沉默id1基因表达对食道癌细胞Eca-109生物学行为的影响

目的探讨靶向沉默分化抑制因子1基因(id1)的短发夹RNA(shRNA)表达质粒载体对食道癌细胞生物学行为的影响。方法设计针对id1基因的shRNA序列,合成序列并克隆入pGFU6/neo质粒中。重组质粒转染食道癌细胞,RT-PCR检测id1基因mRNA的表达,Western blot检测Id1、p16及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。台盼蓝染色、克隆形成实验检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞增殖以及各周期分布。结果重组质粒经酶切鉴定和测序,证实表达干扰质粒构建成功。转染重组质粒的食道癌细胞id1 mRNA和蛋白的表达明显下降(P<0.05),食道癌细胞增殖受到抑制,G0/G1期细胞比例增加,而S期的细胞比例明显下降(P<0.05)。结论构建的id1 shRNA表达质粒能有效下调id1基因的表达和抑制食道癌细胞增殖。