用于心肌细胞边缘检测的Snake算法研究

针对现有Snake算法易受噪声干扰、缺乏外部约束力、不能收敛于凹点等缺陷 ,提出了采用自适应外约束力、平滑差分滤波和蛇点停止运动的准则来控制Snake的运动 .可克服已有Snake算法的缺点 ,同时编程简单 ,运算速度快 .将其用于活体心肌细胞的边界跟踪 。

Chelex-100法及酚氯仿法提取阴道毛滴虫DNA的比较

目的 -比较Chelex 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法 -分别用Chelex - 10 0法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA ,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果 -两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论 -两种方法均能提取阴道毛滴虫DNA。Chelex 10 0方法简便、省时 。

人乳头状瘤病毒16 E7 DNA在结直肠腺癌组织中的表达

结直肠癌与人类乳头状瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)感染有一定的关系,但由于检测方法、标本选择及样本数量不同,各研究结果之间差异很大。为进一步明确结直肠癌变与HPV16感染的关系,采用多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)对82例原发性结直肠腺癌患者手术切除的新鲜癌及癌旁正常粘膜组织进行了前瞻性对照研究,检测了组织中HPV16E7DNA的表达并进行测序鉴定。结果显示,结直肠腺癌组织HPV16E7的表达阳性率(42/82)明显高于癌旁正常粘膜组织(4/82);直肠癌组织中HPV16E7的表达(64.10%)明显高于升结肠癌(18.18%),即癌灶部位距肛门越近,感染率越高;HPV16阳性率与Dukes分期相关,Dukes分期越晚感染率越高;与癌组织分化程度无相关性。结果提示结直肠癌的发生、发展可能与HPV16感染有关。

针刺对备用DRG的NGF及其mRNA阳性大、中、小神经元数量的影响

本研究观察了 NGF及其 m RNA阳性神经元在 DRG大、中、小神经元中的数量变化 ,目的在于探讨 DRG各类神经元NGF变化与针刺促进脊髓可塑性的关系。对 5只成年猫进行双侧备用根手术。术后当日开始针刺一侧 L6 脊神经后肢分布区的两组穴位即足三里和悬中、伏兔和三阴交 ,每天一次 ,每次 3 0 min,连续针刺 7d后处死动物。取针刺侧与非针刺侧 L6 的 DRG制成 2 0μm厚冰冻纵切片。分别用 NGF抗血清和 NGF的 c RNA探针进行免疫组织化学反应及原位杂交染色。计数两侧 DRG相同面积内大 (>5 7μm)、中 (4 2～ 5 7μm)、小 (<42 μm)型 NGF及其 m RNA阳性神经元的数量。结果显示 :针刺侧备用 DRG NGF及其 m RNA阳性大、小型神经元的数量明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而对中型神经元数量影响不明显。结论 :针刺促进脊髓可塑性可能与备用 DRG大、小神经元表达 NGF增多有关。

内源性GDNF、NT-4对针刺猫脊髓备用根背根节神经元的作用

为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节（DRG）的作用，本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术（切除双侧L1～L3和L7～S2 DRG，其中L6DRG作为备用背根）。术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位，即足三里和悬钟、伏兔和三阴交，每天一次，每次30min，连续针刺7d后无菌条件下取出双侧L6 DRG进行体外培养，24h后全量换液，并将针刺侧的一部分培养孔的培养液分别用含有200ng／ml抗GDNF和NT4抗体培养液替换，分别作为抗GDNF和NT4抗体封闭组。7d后终止培养，于显微镜下用显微测微尺测量神经突起的长度；并用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定。结果显示：（1）免疫细胞化学染色可见体外培养的细胞95％以上为NSE阳性细胞，且为典型的体外培养的DRG神经元；（2）体外培养备用根组和抗GDNF抗体组神经突起的平均长度比针刺组的短（P〈0．05）；（3）而针刺组神经突起的平均长度与抗NT-4抗体组间无差异（P〉0．05）；两抗体组平均突起长度比备用根组的突起长（P（0．05）。本研究结果提示，针刺可促进体外培养DRG神经元突起的生长，进而可能与脊髓可塑性密切相关；内源性GDNF有促进DRG神经元突起生长的作用；而内源性NT4在DRG神经元突起生长中发挥的作用却不明显。

阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因真核表达质粒的构建

作者用螯合树脂(Chelex-100)提取阴道毛滴虫基因组DNA,PCR扩增出阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因,克隆入pMD-18T载体,亚克隆至pcDNA3·1(+)真核表达质粒。经PCR及酶切鉴定,Fd基因体外扩增产物为306bp,与已知序列吻合。成功构建了Fd基因的真核表达质粒。

阴道毛滴虫多克隆抗体的制备及Fd基因的原核表达

目的-将阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因在大肠埃希菌中诱导表达。方法-制备阴道毛滴虫可溶性抗原,多点注射免疫家兔,获得的血清用ELISA测定其抗体效价。将原核表达重组质粒pET3C-Fd转化入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达。结果-制备出抗阴道毛滴虫多克隆抗体,抗体效价在1∶8000以上,用于免疫印迹实验。经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)分析,重组质粒在大肠埃希菌中表达出Fd。结论-在大肠埃希菌中表达出了Fd。

阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因的原核表达

目的在原核细胞中表达阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因。方法构建阴道毛滴虫Fd基因的原核表达重组质粒pUC19-Fd,转化大肠埃希菌JM109感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达。结果经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)分析,重组质粒在大肠埃希菌中表达出Fd。结论在大肠埃希菌中表达出了Fd。

蛛网膜下腔置管灌注rhNCAM1促损伤脊髓再生修复的实验研究

目的：探讨神经细胞粘附分子1（neural cell adhesion molecule 1,NCAM1）灌注治疗小鼠脊髓撞击伤后对脊髓修复及神经功能恢复的影响。方法：采用改良NYU（纽约大学）Weight-Drop Impactor打击装置,以25 gcf（l0 g重量从25 mm高度自由落下）制备脊髓损伤模型（打击面积为2 mm×2 mm）。将SA小鼠30只随机分为3组：实验组（rhNCAM1组,n=10）于损伤即刻经蛛网膜下腔注入rhNCAM1蛋白2μl（约100μg）,隔日1次,共5次;对照组（生理盐水组,n=10）于损伤即刻经蛛网膜下腔注入生理盐水2μl,隔日1次,共5次;假手术组仅做椎板切除术,术后缝合切口。观察各组小鼠18周行为学改变,行BBB评分。第8周灌注固定、取材,采用神经纤维200（NF200）免疫荧光检测,进行图像分析及统计处理。结果：（1）行为学评估：实验组BBB评分在各时间点均显著高于对照组（P〈0.01）;（2）NF200免疫荧光染色：实验组阳性着色明显多于、并强于对照组;实验组无组织瘢痕结构面积明显小于对照组。结论：蛛网膜下腔应用rhNCAM1后可能改善SCI后损伤区及两端的神经细胞之间的功能,促进轴突再生,促进双下肢运动功能的恢复。

钙调素信号系统在格列美脲促进糖原合成中的作用

探讨格列美脲(GM)在促进正常大鼠骨骼肌糖原合成中对钙调素(CaM)信号的作用。结果显示在正常大鼠骨骼肌细胞中,GM能使CaM活性升高,CaM在GM促进胰岛素介导的骨骼肌糖原合成中起重要作用。