庆大霉素致大鼠肾毒性模型中早期生物标志物的表达

通过研究肾毒性早期生物标志物肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)在庆大霉素诱导的大鼠肾毒性模型中的表达,探讨其在氨基糖苷类药物安全性评价中的应用价值.将45只SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、庆大霉素低剂量组(50 mg/kg)和庆大霉素高剂量组(100 mg/kg),每组15只,连续肌内注射7 d,对照组给予等体积0.9%氯化钠注射液.给药第1、3和7天分别处死各组5只大鼠,腹主动脉采血检测血清肌酐(serum creatinine,SCr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,肾组织HE染色观察病理改变,实时荧光定量PCR法和免疫组织化学检测KIM-1和NGAL的表达.结果表明,血清肌酐和尿素氮水平仅在给药第7天明显升高;病理组织学观察发现,肾损伤严重程度随时间及剂量依赖性增加,高剂量组给药7 d后近端小管刷状缘消失,上皮细胞脱落坏死,出现蛋白管型及间质炎性细胞浸润.KIM-1和NGAL的mRNA及蛋白表达水平均在给药第1天就显著上调(P<0.05),之后呈时间-剂量依赖性升高,与病理组织学改变过程相一致,且优先于临床生化检测指标.支持这2个生物标志物作为庆大霉素引起的急性肾损伤的敏感指标.

Ⅱ型糖尿病猕猴部分靶器官中Th1/Th2型细胞因子表达分析

检测Ⅱ型糖尿病猕猴部分靶器官中Ⅰ型辅助T细胞(Th1)因子IL-2和IFN-γ以及Ⅱ型辅助T细胞(Th2)因子IL-4、IL-10的表达及分布变化情况,研究Th1/Th2型细胞因子在Ⅱ型糖尿病发病中的变化。取Ⅱ型糖尿病及健康猕猴胰腺、肝、肾和心脏,通过石蜡切片、常规染色观察病理变化,同时采用免疫组织化学SABC法检测各靶器官IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达及分布情况。病理结果显示:糖尿病猕猴肝血窦增宽伴中性粒细胞浸润,肾、心脏和胰腺细胞呈不同程度肿胀、萎缩及坏死。免疫组织化学结果显示:在肾中Th1型细胞因子IFN-γ表达水平高于健康组(P<0.01)并分布于近曲小管、远曲小管及集合管。胰腺中IFN-γ表达水平与健康组相比差异无统计学意义(P>0.05),阳性产物分布于胰岛部及外分泌部。胰腺及肾中Th1型细胞因子IL-2表达水平与健康组相比差异无统计学意义(P>0.05)。胰腺及肾中Th2型细胞因子IL-4表达水平显著低于健康组(P<0.01),阳性产物分布于远曲小管、胰腺胰岛及外分泌部。在胰腺、肾、肝及心脏中,Th2型细胞因子IL-10表达水平显著高于健康组(P<0.01),阳性产物分布于近曲小管、远曲小管、胰腺胰岛、胰腺外分泌部、心肌细胞及肝细胞的胞质中。Th1/Th2型细胞因子在Ⅱ型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)的发病过程中发生了显著变化。

线粒体凋亡相关因子在大鼠自发性乳腺肿瘤中的表达

目的探讨SD大鼠自发性乳腺肿瘤中线粒体凋亡通路相关因子的表达情况及作用机制。方法将130只(♀∶♂=1∶1)Sprague-Dawley(SD)大鼠于SPF屏障环境中饲养,收集大鼠自发性乳腺肿瘤组织,通过病理学检查对肿瘤进行定性并分类,分为3组:正常乳腺组织(I组),良性乳腺肿瘤组织(II组)和恶性乳腺肿瘤组织(III组)。分别使用RT-PCR法和免疫组织化学法检测各样品中AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3、XIAP的mRNA和蛋白的表达。结果 130只大鼠中有14只检出自发性乳腺肿瘤,肿瘤发生率为10.77%;其中7只发生乳腺纤维腺瘤,7只发生乳腺癌,良、恶性肿瘤发生率均为5.38%。免疫组化结果如下,与I组相比,II组中AIF、APAF-1、caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Cyt C、XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01),Ⅲ组中AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3蛋白表达均显著减弱(P<0.01),仅XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01);与II组相比,III组中AIF、Cyt C、caspase-3蛋白表达显著减弱(P<0.01),APAF-1、XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01)。RT-PCR结果中,除APAF-1的mRNA与蛋白表达显著相关(P<0.05),其余因子与免疫组化的结果极显著相关(P<0.01)。结论乳腺肿瘤是SD大鼠常见的肿瘤,线粒体凋亡通路相关因子AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3、XIAP在乳腺肿瘤中的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关。

以色列梅尔医学中心药学框架与药事管理探析

目的为我国医院药学工作的改进提供参考。方法以作者赴以色列梅尔医学中心(MMC)进行医院药学与临床药学研修的经历为基础,介绍该中心药学框架及工作模式、药事管理、药师培养模式等,并与我国医院药学现状进行比较。结果MMC药学模式注重患者用药安全有效,调剂药师的药学专业知识得到充分发挥,特殊药品管控严格,药事管理突出效率,药师培养注重实践。结论在以MMC为代表的以色列医院药学管理中,药师可充分发挥专业性和技术性服务的优势,"以患者为中心"的药学服务宗旨得到充分落实,值得我国药学工作者借鉴和学习。

大鼠自发性乳腺肿瘤中Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

通过130只(雌雄对半)Sprague-Dawley(SD)大鼠进行自发性乳腺肿瘤造模,并研究自发产生的乳腺肿瘤组织的病理变化及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukmia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(B cell lymphoma/leukmia-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)在乳腺肿瘤中的蛋白和m RNA表达变化。造模结果显示共有14只雌性大鼠发生乳腺肿瘤,对总体而言肿瘤的发病率为10.77%(14/130);由于雄性大鼠未见乳腺肿瘤,在雌性大鼠中肿瘤的发病率为21.54%(14/65)。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色病理切片观察确定肿瘤分型分别为乳腺纤维腺瘤7例,乳腺腺癌3例,乳腺乳头状癌2例,乳腺浸润性导管癌2例。免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结果显示,对照组(n=5)Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达量分别为9.75±0.04、8.13±0.35和6.60±0.04,而这3个因子在良性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为8.16±0.16、9.14±0.22和4.43±0.1。另外,其在恶性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为6.49±0.32、9.24±0.81和3.03±0.10,与对照组相比,Bax和Caspase-3在病变组的表达极显著减少(P<0.01),而Bcl-2在病变组中的表达与对照组相比也显著增加(P<0.05),且正常对照组Bcl-2/Bax比值小于1,而在良性组和恶性组则均大于1。荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR)结果通过相对定量计算显示,Bax、Bcl-2和Caspase-3在各组中的m RNA的表达量变化与蛋白表达一致,相比差异有高度统计学意义(P<0.01)。综上所述,自发性乳腺肿瘤在雌性大鼠中的发病率较高,且病变类型多样,而雄性发病率为0;且Bcl-2、Bax和Caspase-3与大鼠自发性乳腺肿瘤的发生有着密切的联系,从而为临床乳腺肿瘤的诊断、治疗和预后提供了新的思考方向。

MPTP诱导慢性帕金森病恒河猴模型的初步建立

拟建立一种不仅操作简便而且能较好模拟帕金森病(Parkinsons disease,PD)临床症状和病理进程的造模方法。选取健康老龄雌性恒河猴12只,随机分为实验组9只(进而按临床症状及行为学评分又分为3个亚组)和对照组3只,以0.2mg/(kg·d)小剂量、多次重复肌内注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)来建立慢性PD恒河猴动物模型,对照组注射同等剂量的0.9%氯化钠溶液。每日于MPTP给药前后观察记录各组动物行为学表现各30min。实验结束后,全部处死动物,采用免疫组织化学法检测黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)的分布与表达变化对模型进行验证。行为学结果显示,实验组动物出现3种不同程度的临床表现,根据其轻重,将其分为3个亚组;TH免疫组织化学结果显示,阳性物质主要分布于神经元胞质和突起内,与对照组相比,实验组中的第1、第2、第3亚组阳性总面积分别减少71.90%,61.90%,45.74%,差异有统计学意义(P<0.01);α-syn免疫组织化学结果显示,阳性物质主要分布于神经突起内,其次为细胞间质,并在濒临死亡动物的黑质致密部检测到路易小体,实验各组动物黑质阳性总面积较对照组分别增加170.29%,137.82%,47.88%,差异有统计学意义(P<0.01)。上述结果表明,采用小剂量、多次重复肌内注射MPTP方式能够建立老龄恒河猴PD动物模型,该模型能够较好地模拟PD病人的临床症状和病理进程,是研究PD病因、发病机制、药物治疗及基因治疗较可靠的实验动物模型。

Lucentis和Avastin治疗激光诱导恒河猴脉络膜新生血管模型的作用

目的通过激光诱导恒河猴眼底脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的形成,建立和人CNV类似的动物模型,用于定量评价Lucentis和Avastin治疗激光诱导引起的CNV的效果。方法采用眼科激光光凝仪围绕恒河猴黄斑中心凹进行光凝造模。光凝后21 d进行眼底荧光血管造影检查,根据荧光渗漏面积将动物分为空白对照组(生理盐水)、Avastin组(每眼1.25 mg)、Lucentis组(每眼0.5mg),均玻璃体内单次注射给药。给药后13 d、28 d进行眼底彩色照相、眼底荧光血管造影、光学相干断层扫描检查,给药后29 d摘取眼球进行病理学检查。结果与空白对照组相比,Avastin组在给药后13 d和28 d,荧光渗漏面积改善率分别为56.1%和82.0%,与空白对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),视网膜厚度改善率分别为14.2%和14.8%,与空白对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01);Lucentis组在给药后13 d和28 d,荧光渗漏面积改善率分别为66.2%和75.6%,与空白对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),视网膜厚度改善率分别为19.8%和18.0%,与空白对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论 Avastin和Lucentis对激光所致的猴眼底CNV均有明显的抑制作用。

双能CT技术在恒河猴非酒精性脂肪性肝病中的应用价值

目的:本研究采用超声和双能CT技术对自发性恒河猴非酒精性脂肪性脂肪肝进行诊断,并与病理结果进行比较,探讨超声和双能CT在脂肪肝诊断中的价值。材料与方法:对70只雄性恒河猴(年龄7~20岁,体质量>7 kg,乙肝和丙肝病毒呈阴性)进行超声检查,选取其中轻度脂肪肝、中度脂肪肝及部分正常动物进行双能CT检查。在双能CT检查之后1周对部分动物进行超声引导的肝脏穿刺活检。进行肝组织病理检查。结果:19例中度脂肪肝,12例轻度脂肪肝和正常恒河猴HU100 k Vp/Sn140 k Vp,ΔHUSn140-100 k Vp和ΔHULv-Sp (50 ke V)分别为0.95±0.04,(2.8±2.1) HU,(-16.4±6.3) HU;1.02±0.03,(-0.7±1.3) HU,(-6.8±5.0) HU和1.11±0.01,(-6.2±0.4) HU,(7.5±1.8) HU。各组之间差异均有显著意义(P<0.001)。与组织病理学结果相关性分析具有较好的相关性(R=-0.57,P<0.01;R=0.54,P<0.01;R=-0.71,P<0.001)。结论:双能CT与病理结果具有很高的一致性,双能CT作为非侵入性检查手段,对脂肪肝的定量具有较高的临床价值。

恒河猴幼猴出生后生长发育参数背景数据及其行为学特征

目的研究恒河猴幼猴出生后12个月的生长发育变化特征及神经行为学特征,建立生长发育参数背景参考数据。方法选取单笼条件下出生的、遗传背景清晰、出生天数明确的18只(雄性11只,雌性7只)恒河猴幼猴,于出生后第1天至360天每月进行体重、身高、头围、胸围、前肢长、后肢长、冠臀长,尾长及肛门生殖器距离等生长发育指标的测量,出生后第28、175和360天进行血液学、血液生化学和淋巴细胞亚群分析检测,出生后第208天进行手指迷路测试。结果体重呈线性增长,性别间差异无显著性(P>0.05);形态发育指标中除肛门生殖器距离雄性显著大于雌性外(P<0.01),其余指标在各检测点性别间差异均无显著性(P>0.05);血液学各指标性别间差异无显著性(P>0.05),出生后第175和360天的RBC和HGB显著高于第28天(P<0.05);与出生后第28天相比,血液生化学中TP和BUN水平在出生后第175和360天均显著升高(P<0.01),ALP虽表现为降低,但差异不显著(P>0.05);与出生后第28天相比,淋巴细胞亚群中CD4+及CD4+/CD8+比值在出生后第175和360天均显著降低(P<0.01),而CD8+比例显著升高(P<0.01);手指迷路测试中,学习期幼猴完成任务2所需测试次数显著多于其他任务,且雌性显著少于雄性(P<0.05),其余任务性别间差异无显著性(P>0.05);记忆期连续2天随机测试雌性幼猴的正确率均显著高于雄性幼猴(P<0.05)。结论体重及形态发育指标与出生天数呈线性增长,血液学、血液生化学和淋巴细胞亚群指标中RBC、HGB、LYMPH、TP、BUN、ALP、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+等出现了与幼猴器官系统生长发育相关的改变,在药物评价中应重点关注,手指迷路测试提示雌性幼猴逆转学习能力及长期记忆优于雄性幼猴。本研究建立了恒河猴幼猴出生后12个月生长发育参数的背景数据及神经行为学特征,为恒河猴生殖发育毒性评价提供了参考依据及数据支持。

磁共振GRE电影序列评价恒河猴心功能的重复性及有效性研究

目的 :对心脏磁共振梯度回波电影序列(Spoiled gradient echo,GRE)评估恒河猴心功能的有效性与重复性进行评价,为开展恒河猴疾病动物模型磁共振研究提供准确、最优的心功能评估策略。方法:正常恒河猴8只,均行超声心动图检查、心脏磁共振GRE电影序列扫描。采用心功能分析软件(cvi^(42))对GRE电影图像进行分析获取左室舒张末容积(EDV)、左室收缩末容积(ESV)、每搏量(SV)、射血分数(EF)、心输出量(CO)、舒张期左室质量(Myo Mass(Diast))以及收缩期左室质量(Myo Mass(Syst))等心功能相关参数值。进行磁共振扫描的复测实验,采用组内相关系数及Bland-Altman分析评价GRE各心功能参数的重复性,以超声心功能结果为相对的标准效度评价GRE各心功能参数的有效性,并对超声和GRE结果进行比较。结果:GRE重复性评价结果显示,各心功能参数的组内相关系数(ICC)值均在0.75~0.97之间,且显著性均小于0.01,重复性评价结果较好,Bland-Altman分析显示复测实验中各指标测量的一致性较高;有效性评价结果显示,除CO外,其余心功能参数的Pearson相关系数(r)值在0.80~0.92之间,具有统计学意义;同时发现GRE获取的EF、CO以及Myo Mass(Diast)要小于超声的测定值,差异具有统计学意义。结论:心脏磁共振GRE电影序列评价正常恒河猴心功能的结果具有较好的有效性与重复性,能有效、稳定地对恒河猴的心功能予以评价。

T1DM猕猴肝中CB1R和GR及FAAH的表达

通过研究1型糖尿病(T1DM)猕猴肝内大麻素1型受体(CB1R)、脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)和糖皮质激素受体(GR)蛋白和mRNA表达量的变化,探讨内源性大麻素系统对糖尿病猕猴肝的影响。苏木精-伊红染色观察糖尿病猕猴肝的病理变化,均可见肝细胞肿胀伴气球样变,不同程度脂肪变性。油红O染色结果显示,糖尿病猕猴组猕猴肝中脂滴含量显著高于对照组(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,糖尿病组猕猴肝中CB1R表达量高于对照组(P<0.05),而糖尿病组猕猴肝中FAAH、GR表达量均低于对照组(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,CB1R、GR、FAAH的mRNA的表达量变化与蛋白表达一致,对照组与糖尿病组差异相比有高度统计学意义(P<0.01)。结果表明,CB1R、GR、FAAH与T1DM猕猴肝病理损伤密切相关,可为临床上该疾病的监测与治疗提供依据。

自发性2型糖尿病恒河猴双心室形变的心脏磁共振分析

目的利用心脏磁共振组织追踪技术(CMR-tissue tracking)探讨自发性2型糖尿病(T2DM)恒河猴双心室的心肌形变特征。方法选取12只雄性自发性T2DM恒河猴以及9只年龄、性别及体质量匹配的健康恒河猴,排除高血压、心肌梗死;测定空腹血糖、糖化血红蛋白水平以及血脂水平;行CMR扫描覆盖左、右心室的电影序列,使用常规心功能分析及CMR-tissue tracking后处理评价双心室的心功能以及心肌形变。结果 T2DM组空腹血糖及糖化血红蛋白水平明显增高,两组间体质量、年龄差异无统计学意义。心功能分析显示T2DM组双心室射血分数均无显著降低;组织追踪结果显示右室自由壁的收缩形变参数[包括径向及环向应变峰值(Err、Ecc)、收缩期应变率峰值(SSRR、SSRC)的大小]均明显降低,舒张形变参数[包括径向、环向和纵向舒张期应变率峰值(DSRR、DSRC、DSRL)的大小]均显著降低;而左室的收缩形变参数[径向及环向应变峰值(Err、Ecc)]以及舒张形变参数[径向舒张期应变率峰值(DSRR)]显著降低。结论 CMR-tissue tracking技术能发现自发性T2DM恒河猴的右心室与左心室同时存在收缩及舒张形变功能的异常。

PPAR泛激动剂对自发性2型糖尿病恒河猴血糖及心脏功能的影响

目的考察过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)泛激动剂口服给药对自发性2型糖尿病(T2DM)恒河猴降血糖作用及心脏功能的影响。方法连续给予Ⅱ型糖尿病恒河猴服药一个月,测定试验期内PPAR泛激动剂组、吡格列酮组与模型组的空腹血糖、糖耐量试验、糖化血红蛋白、体重和胰岛素;检测给药前后猴心脏功能的变化。结果在给药后第14、21、28天,各给药组的空腹血糖均明显降低。给药后PPAR泛激动剂组和吡格列酮组的平均空腹血糖分别下降14.54%、15.09%;各给药组的餐后血糖降低幅度均大于模型组的;各给药组的糖化血红蛋白均明显低于给药前的;给药前、后各组猴的体重无明显变化。给药后,PPAR泛激动剂组的空腹胰岛素明显降低,左室平均舒张末期容积、收缩末期容积和每搏输出量显著增加。结论自发性Ⅱ型糖尿病恒河猴在连续给予PPAR泛激动剂一月后表现出显著的血糖和空腹胰岛素降低,其对心脏功能的影响还需要进一步研究。