猪囊尾蚴cDNA表达文库构建及抗原基因筛选

采用Ｑｕｉｃｋ Ｐｒｅｐ ｍ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 试剂盒提取猪囊尾蚴ｍ ＲＮＡ；Ｔｉｍ ｅ－ Ｓａｖｅｒ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒反转录合成双链ｃＤＮＡ，并在末端加上ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩａｄａｐｔｏｒ，修饰后的ｃＤＮＡ 与λｇｔｌｌＥｃｏＲＩ臂连接，体外包装为λ噬菌体颗粒；感染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０ 构建成功库容量为２×１０６、重组率为８０％ 的ｃＤＮＡ表达文库。利用兔抗猪囊尾蚴虫体抗原和囊液抗原血清分别对一部分文库进行免疫印迹筛选，分别获得８ 个阳性克隆。提取阳性克隆ＤＮＡ，利用ＰＣＲ法从重组噬菌体ＤＮＡ中扩增出ｃＤＮＡ片段，长度自４００—９００ｂｐ。本文工作为研制猪囊尾蚴核酸疫苗打下了基础。