附子内生放线菌EA12432抗真菌次级代谢产物研究

目的对一株分离自四川江油附子的放线菌EAl2432，研究其产生的抗真菌次级代谢产物。方法采用多相分类方法对菌株进行鉴定；采用有机溶剂萃取、硅胶柱层析和制备型HPLC分离获得活性单体，通过紫外可见光谱、质谱和核磁共振谱测定分析及天然产物数据库检索，对化合物进行结构确证；采用微量液体稀释法对化合物进行抗烟曲霉、抗白色念珠菌和抗新型隐球菌的活性测定。结果鉴定内生菌EAl2432为白长链霉菌，其发酵产物中分离获得5个次级代谢产物，其结构分别与文献报道的SF2738A、B、C、D及F同质。化合物1、2和4具有较强抗真菌活性，其IC90值的范围为1．74—57．92μmol／L。结论首次报道了从江油附子样本中分离出内生白长链霉菌EAl2432，其产生5个2，2’-联吡啶类已知化合物，化合物4（SF2738D）具有中等强度的抗真菌活性。

Box-Behnken响应面法优化去氧氟尿苷缓释片处方及其体外释放机制研究

目的响应面法优化去氧氟尿苷骨架片处方,并进行体外释放机制研究。方法以羟丙甲纤维素(HPMC K4M)为骨架材料,结合其他辅料混合均匀,以直接压片法制备去氧氟尿苷骨架缓释片。通过Box-Behnken响应面法(Box-Behnken designresponse surface methodology,BBD-RSM)对处方进行优化,研究优化处方的体外释药规律,并进行数学模型拟合。结果优化处方的去氧氟尿苷骨架缓释片体外释放性能良好,可持续释药24h,药物释放符合Ritger-peppas模型。结论通过BBD-RSM建立的模型可用于去氧氟尿苷骨架缓释片的处方优化,优化处方达到去氧氟尿苷缓释骨架片设计要求。

亲水作用色谱法测定纽莫康定B0及其杂质的研究

目的建立同时检测纽莫康定发酵液中纽莫康定A0、Bo和C0的含量的HILIC方法a方法采用Xlon色谱柱（4．6mm×250mm，10μm）进行分离，以乙腈和水（87：13）为流动相；流速为2．0mL／min;检测波长：210rim；柱温：30℃进样量10此。结果纽莫康定A0、B0和c0三者质量浓度与峰面积分别在0．23-150μg／mL、0．12～100μg／mL、0．34～70μg／mL范围内线性关系良好，尺。均大于0．9993，平均加样回收率分别为96．73％（RSD，1．52％）、99．62％（RSD，1．77％）、102．35％（RSD，2．08％）。结论HILIC法同时检测纽莫康定A0、Bo和co含量的方法简单可行、精密度高、重复性好，为工业生产中分离纯化及质量控制提供依据。

依帕列净的合成工艺研究

以5-溴-2-氯苯甲酸为原料,经酰氯化、傅克酰化反应、亲核取代、还原得中间体(S)-4-溴-1-氯-2-(4-四氢呋喃-3-基氧基-苄基)苯,该中间体与2,3,4,6-四-O-三甲基硅基-D-吡喃葡萄糖酸1,5-内酯经缩合、醚化、脱甲氧基得依帕列净,总收率29.8%,纯度99.13%,其结构经1HNMR及MS确证。

四季青中原儿茶酸在beagle犬体内的药动学研究

目的建立LC-MS/MS法测定血浆中原儿茶酸的浓度,并对beagle犬灌胃四季青水煎液后原儿茶酸的药动学进行研究。方法 Beagle犬血浆样品以酮洛芬为内标,用乙腈沉淀蛋白,采用LC-MS/MS法进行分离和测定。色谱柱为C18(4.6mm×100mm,2.7μm);流动相为80%乙腈-20%水(含0.1%甲酸),流速为0.2mL/min,柱温为30℃。质谱条件:电喷雾离子源(ESI),负离子模式,多反应离子监测(MRM),检测离子为原儿茶酸m/z 153.0→109.0,内标酮洛芬m/z 253.1→209.1。6只beagle犬单次灌胃四季青水煎液50mL(0.2g/mL)后,于给药前及给药后0.083、0.167、0.333、0.5、0.667、0.833、1、1.5、2、3、4和6h采血,以LC-MS/MS法测定原儿茶酸在beagle犬体内的血浆浓度,并用非房室模型计算药动学参数。结果原儿茶酸浓度在0.05～2.00μg/mL范围内线性关系良好,定量下限为0.05μg/mL,批内和批间精密度RSD均小于8.6%,准确度为92.3%～102.0%。Beagle犬分别单次灌胃1g/kg(生药量)四季青水煎液后,其主要药动学参数Cmax为(1.53±0.33)μg/mL,Tmax为(0.42±0.09)h,t1/2为(0.80±0.16)h,MRT0～t为(1.04±0.14)h,MRT0～∞为(1.32±0.26)h,AUC0～t为(1.90±0.35)(μg/mL)·h,AUC0-∞为(2.02±0.33)(μg/mL)·h。结论本实验中建立的LC-MS/MS法专属性强、快速灵敏,可以用于犬血浆中原儿茶酸的测定。Beagle犬单次灌胃四季青水煎液后,血浆中原儿茶酸能快速吸收,达峰速度较快,在体内能滞留一定时间,有利于四季青药效作用的发挥。

新型广谱头孢菌素ceftolozane

Ceftolozane是一种新型的头孢菌素类抗生素,对铜绿假单胞菌以及多重耐药铜绿假单胞菌等革兰阴性菌显示出较强的抗菌活性。2014年12月ceftolozane/三唑巴坦(CXA-201)获得FDA批准上市,用于治疗复杂性腹腔内感染(c IAI)和复杂性尿路感染(c UTI)。本文对其作用机制、合成路线、体外抗菌活性、药动学和临床试验等进行了综述。

药用辅料聚乙烯醇质量标准对比研究

目的对比研究药用辅料级聚乙烯醇国内外质量标准,为其国内质量标准的提高提供参考,对进一步规范国内厂家药用级聚乙烯醇的生产、认证、检查提出意见及建议。方法参考《中国药典》(2010版)、《美国药典》(36版)和《欧洲药典》(7.0版)及其他质量标准的要求,从溶液颜色及澄清度、砷盐、水不溶物、皂化值、水解度、残留溶剂等方面进行了研究。结果《中国药典》(2010版)在对药用聚乙烯醇标准规定上不如国外标准,本文研究内容对国内部分标准进行了修订和补充。结论药用辅料聚乙烯醇国内质量标准有待进一步的完善和提高。

D-环丝氨酸抑制铜绿假单胞菌群体感应活性研究

目的以铜绿假单胞菌模式菌株PAO1为研究对象,研究抗结核药物D-环丝氨酸通过靶向抑制病原菌群体感应(quorum-sensing,QS)系统实现抑制病原菌毒力发挥的新应用潜力。方法用不同浓度的D-环丝氨酸处理铜绿假单胞菌,通过系列表型实验结合荧光定量PCR以评估D-环丝氨酸对群体感应所调节的毒力因子和相应基因表达的影响,并利用秀丽隐杆线虫感染模型评估D-环丝氨酸对铜绿假单胞菌毒力抑制的体内活性。结果 D-环丝氨酸表现出良好的铜绿假单胞菌生物膜、绿脓菌素以及蛋白水解酶抑制活性,显著抑制了QS系统调控基因和下游功能基因的表达,并且可以显著提高秀丽隐杆线虫在铜绿假单胞菌感染过程的存活率。结论 D-环丝氨酸可以有效抑制铜绿假单胞菌群体感应系统,有望开发成功的抗生素替代药物。

林麝化脓病病原菌化脓隐秘杆菌与铜绿假单胞菌互作机制研究

化脓隐秘杆菌Trueperella pyogenes是我国Ⅰ级重点保护野生动物林麝Moschus berezovskii的化脓病原发病原菌,但在化脓病后期的病灶中常能检测到大量铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。虽然在病灶中能同时分离到这2种病原菌,但是它们的种间关系以及优势菌转换机制很大程度上未知。本研究通过构建多种铜绿假单胞菌群体感应基因敲除菌株并结合平板距离培养实验,探讨了化脓隐秘杆菌与铜绿假单胞菌的种间互作关系。结果发现,野生型铜绿假单胞菌的胞外产物可以显著抑制化脓隐秘杆菌的生长;不同铜绿假单胞菌群体感应关键基因缺失菌株均表现出对化脓隐秘杆菌不同程度的抑制作用,但与单突变菌株相比,lasR和rhlR双突变菌株对化脓隐秘杆菌的抑制作用明显减弱。这些发现表明,铜绿假单胞菌可以通过群体感应系统介导的胞外产物来提高对化脓隐秘杆菌的竞争优势。因此,本研究为林麝化脓病过程中的优势病原菌的替换和病情恶化甚至死亡提供了合理的解释,也有助于进一步提高对林麝化脓病病理的认识、治疗方案的改进和新型抗感染药物的研发。

环丙沙星对小鼠肝细胞自噬研究

目的研究环丙沙星对小鼠肝细胞的自噬作用及基因表达。方法小鼠随机分为对照组和实验组,实验组小鼠给药环丙沙星1周,采用自噬溶酶体荧光探针检测小鼠肝细胞自噬溶酶体,利用全基因组表达谱基因芯片技术筛选差异基因。结果自噬溶酶体荧光探针检测到实验组小鼠肝细胞荧光强度降低,全基因组表达谱芯片技术发现Akr1b7/Pfkfb3调节果糖及甘露糖代谢信号通路有统计学显著差异(P<0.05)。结论环丙沙星(13.5g/kg)抑制小鼠肝细胞自噬,Pfkfb3基因可能是环丙沙星给药后影响自噬以及糖代谢的靶点之一,并且可能是通过AMPK/m TORC1途径影响自噬。

SGLT2抑制剂托格列净的研究进展

托格列净(Tofogliflozin)是一种口服活性小分子SGLT2抑制剂,由日本中外(Chugai)制药开发并用于2型糖尿病(T2DM)的治疗。托格列净对SGLT2的选择性抑制作用是SGLT1的2900多倍,与达格列净、坎格列净、伊格列净、伊帕列净和鲁格列净相比具有更强的选择性。本文对托格列净的发现、药效学、药代动力学、副作用及合成路线进行综述。

氨基糖苷类抗生素的耐药机制研究进展

氨基糖苷类抗生素(AG)是高效的广谱抗生素,用于治疗许多革兰阴性菌和一些革兰阳性菌感染,随着临床的广泛应用,细菌的耐药性日趋严重。本文主要从核糖体修饰作用、氨基糖苷类抗生素的修饰酶的作用、药物的外排泵系统等方面对AGs的耐药机制进行阐述,为能合理使用AGs、控制细菌耐药性蔓延以及新型AG药物的开发提供参考。

微生物来源的缩肽类化合物enopeptin A的研究(Ⅰ)：菌种选育及发酵工艺研究

Enopeptin A是一种缩酚酸肽类化合物,具有抗菌、抗病毒等生物活性。以本实验室保藏的链霉菌SIIA-H7264为出发菌,通过紫外(UV)照射、甲基磺酸乙酯(EMS)诱变、亚硝基胍(NTG)诱变以及常压室温等离子体(ARTP)诱变,获得1株高产突变株A-21,其发酵产物Enopeptin A的产量较出发菌株提高了3倍。对发酵条件、发酵培养基组分进行单因素及响应面优化试验,最终Enopeptin A的产量达到1750μg/m L,较初始工艺提高了2.98倍。

替利定药物树脂混悬剂初步质量研究

目的对制备的替利定药物树脂混悬剂进行初步的含量测定和溶出度检测方法的质量研究。方法采用HPLC，用依利特spherisorb C8色谱柱（20cm×4．6mm，5μm）；以甲醇-0．2％碳酸铵溶液（75：25）为流动相；检测波长254nm；柱温30℃；流速1mL／min。结果依照上述方法进行含量测定，试验结果显示，在浓度为0．005-5mg／mL范围内，具有良好的线性范围（r=0．9998），平均回收率100．2％、100．1％和100．0％；溶出度检测结果显示，在0．005-0．1mg／mL浓度内（r=0．9997），浓度与峰面积呈良好的线性，平均回收率较高。结论该法简单可行，质量可控，为替利定药物树脂混悬剂的质量标准的建立提供了依据。

环丙沙星对小鼠原代肝细胞基因表达谱芯片的研究

目的研究环丙沙星对小鼠原代肝细胞基因表达的影响。方法实验组(EG)和对照组(CG)小鼠分别灌胃给予环丙沙星和生理盐水7d提取肝细胞,采用Agilent基因表达谱芯片技术检测基因表达,对差异表达基因进行生物信息学分析,并挑选部分基因进行荧光定量PCR验证。结果 (1)实验组小鼠肝细胞中共筛选到328个差异表达基因(fold-change>1.5或<0.667)。(2)基因本体论(gene ontology,GO)功能分析显示差异表达基因主要富集在细胞有丝分裂周期、转移酶活性调节、催化活性调节和细胞周期调控等生物学过程;KEGG pathway分析则显示内吞、P53和HIF-1信号通路受到影响。(3)环丙沙星上调SCARA5和OSGIN1基因,下调PFKFB3和SMOC2基因,4个基因表达的荧光定量PCR与芯片测试结果相符。结论环丙沙星影响肿瘤发生发展的生物学过程,并可能通过调控SCARA5、OSGIN1、PFKFB3和SMOC2等肿瘤相关基因发挥抗肿瘤活性。

空间立构pH敏感喜树碱新型纳米胶束药动学研究

目的研究喜树碱新型纳米胶束在大鼠体内的药动学及小鼠体内的组织分布。方法取SD大鼠20只,随机分成4组,分别给予喜树碱纳米胶束或喜树碱混悬型注射液,乙酸乙酯萃取后HPLC法测定血浆中内酯型喜树碱的浓度,DAS 2.0药动学软件计算药代动力学参数。取小鼠24只,随机分成2组,分别给予喜树碱纳米胶束或喜树碱混悬型注射液,用Origin 9.0软件计算内酯型喜树碱的组织暴露量。结果大鼠胶束组的C max和AUC(0-t)随着给药剂量的增加而增加,在(0.25~1)mg·kg-1给药剂量下呈线性关系。在相同给药剂量下,胶束组的AUC(0-t)和t 1/2分别为注射液组的1.32和1.17倍。在小鼠组织分布中,喜树碱注射液组和胶束组的内酯型喜树碱在组织中暴露量的大小顺序分别为肝>肺>心>脾>肾和肺>心>肝>脾>肾。结论载药胶束能有效保护内酯型喜树碱,提高其生物利用度,其在小鼠肺组织中的靶向作用最好。

姜黄素立方液晶制备工艺过程中的光稳定性研究

目的采用高效液相色谱法对姜黄素和姜黄素立方液晶的光稳定性进行考察,研究水、乙醇及pH等对姜黄素光稳定性的影响。方法将不同处方项下的姜黄素立方液晶于不同光照条件下放置,并以HPLC-UV法测定姜黄素含量;通过比较姜黄素立方液晶溶液与姜黄素的乙醇溶液、50%乙醇溶液强光照射下的姜黄素降解情况,研究水对其光降解的影响;对不同pH下姜黄素立方液晶进行强光照射试验。结果以GMO/F127为处方制得的姜黄素立方液晶光稳定性较好;姜黄素在含水介质中,光降解速度加快;姜黄素立方液晶中的游离姜黄素在强光(4500Lx)照射下发生降解,而姜黄素立方液晶的光稳定性较好;酸对姜黄素立方液晶的光稳定性并无明显影响。结论结果表明姜黄素立方液晶对强光不稳定,光照环境下易发生降解,且水可加速姜黄素的光降解。该研究为姜黄素立方液晶的生产工艺及贮存条件选择提供可靠的实验依据。

橄榄链霉菌CD5872产越霉素A的研究

目的放线菌CD5872的分类鉴定及其活性次级代谢产物的研究。方法采用多相分类技术对菌株CD5872进行初步鉴定;菌株发酵液通过离子交换树脂和硅胶柱层析技术分离获得单体化合物CD-1。根据高分辨质谱、核磁共振谱图、天然产物数据库检索和高效液相分析确定活性化合物的结构。结果该菌株为橄榄网状链霉菌(Streptomyces olivoreticuli),化合物CD-1为越霉素A(destomycin A)。结论首次报道越霉素A的新产生菌,具有工业化开发价值。

内生真菌SIIA-F13642产生的抗真菌次级代谢产物研究

目的研究植物内生真菌SIIA-F13642产生的抗真菌次级代谢产物。方法基于r DNA-ITS序列对菌株进行分子分类学鉴定;采用乙酸乙酯萃取、C_(18)硅胶柱层析和制备型HPLC分离目标化合物;采用波谱学数据解析其结构。结果鉴定SIIA-F13642为地杨梅粘鞭霉(Gliomastix luzulae(Fuckel)E.W.Mason ex S.Hughes),产生3个主要的已知抗真菌化合物virescenoside A,virescenoside B和[Thr^2,Leu^5,Ala^(10)]Cyclosporin,抗新型隐球菌SIA1017的MIC值分别为0.2、0.78和0.78mg/m L。结论地杨梅粘鞭霉SIIA-F13642产生3个主要次级代谢产物virescenoside B(1)、virescenoside A(2)和[Thr^2,Leu^5,Ala^(10)]Cyclosporin(3),具有抗新型隐球菌的活性。

HIV-1整合酶四聚体的模建及结构基础研究

HIV-1整合酶(HIV-1 IN)是目前开发抗艾滋病药中最具潜力的药物靶点之一,四聚体是该蛋白发挥生物学功能的主要聚集体形式。为了得到IN四聚体与病毒DNA的复合物,并研究其运动性与生物学功能的关系,采用同源模建、结构优化及叠落等方法,在Tn5转座酶的基础上建立了IN-DNA的复合物模型,并采用高斯网络模型和各向异性网络模型研究四聚体的运动模式。Ramachandran Plot分布和Profile-3D结果验证了复合物模型的合理性。运动模式结果表明,四聚体的N-端、C-端的运动有利于螯合DNA,而核心区的稳定状态是IN发挥整合作用的前提。分子对接结果表明,IN抑制剂更偏向于结合在四聚体中间CCD与病毒DNA结合的区域。