利用SSR分子标记鉴别柴胡栽培种质的方法学研究

目的:建立利用简单重复序列(SSR)分子标记鉴别柴胡栽培种质的方法,初步形成可鉴别选育品系的SSR特征谱带数据。方法:从实验室先前设计的柴胡SSR引物序列中选择了50对,以2个选育品系和4份其他柴胡栽培种质为材料,筛选扩增效果好、多态性高的引物对,优化聚合酶链反应(PCR)扩增、电泳等条件,分析获得的SSR谱带,依据遗传距离构建聚类树图。结果:筛选出9对多态性高的引物,明确了检测条件,获得了试验种质的SSR特征谱带数据,在遗传相似系数为0.73处可将所有样品分为4类:黑龙江产红柴胡和川红柴1号品系聚为一类,川北柴1号品系和中柴1号品种聚为一类,四川枫顺和荣县产柴胡种质各独自聚为一类。结论:本研究筛选出的引物对和建立的检测方法可供柴胡种质鉴别参考使用。

Topsis法综合比较4种成熟度青川产北柴胡种子的萌发质量

Topsis法可运用多指标对对象进行综合比较,本研究以此法综合比较不同成熟度的青川产北柴胡种子的萌发质量。观察4种成熟度青川产北柴胡种子的胚发育情况,测定种子可溶性糖、可溶性蛋白含量,分析种子吸水特性、萌发质量,荧光显微技术对种子进行香豆素相对定量分析,并用Topsis法综合评价各成熟度萌发质量。不同成熟度的种子在外观、千粒重、吸水性能、萌发特性、营养物质含量和解剖结构上均表现不同,各种成熟度的种子经过采后贮藏胚率均可发育到相近水平,随成熟度增加,种子千粒重增加,幼苗质量增强,香豆素含量也渐高,萌发速率和萌发率有所下降,Topsis法评价种子的综合质量结果为:绿熟>黄熟>褐熟>黑熟。青川北柴胡绿熟种子综合质量最佳,黄熟、褐熟次之,黑熟最差,生产上应及时采收,减少过熟种子的比例。

微波提取柴胡挥发油的工艺研究

目的优选微波辅助提取柴胡挥发油的工艺。方法以柴胡挥发油得率为评价指标,采用单因素和正交试验法对微波法提取柴胡挥发油的工艺条件进行优化。结果柴胡挥发油微波提取的最佳工艺条件为料液比1∶8(g/mL)、微波功率为中火、提取时间30 min,此条件下提取的柴胡挥发油得率为0.18%,且所含组分与水蒸气蒸馏法所得挥发油类似。结论优选得到的微波提取工艺简单易行,可用于柴胡挥发油的提取。

产地及基因型对北柴胡种子萌发的影响研究

目的：分析目前主要审定北柴胡品种在各产地的制种质量。方法：对黑龙江兰西县、甘肃陇西县、北京药植所及四川青川县4个产地收获的中柴1-3号种子进行种子萌发实验及相关性状考查。结果：环境对北柴胡种子累积发芽率及发芽指数影响显著,其中,北京收获种子累积发芽率和发芽指数都远高于其他产地收获种子,而基因型对北柴胡种子萌发影响不显著。结论：目前各审定北柴胡品种推广用种宜在其选育产地进行制种。

基因型和环境对柴胡糖类物质含量的影响

目的:通过分析四川青川、旺苍、安县的不同品种柴胡及不同入药部位的糖类物质含量的差异性,以了解用药部位、环境和基因型对柴胡糖类物质的影响。方法:采用蒽酮-浓硫酸比色法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定柴胡多糖、还原糖和总糖的含量。结果:柴胡品种和生长环境对柴胡干燥根的糖类物质含量影响显著,四川青川的柴胡干燥根糖类成分含量较高,川北柴1号糖类物质含量比其他品种柴胡高;柴胡不同药用部位间还原糖和总糖含量差异显著,柴胡根部多糖和总糖含量较其他部位高,而茎叶中还原糖含量较其他部位高。结论:进行柴胡糖类研究对柴胡药效质量评价和促进柴胡资源的综合利用具有重要意义。

不同产地三种柴胡总黄酮及微量元素含量分析

分析了四川省青川县、安县、旺苍县产的3种柴胡(Bupleurum L.)川北柴1号、中柴1号及川红柴1号的总黄酮及微量元素含量。结果表明,川北柴1号的总黄酮及微量元素含量比中柴1号及川红柴1号的高,产地和品种对柴胡总黄酮和微量元素的含量有显著影响。

柴胡生长年限与植株性状及种子质量的关系研究

目的:研究不同生长年限柴胡植株性状及种子质量,为柴胡优质种子生产提供依据。方法:以不同生长年限柴胡为试验材料,测定不同生长年限柴胡植株性状及种子质量指标。结果:(1)不同生长年限柴胡植株性状差异显著,3年生柴胡株高、根长、根粗、根生物量、单株生物量分别为93.9 cm、20.7 cm、9.94 mm、5.7 g和21.9 g,显著高于1年生及2年生植株。(2)不同生长年限柴胡结实性差异明显,3年生柴胡单株总小花序数和单株种子重分别为77个和5.7 g,显著高于1年生及2年生植株,但柴胡种子结实率以2年生的最高为60.9%。(3)随着生长年限的增长,柴胡种子质量提高,3年生柴胡大粒种子(>14目)所占比例为24.5%,优于1年生及2年生植株;3年生柴胡种子千粒重、饱满度、生活力及萌发率分别为0.8200 g、94.7%、92.0%和90.0%,显著高于1年生植株,但与2年生植株差异不显著。(4)柴胡生长年限与株高、根长、根粗、根生物量、种子生物量、单株生物量、总小花序数、结实小花序数、种子长度、种子千粒重及种子饱满度呈显著正相关,相关系数在0.96以上。结论:不同生长年限柴胡植株性状及种子质量存在明显差异,柴胡留种植株应选择2年生及以上年限为好。

北柴胡根尖染色体制片技术研究

以北柴胡新品种川北柴1号为材料,采用新型植物染色体制片方法研究剪根时间、取样根长、笑气处理时间及酶解时间对染色体制片效果的影响,以探寻适宜于北柴胡根尖染色体制片的安全有效技术。结果表明,北柴胡根尖染色体制片最佳条件为:在胚根长至0.5~1cm时进行取样,最佳取样时间为09:00—10:00时和16:00—17:00时2个时间段;制片预处理采用笑气处理4h;酶解液酶解40min。本研究采用的技术更加安全高效,且易操作。

不同柴胡种质干物质积累及种子质量研究

以不同柴胡种质为试材,研究了不同柴胡种质干物质积累及种子质量,以期为柴胡优质种子生产提供参考依据。结果表明:不同柴胡种质植株性状及干物质积累量差异显著,根长、根粗、单株干物质积累量以种质Ⅱ最高,分别为16.4 cm、9.62 mm、25.0 g,种质Ⅳ最低为8.7 cm、4.99 mm和11.1 g。不同柴胡种质结实性差异明显,种质Ⅱ单株总小花序数、结实小花序数及单株种子质量最高,分别为172个、113个和6.8 g,种质Ⅲ最低为46个、23个和4.0 g。大粒种子(>14目)所占比例和种子千粒质量以种质Ⅲ最高,为32.7%和0.8940 g,种质Ⅳ最低为9.8%和0.7892 g;种子萌发率以种质Ⅱ最高为92%,种质Ⅲ最低为80%。不同柴胡种质干物质积累及种子质量存在显著差异,种质Ⅱ综合性状优良值得进一步开发利用。

纳米TiO2对川北柴1号种子萌发和幼苗生长及生理的影响

目的:研究纳米TiO2对北柴胡新品种川北柴1号种子萌发、幼苗生长发育和生理特性的调节作用。方法:以川北柴1号种子为材料,对其进行萌发、生长、生理指标测定试验。结果:不同浓度纳米TiO2对川北柴1号种子萌发指标、生长指标及生理指标影响显著。其中600 mg/L溶液处理对川北柴1号种子的发芽率、发芽势、种子活力、根长、根系活力的促进效果最佳,而幼苗的株高、鲜重、SOD及POD酶活性则在800 mg/L达到最大值,此时的MDA含量达到最小值。结论:适当浓度的纳米TiO2溶液处理不但能有效地促进川北柴1号种子萌发与幼苗生长,而且能改善幼苗的生理功能,可增强其对逆境的适应能力。

HPLC法同时测定“中柴2号”中7种成分

目的建立HPLC法同时测定"中柴2号"(川产北柴胡Bupleurum chinense DC.)地上、地下部分中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、芦丁、槲皮素、异鼠李素、山柰素的含有量。方法 "中柴2号"甲醇提取液的分析采用Hypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm);以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温30℃;检测波长210 nm。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.30%~102.7%,RSD 0.95%~3.8%。样品地上部分含有大量黄酮,而地下部分含有大量皂苷,但几乎不含黄酮。结论 "中柴2号"地上部分(茎、叶)也具有药用价值,应引起重视。

基于灰色关联度分析和DTOPSIS法综合评价青川柴胡资源

为了筛选适宜四川省青川县大规模推广种植的优质柴胡种质资源,并探索综合评价柴胡质量的新方法,对14个具有代表性的柴胡样品的12个性状采用灰色关联分析融入DTOPSIS法,建立一种新型柴胡质量综合评价方法。结果表明,8,10号柴胡种质资源综合质量最优,可在青川县推广种植;采用灰色关联度法与DTOPSIS法的综合评价结果一致,DTOPSIS法中C i的最大差异达到46.33%,灰色关联度法中加权关联系数r i的最大差异仅有13.10%;灰色关联度分析与DTOPSIS法结合能全面、客观地评价柴胡资源质量。

我国柴胡的种质资源现状与育种研究展望

柴胡为常用大宗药材之一,为顺应中药材规范化生产的趋势,家种柴胡已成为主要的药材供应源,对良种的需求日益急切。总结了我国柴胡种质资源的形态多样性、细胞核型多样性和分子遗传多样性特征,并对目前柴胡育种成果进行综述,建议今后柴胡育种工作以优良种质资源为基础,结合传统选种法和现代分子育种法选育良种。

柴胡主根与侧根中柴胡皂苷a及皂苷d含量测定

目的:优化并建立柴胡皂苷a及皂苷d含量的测定方法,遴选优质柴胡种质资源,并指导柴胡根部药材用药方式以及柴胡育种方向。方法:采用HPLC测定不同生长区域的14个北柴胡样品的主根和侧根中柴胡皂苷a及皂苷d含量。使用Agilent Zor-bax C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%磷酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0～10 min,10%B→25%B;10～15min,25%B→30%B;15～30 min,30%B→40%B;30～45 min,40%B→60%B;45～55 min,60%B→10%B),流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温40℃。结果:柴胡皂苷a和柴胡皂苷d进样浓度分别在在1.92～19.99μg·mL-1(r=0.9999,n=5)和1.94～19.97μg·mL-1(r=0.9999,n=5)范围内呈良好线性关系。14个样品的主根中柴胡皂苷a、d含量范围分别为0.06%～0.74%和0.27%～0.77%,侧根种柴胡皂苷a、d含量范围分别为0.08%～0.49%和0.61%～1.51%。结论:本方法可同时测定柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量;同时本实验结果可用于指导传统中医用药或现代医药提取等对柴胡的利用过程,有必要考虑柴胡主根及侧根用量大小的区别,质量更优的柴胡侧根应当获得重视,进而达到正确、有效利用柴胡资源的目的。

锌硼钼配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响

采用"3414"肥料效应试验方案,对北柴胡进行不同配比的锌硼钼配施处理,通过测定北柴胡干物质积累量和柴胡皂苷a,d含量动态变化以及北柴胡产量,考察不同浓度的锌(Zn)硼(B)钼(Mo)配施对北柴胡产量及柴胡皂苷a,d含量的影响。结果发现适宜配比的锌硼钼配施对北柴胡干物质积累及分配有积极的调节作用,处理Zn2B2Mo3不仅能促进干物质积累,还利于干物质有效地向地下部分转移;一定范围内,单施Zn,Mo肥均能够增加北柴胡根部的产量,处理Zn2B2Mo1的产量为所有处理中的最大值。回归分析结果表明:适当调整微肥配施,按Zn 48.45 g·hm-2,B 355.05 g·hm-2,Mo 86.40 g·hm-2的配方,北柴胡能够获得3 313.05 kg·hm-2的产量;处理Zn2B3Mo2的锌硼钼配比最有利于北柴胡根部柴胡皂苷a,d总量的增加,回归分析结果表明:最佳微肥施肥量为Zn 36.15 g·hm-2,B 343.05 g·hm-2,Mo 106.35 g·hm-2,此配方下,柴胡皂苷a,d总量能够达到1.23%。该研究首次发现适宜配比的锌硼钼配施能够提高北柴胡的根部产量,并能够促进柴胡皂苷a,d的积累。

Topsis法综合比较不同采收期青川产北柴胡种子产量质量

为探究不同采收期青川产北柴胡种子的综合质量差异,优化该种子生产技术,作者分析了不同采收期青川产北柴胡种子的产量、外观、千粒重、吸水性能、萌发指数、采后胚发育情况和香豆素相对含量,并用Topsis法对其种子产量、内在质量和外在质量进行综合评比。结果表明,采收期对青川产北柴胡种子产量和质量影响明显,采收期越晚单株种子产量越高,瘪粒率越低,幼苗质量越好,而萌发抑制物香豆素的含量保持上升,萌发率也有所下降,3个采收期种子的综合质量排序为黑熟期>褐熟期>黄熟期。由此可知,青川产北柴胡种子的采收期越靠后,产量和综合质量越高,生产上可视具体情况适当延后种子的采收期。

北柴胡种子生物学研究进展

北柴胡是我国常用的大宗药材之一,具有良好的开发前景,近年来对其胚胎学及种子生物学的研究取得很大进展。作者综述了北柴胡的胚胎发育、果实形成、种子休眠特性、贮藏特性和萌发特性等内容,总结其种子萌发率低的原因和萌发条件改良所取得的成果,以期为北柴胡种子生理的深入研究提供参考。

柴胡属植物分类研究进展

作者综述了柴胡属植物的分类学研究进程,着重探讨了柴胡在形态学分类、化学分类、显微特征分类以及分子生物学分类方面的研究进展。指出多种分类方法联用是柴胡属内分种的最有效手段,结合当前柴胡药材市场供求紧张的现状,提出当前柴胡分类学的工作重点在于结合药理学研究以发掘柴胡新药源。

激素处理、光照、温度对北柴胡出苗特性的影响

“中柴1号”北柴胡种子播种在以大田耕层土作为育苗床的塑料盆中，并在温度15，20，25，15～25℃，光照8，12h的光照培养箱中进行出苗试验。结果表明较低恒温温度（15℃）与较高恒温温度（25℃）均不利于北柴胡出苗，但对增强幼苗根系活力有一定的促进作用；变温（15～25℃）较恒温显著促进北柴胡出苗；光照时间12h时，能够提高北柴胡出苗速率、出苗指数、活力指数及幼苗根系活力，但不能提高北柴胡出苗率；赤霉素、细胞分裂素、水杨酸等对柴胡种子进行浸种处理，能在一定程度上提高柴胡种子的萌发及出苗。赤霉素能促进北柴胡出苗及幼苗根系活力的提高；水杨酸能够提高幼苗根系活力。光照、温度与激素处理对北柴胡种子出苗均有显著影响，且三者存在显著互作效应；气温在20℃上下5℃波动，光照每天在8h左右，并采用赤霉素10×10-6进行激素处理最有利于提高北柴胡出苗率。

柴胡药渣对锌离子的吸附动力学特性

为了探讨柴胡药渣对含锌废水的吸附特性和液相pH值、电导率变化特性，以柴胡药渣为生物吸附剂，进行了Zn^2＋批量吸附实验研究。分析了液相pH值、Zn^2＋初始浓度（G）、柴胡药渣加入质量浓度（所）、粒度（M）等因素对吸附效果的影响，并进行等温吸附模拟及吸附动力学相关分析。结果表明，实验室环境下的较佳的吸附条件为：pH值为4．0～6．0，所为4．0-8．0g／L，Mz为40-100目。C0为0．1-2．0mmol／L。柴胡药渣对Zn^2＋的等温吸附结果很好符合了Langmuir和Freunlich吸附模型。R^2分别为0．978和0．989；计算所得最大吸附量（qmax）达到19．96mg／g，说明柴胡药渣对Zn^2＋有很好的吸附能力。动力学吸附分析表明。柴胡药渣对Zn^2＋的吸附是一个快速进行的反应过程，二级吸附速率方程拟合结果中R^2均在0．997以上。由此认为其吸附反应过程中限速步骤是化学吸附过程。柴胡药渣对Zn^2＋吸附过程中液相pH值分析表明，pH值呈现初始阶段迅速升高后进入缓慢变化的趋势。