改良法分离培养人牙周膜干细胞

目的改良法体外分离培养人牙周膜干细胞(PDLSC),并进行鉴定。方法采用酶消化组织块法获得人牙周膜细胞,通过有限稀释法克隆化培养、分离得到PDLSC,用含10%FBS的α-MEM培养液培养并传代;测定克隆形成率;免疫组织化学检测角蛋白及波形蛋白表达;流式细胞术分析细胞周期及表面标志物STRO-1、CD146的表达;并进行成骨、成脂诱导实验。结果本研究所得细胞有较强的克隆形成能力,波形蛋白染色阳性,角蛋白阴性,细胞周期分析大多细胞处于G0/G1期,STRO-1及CD146高表达,成骨、成脂诱导实验证明所得细胞有多向分化能力。结论改良法克隆化培养可成功分离得到PDLSC,为进一步研究PDLSC奠定了基础。

purmorphamine促进人牙周膜干细胞应力成骨

目的研究purmorphamine在动态张应力促人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)向成骨细胞分化过程中的作用。方法分离培养鉴定PDLSCs,在矿化诱导环境中加入purmorphamine,采用Flexcell FX-4000T应力加载系统对细胞加力24 h,以Real-time PCR检测成骨相关指标Runx2、alkaline phosphatase(ALP)以及Hedgehog(Hh)通路的标志物GLI1、Pathed1(PTCH1)、Smoothend(SMO)。结果动态张应力作用24 h后,成骨相关指标Runx2、ALP,Hh通路的标志物GLI1、PTCH1、SMO的表达水平明显升高(P<0.05);加入purmorphamine后,成骨相关指标Runx2、ALP,Hh通路的标志物GLI1、PTCH1、SMO的表达水平较加力组均有增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 purmor-phamine可能通过激活Hh通路,进而增强人PDLSCs应力条件下向成骨细胞分化。

IBP促进人涎腺腺样囊性癌细胞对紫杉醇耐药

目的探讨IBP对SACC细胞抗紫杉醇凋亡能力的影响及其机制。方法将ACC2转染IBP组和空白对照组各自根据不同紫杉醇浓度分成5组,紫杉醇作用72 h后,MTT法检测在紫杉醇作用下IBP对SACC细胞增殖的影响;通过微管蛋白Tubulin免疫荧光染色,观察紫杉醇作用前后ACC2细胞微管的变化及IBP与微管的关系。结果 IBP使ACC2细胞对紫杉醇产生一定程度的耐药,在5μg/ml的紫杉醇浓度下最为明显;紫杉醇开始作用后,ACC2-C1细胞的微管点状聚集成团,而ACC2-C1/IBP细胞的微管则出现明显的紊乱、断裂,IBP能促进微管的解聚;IBP所发的绿色荧光与微管的红色荧光糅合在一起呈黄色,IBP与微管存在一定程度的共定位。结论 IBP促进SACC细胞对紫杉醇耐药。

Smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响

目的体外构建及筛选人Smoothened(SMO)基因的慢病毒干扰载体,使用此载体下调人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)中SMO基因表达并检测其对细胞增殖与分化的影响。方法针对人SMO基因设计3条干扰序列,构建RNA干扰慢病毒载体,在293FT细胞中包装病毒液并转染293A细胞,通过实时荧光定量PCR检测干扰效率,得到具有最佳干扰效率的病毒后,转染PDLSCs,用Western blot检测其对PDLSCs中SMO基因的干扰效果及对细胞分化的影响,CCK-8法检测其对PDLSCs增殖的影响。结果成功构建3个SMO慢病毒干扰载体(pGP-SMO1、pGP-SMO2、pGP-SMO3),通过转染293A细胞并进行实时荧光定量PCR检测后,得到pGP-SMO1具有最佳干扰效率,转染后SMO mRNA水平下降到对照的(28.5±2.5)%。利用此病毒能够很好地转染体外培养的PDLSCs,并使PDLSCs中SMO蛋白水平下降80%。进一步检测细胞增殖发现,与未转染组比较,SMO下调后PDLSCs增殖变慢[(1.09±0.20)vs(1.86±0.21),P<0.01]。同时也导致成骨分化标志物Runx2的蛋白表达下调。结论利用慢病毒介导的干扰病毒载体成功干扰了PDLSCs SMO基因的表达,SMO基因的下调会导致PDLSCs增殖减慢,成骨分化能力减弱。

175例牙冠折裂的治疗与修复

外伤、牙髓治疗后未及时冠修复等因素造成牙冠折裂的情况,在口腔门诊治疗中比较常见.由于患者对折裂牙的保留要求日渐增多及治疗方法和修复技术不断提高,折裂牙的保留问越来越引起重视.我科自1994年以来对折裂牙进行修复治疗,避免了部分折裂牙的拔除,取得了较满意的效果.