非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子的受体结合特性及对MAPK信号通路的影响

目的:研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non- mitogenetichumanacidicfibroblastgrowthfac tor,nm haFGF)促细胞增殖活性的变化及其作用机制。方法:采用MTT法测定人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和nm- haFGF对NIH3T3细胞株的增殖活性;采用受体放射性配基结合法,测定haFGF和nm- haFGF与其受体结合的亲和力及受体总结合位点数RT ;利用Western印迹检测haFGF和nm- haFGF分别作用于NIH3T3细胞后MAPK信号通路中ERK信号分子的表达。结果:与haFGF比较,nm- haFGF对NIH3T3细胞的促增殖活性降低,nm -haFGF与NIH3T3细胞胞膜上aFGF受体结合的亲和力下降,但与受体结合的总位点数不变。Western半定量检测结果显示,nm -haFGF组信号蛋白ERK的表达水平明显低于haFGF组。结论:nm -haFGF与受体结合能力下降,下调MAPK信号通路是导致nm haFGF的促分裂活性降低的主要原因之一。

婴儿双歧杆菌对小鼠黑色素瘤模型肿瘤组织的靶向性

目的 探讨婴儿双歧杆菌对黑色素瘤组织是否具有靶向特性。方法 采用荷瘤鼠尾静脉推注 3H-Td R标记婴儿双歧杆菌示踪分析、组织培养和组织切片革兰氏染色观察婴儿双歧杆菌的瘤组织靶向性。结果 瘤组织内放射性强度持续增强 ,正常组织放射性强度则持续减弱。组织培养显示婴儿双歧杆菌在瘤组织内富集增殖。组织切片显示瘤组织内大量革兰氏染色阳性条杆状紫蓝色深染区 ,而正常组织中却无。

二甲双胍对慢性暴露于高糖及高游离脂肪酸的HIT-T15细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的影响

目的观察二甲双胍(MF)对慢性高糖和高脂处理后的HIT-T15细胞(β细胞系)胰岛素受体(IRc)酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响,探讨MF对β细胞糖脂毒性,即β细胞胰岛素抵抗的改善作用机制。方法实验分为对照组、对照+MF组、高糖组、高糖+MF组、高脂组、高脂+MF组。将HIT-T15细胞分别接种于含有5.5mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖(G)及0.5 mmol/L软脂酸的培养液中,培养48 h后,加入2.5μg/mL MF干预24h。用放射性酶分析法测定β细胞IRc TPK活性。结果高糖〔(52.5±18.6)pmol/(min.μg)〕和高脂组〔(54.6±14.0)pmol/(min.μg)〕HIT-T15细胞IRc TPK活性分别较对照组〔(119.4±29.1)pmol/(min.μg)〕降低(P<0.01);予2.5μg/mL MF干预24 h后,高糖和高脂组IRc TPK活性较干预前增高〔(113.0±29.8)vs(52.5±18.6)pmol/(min.μg),P<0.01;(98.6±26.1)vs(54.6±14.0)pmol/(min.μg),P<0.01〕,且与对照组相比差异无统计学意义。MF对对照组HIT-T15细胞IRc TPK活性无明显影响。结论高糖和高脂可抑制β细胞IRcTPK活性。MF能明显改善受高糖及高脂所抑制的HIT-T15细胞IRc TPK活性,且恢复到接近正常水平。提示MF对糖脂毒性所致β细胞胰岛素抵抗的改善作用可能与增加IRc TPK活性有关。

墨汁血管灌注和四环素荧光标记评价异体移植骨板活化状态

目的 探讨采用血管墨汁灌注和四环素荧光标记评价异体移植骨板活化状态的可行性。方法12只山羊右侧股骨移植深低温冷冻同种异体皮质骨板,分别在术后3、6、12、24周处死动物取材,通过血清骨钙素检测,大体观察、X线照片、移植骨板组织学检查、血管墨汁灌注和四环素荧光标记,对移植骨板再血管化以及成骨活性进行评价。结果术后3周血清骨钙素开始升高,12周达到最高水平,与术前比较,血清骨钙素差别有极显著性统计学意义(P<0.01)。术后3、6、12、24周移植骨板墨汁灌注血管面积比率和四环素荧光标记积分光密度值(IOD)升高,与术前比较,血管面积比率和四环素荧光标记积分光密度值差别有极显著性统计学意义(P<0.01),术后12周血管面积比率和四环素荧光标记累积光密度值达到顶峰,与术后3、6、24周比较(P<0.01)。结论深低温冷冻同种异体皮质骨板移植具有较强生物学活性,术后12周移植骨板完全再血管化,24周完成爬行替代和塑形改建。血管墨汁灌注和四环素荧光标记是判定移植骨板活化状态较好的方法之一。

三相避孕片的雌激素活性研究

目的 了解三相避孕片的雌激素活性及药理作用 ,为国产三相避孕片卡丽瑞用于妇科月经紊乱等疾病的治疗提供理论依据。方法 通过光镜观察灌服国产 (卡丽瑞 )和进口 (特定偶 )三相避孕片的雌性小鼠的阴道涂片 ,观察其对雌性幼年小鼠阴道角化上皮细胞形成的促进作用 ;用成年雌兔去卵巢一周后子宫组织细胞液 ,通过放射受体分析测定上述三相避孕片对雌激素受体作用。结果 与阴性对照组比 ,卡丽瑞各相的大、中、小剂量组和特定偶组均对雌性幼年小鼠阴道角化上皮细胞的形成产生明显促进作用 (P<0 .0 1)。三相避孕片各相相似剂量组比 ,第一、二相之间无明显差异 ,但均较第三相作用明显 (P<0 .0 5 )。卡丽瑞与特定偶各相同等剂量组比 ,两者无明显差异。结果还显示 ,卡丽瑞和特定偶均对雌激素受体具较高亲和力 ,与雌激素标准品比无明显差异 (P>0 .0 5 )。

地塞米松和雌二醇对HepG2细胞载脂蛋白CⅢ受体的影响

目的 探讨地塞米松和雌二醇对人肝癌细胞 apo C 受体生理功能的影响。方法 以 1 2 5I标记的人apo C 为配体 ,利用放射性配体结合分析法 ,分别观察了地塞米松和雌二醇在 0 h、2 4 h和 4 8h对人肝癌细胞系Hep G2细胞 apo C 受体功能的影响。结果 地塞米松和雌二醇均对 Hep G2细胞 apo C 受体的亲和力 (Kd)无影响 ,但都能使 apo C 受体结合容量 (Bmax)显著增加 ,只是作用程度各异。结论 地塞米松和雌二醇对人肝 apo C

胰岛素及胰高血糖素对HepG2细胞载脂蛋白CⅢ受体功能的影响

为寻求一种可替代人肝细胞研究载脂蛋白 (apolipoprotein ,apo)CⅢ受体的生理模型 ,并探讨apoCⅢ受体的生理功能及其在内源性高甘油三酯血症发病机制中的作用 ,首先以12 5I标记的人apoCⅢ为配体 ,利用放射性配体结合分析法观察了人肝癌细胞系HepG2细胞是否有apoCⅢ受体存在 .结果证实HepG2细胞上存在高亲和力的、可饱和的、特异的apoCⅢ受体结合位点 ,其受体的亲和力 (Kd)和apoCⅢ受体结合容量 (Bmax)分别为(9 5 3± 1 0 3)× 10 -9mol/L和 (3 2 8± 0 31) μg/ g .随后又分别研究了胰岛素及胰高血糖素对HepG2细胞apoCⅢ受体功能的影响 ,结果表明 :胰岛素可使HepG2细胞apoCⅢ受体结合容量 (Bmax)显著增加 ,但对受体的亲和力 (Kd)无影响 ;胰高血糖素可使HepG2细胞apoCⅢ受体亲和力显著下降 (即Kd 值升高 ) ,对受体的结合容量无影响 .