黄孢原毛平革菌酵母双杂交cDNA文库的构建及应用

作为研究木质素降解系统的模式微生物黄孢原毛平革菌,迄今还没有蛋白-蛋白相互作用方面的报道.本研究利用酵母双杂交技术构建了低氮培养基中培养2d和3d的酵母双杂交cDNA文库,分别得到2.5×105和3.0×105个重组子.以14-3-3蛋白为钓饵筛选3d cDNA文库,在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp缺陷培养基平板上共获得了约600个单克隆,进一步分析发现,有30个克隆可激活3个报告基因.分离自这些克隆中的质粒DNA能转化大肠杆菌.利用HaeⅢ和Sau3AⅠ限制酶切分析可将它们分为4类.序列测定和同源分析结果表明,其中一类为14-3-3蛋白基因,提示14-3-3蛋白可形成二聚体,另外3类在GenBank没有明显同源的基因.通过SBASE网站预测,编号为Y2H333的克隆含有一个OB-fold核酸结合结构域(OB-fold nucleic acid binding domain).这些研究结果表明,所构建的黄孢原毛平革菌cDNA酵母杂交文库是成功的,14-3-3蛋白在黄孢原毛平革菌中能以蛋白-蛋白相互作用的形式发挥功能.

杀菌剂对甘薯致病菌Hypocrea sp.SP-4和Rhizopus stolonifer SP-1生长影响研究

为了研究杀菌剂对甘薯致病菌Hypocreasp.SP-4和RhizopusstoloniferSP-1生长的抑制效果,本文从腐烂的甘薯块根中分离到的匍枝根霉SP-1(RhizopusstoloniferSP-1)和Hypocreasp.SP-4的孢子接种在含有不同杀菌剂浓度的PDA培养基上,在13℃和28℃条件下培养。同时也将2种孢子接种在甘薯块根上,进行培养观察。结果表明:2株真菌低温条件下,在不含杀菌剂的培养皿上的生长速度明显比28℃条件下要缓慢些;甲基托布津和多菌灵对Hypocreasp.SP-4和R.stoloniferSP-1生长抑制的稀释度分别为1000倍和500倍。在28℃条件下,2种杀菌剂对Hypocreasp.SP-4都有良好的抑制效果,但对R.stoloniferSP-1抑制率,甲基托布津只有21%,多菌灵则有58%。在用杀菌剂抑制甘薯块根侵染的过程中还发现,甘薯块根在没有创伤的情况下,2株真菌在低温条件下不会引起腐烂,说明它们是通过伤口侵染甘薯块根的。综合几个指标可以得出:适度低温和避免甘薯块根出现伤口能够减少甘薯块根被真菌侵染。