短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）脱毛蛋白酶基因的克隆与序列分析

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)UN-31-C-42菌株是从成都市生活垃圾中分离，并经多次诱变后得到的菌株。其发酵液具有很好的脱毛效果，且对皮革胶原没有损伤。通过对该菌株发酵液中的碱性蛋白酶DHAP的纯化与N′-末端氨基酸序列测定，以及对该序列的同源性分析后，设计出相应引物，用PCR方法扩增了该菌株的碱性蛋白酶基因AP。测序结果表明，该克隆基因全长1588bp，有一个全长1149bp的编码区序列，推测蛋白质序列长383个氨基酸残基，成熟肽分子量为27．8kD。推测的成熟蛋白酶N′-末端具有与DHAPN′-末端完全匹配的序列，说明克隆到的基因为脱毛蛋白酶基因。同源性分析表明，该基因序列与已报道的其他碱性蛋白酶基因有较高的同源性。