混合菌培养提高水稻纹枯病生防效果的研究

从水稻根、茎、叶、根际土壤及埋入土壤中的几丁质和纹枯病菌核中 ,分离出 2 5 6株拮抗菌。根据分离来源、生长速度、抑菌特性和几丁质活力等 ,选出 3株对纹枯病有较强抑菌力的代表性菌株进行混合培养试验。结果表明 :混合菌处理 6抑菌活性明显比单一菌种处理 2、 3高 ,其差异竟达 3倍以上 ;混合菌培养处理 4、处理 5及处理 7明显提高了生长速度和抑菌圈直径。混合培养单位含菌量有所提高 ,几丁质酶活性大多高于单菌培养 ,其中处理 6、 7几丁质酶活力在各组合间达极显著水平 ,表明各菌间无相互抑制作用。这对转变传统的使用单一菌株进行生物防治的观念有着积极的意义 。

抗稻瘟病拮抗菌D-2的鉴定及其活性代谢物的研究

经土壤链霉菌的分离、筛选得到抗稻瘟病的强拮抗菌D-2。对峙培养表明,D-2菌株在PDA平板上对稻瘟病菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌和黄瓜枯萎病菌的抑菌率分别为92.2%、78.9%、53.3%和52.2%。根据形态特征、培养特征、细胞壁化学组分分析和生理生化分析,D-2菌株被定名为烬灰吸水链霉菌(Streptomyces cinereohyg roscopicus)。D-2菌株发酵液经乙酸乙酯萃取、浓缩得橙黄色活性粗提物,活性物质在酸性环境下稳定性较差,在中性或偏碱性环境下80℃处理1 h、可见光(4 000 lx)处理12 h、紫外线(2 400 lx)处理4 h活性均保持不变。通过硅胶柱层析和硅胶薄层层析得到了主要的纯活性组分。选择不同的溶剂和乳化剂交叉配制成9种生物农药进行田间小区试验,结果表明:以甲醇作溶剂,吐温80作乳化剂防效最好,达65.69%。

多粘类芽孢杆菌极端嗜热多肽的纯化及性质研究

用加热法从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)LM–3菌株的发酵液中纯化得到2个极端嗜热多肽。平板拮抗实验表明,5μL纯化多肽对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)抑菌率达89.6%。SDS–PAGE电泳显示纯化多肽分子量介于6000～7000u之间。多肽复性后,其中之一对稻瘟病菌表现出强的拮抗活性,命名为APPLM3(Antagonism Polypeptide from Paenibacillus polymyxa LM–3);另一个则无此活性,命名为PPLM3(Polypeptide from Paenibacillus polymyxaLM–3)。APPLM3经氨基酸测序,获得了其N–末端5个氨基酸序列(H2N–ANDPR);以该序列为靶序列在NCBI上进行相似性检索,发现其可能与3个假设蛋白(或推导蛋白)相关。APPLM3为首次报道的兼具极端嗜热性和稻瘟病菌拮抗活性的小分子多肽。

新型微生物源生防乳剂对稻瘟病的防效

以清水、乳化剂和溶剂病指的加权均数为参比,以来源于多粘类芽孢杆菌LM-3菌株的极端嗜热多肽APPLM3为主效成分配得的5种微生物源生防乳剂对水稻稻瘟病进行了室内和田间防效试验。结果表明,母液对稻瘟病菌产生足够强的拮抗作用,拮抗活性较稳定;5种乳剂的防效都优于LM-3拮抗液直接喷雾,其中处理AB4的防效最佳,达80.73%,其拮抗成分、吐温80、乳化剂OP、溶剂的质量比为50∶6.5∶1.75∶41.75。首次报道了常温细菌产生的极端嗜热多肽对稻瘟病菌表现出强的拮抗作用。

广谱抗病虫几丁质酶产生菌X2-23的筛选与鉴定

X2 2 3是从水稻叶片分离到的一种几丁质酶活力较高的菌株 ,经Boller法测定 ,其几丁质酶活性达 2 5 .5U/mL。它对水稻纹枯病、稻瘟病、恶苗病 ,小麦赤霉病 ,油菜菌核病等 10多种真菌病原菌以及水稻白叶枯病菌等细菌病原菌具有不同程度的抑制作用。室内测试表明 ,它对水稻稻苞虫具有杀虫侵染作用 ,饲喂 12、2 4h后 ,其校正死亡率分别达到 5 7.77%、89.88%。该菌经形态学及生理生化特性鉴定 ,初步定为圆孢芽孢杆菌 (Bacillusglobisporus) ,是一种新的几丁质酶产生菌和生防菌。

抑制多种植物病原菌的几丁质酶产生菌X2-23的鉴定

样品经纹枯病菌细胞壁培养基富集后 ,从 16 6株几丁质酶产生菌中分离得到一株高产几丁质酶细菌X2 2 3.X2 2 3对所有指示菌如水稻纹枯病、稻瘟病、水稻恶苗病、小麦赤霉病、油菜菌核病以及水稻白叶枯病等多种病原菌均具强烈的拮抗作用 .当X2 2 3加入上述病原真菌的液体培养基中时 ,由光学显微镜和电子显微镜观察发现病原真菌菌丝发生扭曲、变形、菌丝细胞壁肿胀裂解、细胞质聚集、原生质体外溢或裸露等异常现象 .几丁质酶活性达 2 5 .5U/mL .该细菌经鉴定为圆孢芽孢杆菌 (Bacillusglobisporus) ,是一种新的几丁质酶产生菌 .

极端嗜热多肽的纯化、性质初探及对苗瘟的防效

本试验用加热法从多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）LM-3菌株的发酵液中纯化得到2个极端嗜热多肽。平板拮抗实验表明，5μl纯化多肽对稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）抑菌率达89．6％。SDS—PAGE电泳显示纯化多肽分子量介于6000～7000Da之间。多肽复性后，其中之一对稻瘟病菌表现出强的拮抗活性，命名为APPLM3（Antagonism Polypeptidefrom Paenibacilluspolymyxa LM-3）；另一个则无此活性，命名为PPLM3（Polypeptide from Paenibacillus polymyxa LM-3）。APPLM3经氨基酸测序，获得了其N-末端5个氨基酸序列（H2N—ANDPR）；以该序列为靶序列在NCBI上进行相似性检索，发现其可能与3个假设蛋白（或推导蛋白）相关。以APPLM3为主效成分配得5种微生物源生防乳剂，对水稻苗瘟进行了田间防效试验。试验结果表明，这5种乳剂的防效都优于LM-3拮抗液直接喷雾，其中AB4处理的防效最佳，达80．73％，其拮抗成分、吐温80、乳化剂OP、溶剂的质量比为50：6．5：1．75：41．75。APPLM3为首次报道的兼具极端嗜热性和稻瘟病菌拮抗活性的小分子多肽。

不同处理方式对稻瘟病菌丝致畸作用的比较

用清水、链霉菌D–2的复合诱变菌株和农药春雷霉素3种方式对稻瘟病菌丝进行了处理。结果表明,清水处理对稻瘟病菌丝无任何影响,复合诱变菌株对稻瘟病菌丝的致畸作用主要表现在导致菌丝扭曲和膨大,农药处理对菌丝的致畸作用是使菌丝伸长受抑制,导致菌丝呈颗粒状。

黄瓜根际镰刀菌的分离及初步鉴定

在四川温江特殊生态条件下,从黄瓜根际土壤中共分离到镰刀菌23株。根据显微镜形态观察,确定它们分别属于3类镰刀菌菌株,其中尖孢镰刀菌占43 38%,串珠镰刀菌占26 09%,茄病镰刀菌占30 43%。对其中6株进行黄瓜致病性验证测定,结果有2株病原菌株对蔬菜有明显致病性,4株表现非致病菌或弱毒株。镰刀菌病原菌分离率约为17%。

苏云金芽孢杆菌的筛选和初步鉴定

采集四川温江昆虫孳生地的土壤样本 94份 ,利用醋酸钠 -抗生素法分离、筛选 ,共获得苏云金芽孢杆菌 9株。镜检可观察到大菱形、小菱形、方形、圆形等四种主要形态的伴胞晶体 ;采用cryI、cryII、cryIII、cryV基因的通用对 9株Bt分离菌进行的PCR检测结果表明 :9株菌全部含cryⅠ和cryV基因 ,2株菌含cryII基因 ,5株菌含cryⅢ基因 ,而且各菌株均包含 2～ 3个基因型。利用这些菌株对菜青虫进行了室内和室外生物毒力测定 ,达到了较好的杀虫效果。