胞内GSH可部分逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对促进血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响。方法:常规培养人脐静脉VSMCs,将培养的VSMCs分为0、50、100、200、500及1000μmol/LHcy,其中0μmol/LHcy组为对照组。当VSM-Cs细胞长满80%瓶底时,各组加入不同浓度的Hcy,继续培养细胞6h、12h、24h、36h、48h、72h后,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态,采用MTT法检测细胞的增殖活力。结果:当Hcy刺激VSMCs12～48h时,VSMCs的细胞数逐渐增加,细胞的活力也持续增加(P<0.05);当Hcy的刺激时间达72h时,高浓度(1000μmol/LHcy)组的VSMCs活力的升高趋势有所减缓,细胞有损害表现。结论:高浓度Hcy可直接诱导VSMCs增殖;但随着刺激时间的增加,过高浓度的Hcy对VSMCs表现出抑制和损害效应。

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的研究表明,动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的独立危险因子,同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy),能通过促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖而影响AS的发生,但Hcy与VSMCs增殖之间的关系,目前并不清楚。本研究采用不同浓度的Hcy刺激原代培养的脐静脉VSMCs,分析Hcy对VSMCs增殖周期的影响。方法常规培养人脐带VSMCs,将培养的VSMCs分为,0、50、100、200、500及1000μmol/L Hcy组,其中0μmol/LHcy组为对照组。当VSMCs细胞长满80%瓶底时,各组加入不同浓度的Hcy,继续培养细胞24h和48h,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态,采用MTT法检测VSMCs的增殖活力,采用流式细胞技术分析VSMCs的增殖周期。结果当Hcy刺激VSMCs 24h和48h后,VSMCs的数目增多,细胞的活力增加(P<0.05);同时VSMCsS期细胞减少,G2/M期细胞增多,G0/G1细胞基本不变。结论 1.Hcy可直接诱导VSMCs的增殖;2.Hcy促进VSMCs从S期向G2/M期转变。

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

目的:研究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法,检测不同浓度Hcy(10μmol.L-1、30μmol.L-1、100μmol.L-1和300μmol.L-1)与HUVEC共同培养后,细胞内eNOSmRNA和蛋白表达、eNOS活性和一氧化氮(NO)生成的变化。结果:HUVEC经不同浓度Hcy处理24h后,其细胞内eNOS蛋白表达减少,活力降低,NO生成抑制。但只有100μmol.L-1Hcy与HUVEC作用72h时,才引起eNOSmRNA表达的减少。结论:提示Hcy可能通过抑制eNOS转录、蛋白表达及eNOS活力减少内皮源性NO的生成。

多梳基因EZH2与BMI-1在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的过表达和EZH2的磷酸化

目的检测EZH2与BMI-1在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达改变,以及磷酸化蛋白激酶B-磷酸化EZH2通路在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达变化,以探讨动脉粥样硬化发病中DNA甲基化修饰异常的上游表观遗传机制。方法建立大鼠动脉粥样硬化模型,通过血脂生物化学分析以及主动脉HE染色切片鉴定动脉粥样硬化模型。取胸腹主动脉内膜、中膜为标本,逆转录聚合酶链反应检测EZH2和BMI-1的mRNA表达,免疫组织化学法检测蛋白激酶B和EZH2蛋白磷酸化在动脉粥样硬化主动脉中的变化。结果模型组EZH2和BMI-1的mR-NA表达明显高于正常对照组(P<0.05和P<0.01)。模型组中蛋白激酶B和EZH2蛋白的磷酸化程度均明显高于正常对照组(P<0.01)。结论EZH2和BMI-1的mRNA在动脉粥样硬化病损动脉中显示共同高表达;且磷酸化EZH2蛋白和磷酸化蛋白激酶B蛋白表达在动脉粥样硬化病损动脉中平行上调,提示EZH2和BMI-1的共同高表达和蛋白激酶B介导的EZH2磷酸化可能是动脉粥样硬化发病过程中的早期表观遗传机制紊乱。

Tau蛋白过度磷酸化诱导Aβ生成抑制THP-1细胞ABCA1的表达

目的:探讨过度磷酸化Tau蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用及其可能机制。方法:体外培养人单核细胞系THP-1,经佛波酯诱导分化为巨噬细胞,建立人盐洗血小板与THP-1(人单核细胞)源性巨噬细胞共孵育生成泡沫细胞的体外模型。免疫细胞化学法检测过磷酸化Tau蛋白和β淀粉样蛋白的生成。用岗田酸(OA)诱导其Tau蛋白过磷酸化,Western blot观察Tau蛋白T231和S396两个位点磷酸化程度及β淀粉样蛋白水平,RT-PCR法检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达水平。结果:OA引起Tau蛋白剂量依赖的过度磷酸化,并增加β淀粉样蛋白的生成,同时下调ABCA1 mRNA水平的表达(P<0.05)。结论:Tau蛋白过度磷酸化诱导β淀粉样蛋白的生成并下调ABCA1 mRNA水平的表达,可能是动脉粥样硬化斑块形成和发展的机制之一。

门冬氨酸钾镁3种注射剂补充钾镁效率和对抗内毒素损伤的比较

目的比较3种不同门冬氨酸钾镁注射剂补充细胞内钾(K+)、镁(Mg2+)的效率及其对抗内毒素(LPS)肝细胞损伤的差异。方法常规培养肝细胞L02株,分为空白对照组、A组、B组和C组。除空白对照组外,各组细胞培养液中分别加入A、B、C三种门冬氨酸钾镁注射剂(均含K+5.3 mmol.L-1及Mg2+2.8 mmol.L-1),继续培养细胞1、2、3、5 h后,测定细胞内K+和Mg2+的含量。对抗内毒素(LPS)损伤实验中将肝细胞L02株分为LPS组、LPS+A组、LPS+B组、LPS+C组,各组均经终浓度为0.1 mg.L-1LPS和20 mmol.L-1的NH4Cl处理,同时将3种门冬氨酸钾镁注射剂分别加入各组,培养2 h后测定细胞培养液中尿素氮浓度和细胞膜Na+-K+-ATP酶的活性。结果与空白对照组比较,各门冬氨酸钾镁注射剂组K+、Mg2+进入细胞内的量均增多,2 h时A组的K+、Mg2+浓度明显高于B组和C组(P<0.05)。在对抗LPS损伤实验中,与LPS组比较,各门冬氨酸钾镁注射剂均可促进氨的清除,表现为尿素生成明显增多,以LPS+A组的效果最为显著(P<0.05);但3种门冬氨酸钾镁对内毒素损伤肝细胞膜Na+-K+-ATP酶活性的效应均不显著(P>0.05)。结论 3种门冬氨酸钾镁注射剂的生物学效应有一定差异,A组能较快地促进K+、Mg2+进入细胞,且显示出较好地拮抗LPS损伤肝细胞的作用。