95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查

为调查我国规模化猪场大肠杆菌细菌耐药性及其氨基糖苷类药物耐药基因的流行状况,采用K-B(Kir-by-Bauer)法检测2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种抗生素的耐药性。结果表明:仅有多黏菌素B(85.6%)、头孢噻肟(85.3%)、阿米卡星(84.8%)和大观霉素(65.0%)相对敏感。480株大肠杆菌以多重耐药菌株为主,其中13、14、15、16和17重耐药较多,并且有26株18重耐药,14株19重耐药。采用WHONET5.4软件分析大肠杆菌耐药性,对阿米卡星、头孢噻肟和多黏菌素B耐药的猪场相对较少,分别是29、26和24个。采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因,耐药基因检出率分别是aadA1(65.89%)、aaC2(52.35%)、aaC4(12.91%)和aphA3(10.95%)。耐药基因型检出率较高的是aadA1/aaC2(29.61%)、aadA1(18.04%)。Excel软件统计相关耐药基因的猪场分布,表明耐药基因型aadA1/aaC2(43)、aa-dA1/aaC2/aaC4(20)和aadA1/aaC2/aaC4/aphA3(20)在猪场分布较普遍。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型与耐药基因型符合率较高的是阿米卡星(68.39%)。本研究表明猪肠道内常在大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性,也成为耐药基因的储存库,对猪场环境中耐药基因在致病菌和非致病菌间传播发挥重要作用,能够作为检测细菌耐药性的指示菌。

新型猫源干扰素FeIFN-ω与干扰素FeIFN-α的表达及抗病毒活性比较

ω型干扰素(IFN-ω)与α型干扰素(IFN-α)同属于Ⅰ型干扰素,都具有抗病毒,抗增殖和免疫调节的功能,但它们之间的活性却存在较大差异。通过PCR扩增猫ω型干扰素基因(FeIFN-ω),根据GenBank公布的猫α型干扰素基因序列,合成猫α型干扰素基因(FeIFN-α)。分别构建原核表达载体pET-His/FeIFN-α和pET-His/FeIFN-ω,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,复性后蛋白用细胞病变抑制法进行抗病毒活性测定。结果显示,重组猫ω型干扰素(FeIFN-ω)抗病毒活性明显高于重组猫α型干扰素(FeIFN-α),尤其对H9N2亚型禽流感病毒(AIV),FeIFN-ω的活性是FeIFN-α的160倍,对犬瘟热病毒(CDV),FeIFN-ω的活性是FeIFN-α的4倍,而日本同类产品Intercat对CDV和AIV均未表现活性。以上研究为以ω型干扰素为基础的抗病毒药物应用奠定了重要的理论基础。

“自杀性”DNA疫苗研究进展

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点。但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制。“自杀性”DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗。由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点。同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效。文章针对“自杀性”DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍。

金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 Δnuc1的构建

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2Δnuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220Δnuc1。

高能手持式激光诱导击穿光谱分析仪器的研制及相关应用

研制了高能手持式激光诱导击穿光谱分析仪器，该仪器由脉冲激光器、光路系统、微型光谱仪、信号接收系统及工控机系统组成，仪器光源采用自主研发脉冲激光器，单脉冲能量100mJ，无需冷却装置。激光脉冲发射采用手柄按钮触发方式，满足不同硬度样品的分析。该仪器已具备量产的能力，特别适合于各种行业的现场快速检测，可以广泛应用于地质勘探、油气开采等行业的现场使用，完成对矿石样品等品性的快速筛查。

麻风树生物柴油研究和开发进展

随着世界能源消耗量的不断剧增，生态环境恶化加剧，能源安全与环境问题正在越来越深刻地影响着当今全球社会和经济的可持续发展。寻求发展生物能源等可再生能源或新能源来解决目前和未来的能源与环境问题已成为国际上备受关注的热点，不少国家正在或已制定有关生物能源的发展战略。

附属基因调节子在葡萄球菌生物被膜形成与感染中的作用

葡萄球菌生物被膜是生物材料相关感染病理学中最重要的毒力因子,生物被膜形成是由群集感应系统调节的。葡萄球菌附属基因调节子agr作为群集感应系统具有种属特异性,在金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌中控制着一系列毒素和毒力因子的表达,而且与天然免疫系统互作。新的研究进展表明附属基因调节子agr在体内感染中的作用非常微妙。这方面的进展有助于发掘新型抗菌剂和消除与装置相关的葡萄球菌生物被膜感染问题。

沙门氏菌耐药基因检测芯片的构建

以氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类四大类抗生素的11种耐药基因为靶基因,构建了耐药基因的检测芯片.确定芯片点样温度为25℃,湿度为65%;各样点中心距离为1000μm,样点直径为220μm.芯片点样结束后,室温干燥6 h,60℃水合处理30 s,80℃干燥10 s,254 nm波长紫外交联10min.以532 nm(绿光)波长扫描采集杂交信号,激光扫描分辨率为10μm,激光功能90%,PMTG 85%.选用tetA基因进行杂交动力学研究,确定靶基因的点样浓度为100 ng?μL-1,探针最适浓度为3600 pg?μL-1,系统检测灵敏度为3 pg?μL-1.基因芯片杂交的主要参数为:44℃预杂交2 h,52℃杂交6 h.杂交信号的判读标准为:样点信噪比(S/N)≥1.5及信号强度中位值≥1000.芯片杂交特异性高,重复性好,实现了11种耐药基因的同时检测.

金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 △nuc1的构建

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcalnuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2△nuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220△nuc1。

禽用减毒沙门菌活载体疫苗的研究进展

疫苗主要通过激发机体的免疫系统来达到防治疾病的目的。目前，疫苗主要有灭活疫苗、减毒疫苗及基因工程疫苗等。基因工程疫苗包括基因缺失苗、基因重组苗等。活载体疫苗是将胞内感染性的细菌直接用来运载目的基因进入体内，而产生相应的免疫应答反应。目前沙门菌的预防与治疗通常使用药物，但沙门疫苗研究正迅速发展，如减毒沙门菌活载体疫苗则是将减毒后的沙门菌作为载体，

抗禽传染性支气管炎病毒多肽疫苗EpiA免疫原性研究

设计基于B细胞表位和T细胞表位的禽传染性支气管炎病毒(IBV)多肽疫苗EpiA,并利用基因工程重组技术将EpiA在大肠杆菌中表达、纯化。ELISA和Western blot法验证其免疫原性后,将重组蛋白配以弗氏佐剂免疫鸡,并以灭活苗、GST和PBS为试验对照组。细胞免疫效应采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+,CD8+T淋巴细胞进行计数,IBV特异性抗体采用ELISA法进行检测,并进行攻毒试验。结果显示,成功设计了多肽疫苗EpiA:ELISA和Western blot证明所表达的融合蛋白能与标准IBV阳性血清产生特异性抗原-抗体反应,而且该融合蛋白能有效激发鸡体特异性体液和细胞免疫,与对照组差异显著(P≤0.01)。攻毒试验表明,多肽疫苗保护率可达73%,大肠杆菌生物合成重组抗IBV多肽疫苗将为IBV疫苗研究制备提供了新的途径。

斑马鱼crip2基因的克隆、亚细胞定位及在胚胎发育早期的表达分析

为揭示包含具有LIM结构域的crip基因的功能,以斑马鱼为实验对象,克隆了斑马鱼的crip2基因,并用全胚胎原位杂交法检测crip2在斑马鱼胚胎中的表达,用亚细胞定位法检测crip2基因在细胞中的定位.研究发现crip2基因在斑马鱼胚胎早期没有表达,五体节开始在脊索特异表达;后期,主要局限于在血管、心脏和体节间肌肉,表明crip2的表达并不局限于内皮系统.在细胞内,crip2基因在细胞核和胞浆中均有表达.