嗜肺军团菌htpA基因的克隆及其原核表达

目的克隆并检测嗜肺军团菌htpA基因在原核系统中表达情况,为进一步研究HtpA蛋白的免疫性能作必要的准备。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩得军团菌热休克蛋白A基因htpA,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGhtpA,重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后,转化宿主菌大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了291bp完整的htpA基因,构建了原核表达重组质粒pGhtpA,并检测到约36kDa的GST-htpA融合蛋白质表达条带。结论成功克隆了嗜肺军团菌htpA基因并使HtpA蛋白在原核表达系统中得到了有效的表达,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。

慢性吗啡成瘾小鼠海马中RACK1对CREB表达水平的影响

目的:研究shRAKC1对慢性成瘾小鼠脑组织CREBmRNA、蛋白的表达变化。方法:通过条件性位置偏爱(CPP)实验分析shRAKC1对慢性吗啡成瘾小鼠的作用;通过RT-PCR检测RACK1和CREB的mRNA在成瘾小鼠海马中的表达水平,并采用免疫组化观察RACK1和CREB蛋白的表达情况。结果:慢性成瘾组与生盐水组相比,前者海马区RACK1和CREBmRNA表达升高(p<0.05),且吗啡诱导的CPP效应增强(p<0.05),而shRAKC1组与空质粒组相比,前者由吗啡诱导的CPP诱导效应减弱(p<0.05),同时其海马区RACK1和CREBmRNA表达下降(p<0.05)。结论:干扰慢性吗啡成瘾小鼠RACK1表达,可以使CREB表达水平下调,并有抑制吗啡成瘾效应的作用。

原发性肝细胞癌肿瘤标志物及药物靶点的研究进展

原发性肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的威胁人类生命的癌症之一。但对于该疾病在不同阶段的诊断、治疗、预后评估仍面临着很多难题。近年来,新的肿瘤标志物被发现,各类肿瘤标志物的联合应用提高了HCC诊断的灵敏度和特异度。新的药物靶点、治疗方法也在进一步的验证中,对未来提高HCC的诊断和治疗提供了帮助。该文就近年来在HCC诊断和治疗方面肿瘤标志物及相关药物靶点的研究进展进行了综述。