青藏高原细粒棘球绦虫的分子鉴定与遗传变异分析

为了探索青藏高原细粒棘球绦虫的遗传变异特点与系统发生关系,为该地区细粒棘球蚴病的分子诊断、流行病学和防控研究提供基础资料。本研究对采自青藏高原的43株细粒棘球蚴的线粒体ND5基因全序列进行测序及分析,共鉴定出42个分离株属于细粒棘球绦虫G1型,1个西藏绵羊分离株属于细粒棘球绦虫G6型。G1型分离株中,共有43个变异位点,分为27个单倍型,单倍型多样性为0.940±0.028,核苷酸多样性为0.001 93±0.001 14,单倍型之间的平均遗传距离为0.002 6。单倍型网络图以H9为优势单倍型,其余单倍型围绕它呈辐射状。单倍型歧点分布分析呈单峰,中性检验得到显著的负值。结果表明青藏高原细粒棘球绦虫流行的主要基因型为G1型,且种内变异较小。

共表达猪IL-4/6与抗菌肽融合基因的重组酵母菌的生物活性及其对小鼠免疫增强作用研究

为开发高效安全经济的免疫调节剂,本研究构建了共表达猪IL-4/6和猪抗菌肽融合基因VRP的重组毕赤酵母SG46P。通过猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验检测其发酵上清液的生物学活性和抑菌活性,并用该重组毕赤酵母对30只21日龄雌性ICR小鼠进行灌胃接种。接种后,每周采集小鼠尾部静脉血进行免疫功能分析试验;并在第28 d用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行小鼠腹腔攻毒试验。结果显示:实验组SG46P的发酵上清液较对照组能显著刺激猪淋巴细胞的增殖(p<0.05),且该发酵上清液具有明显的抑菌作用(p<0.05)。接种重组毕赤酵母SG46P的小鼠的体质量有所增加(p>0.05)且其外周血中白细胞数量、血红蛋白含量均显著高于对照组(p<0.05);其血清中Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平均较对照组显著增加(p<0.05),其外周血中CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量均显著高于对照组(p<0.05);TLR4、TLR9、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、CD62L、IL-7、IL-23、CAMP和Crp4基因的转录水平均显著高于对照组(p<0.05)。攻毒后,接种SG46P的小鼠的生存率显著高于对照组(p<0.05)。结果表明:重组毕赤酵母SG46P不仅能够显著提高小鼠免疫基因的转录水平,有效提高动物的先天和获得性免疫水平,还可明显增强小鼠抗感染能力,这为研制高效安全经济的分子免疫调节剂和防治动物传染病开拓了新途径。

幼兔复合性肠炎的预防和治疗浅谈

幼兔复合性肠炎典型的临床症状表现为腹泻，其发病率和死亡率都很高。幼兔复合性肠炎发病机理和治疗方案差异较大，如果处理不当，将会对养兔业造成很大危害。由于引起幼兔复合性肠炎的原因很多，比如球虫、链球菌、大肠杆菌、霉菌毒素中毒、饲料中毒、粘液性肠炎、传染性胃肠炎。

表达猪融合IL4/6和抗菌肽重组酵母的构建及对仔猪免疫和生长的影响

为了研发安全有效和增强动物免疫力的新生物制剂,本实验以共表达猪IL-4/6与猪抗菌肽基因和猪IL-2与IL-4/6基因的两种重组毕赤酵母菌进行高密度发酵,并拌入饲料饲喂45日龄仔猪(分组为A1、A2和C组)。实验结果表明,在0~42d内,A1和A2实验组较对照组仔猪体重显著增加(P<0.05),CD^(8+)T细胞数量、特异性抗猪瘟和蓝耳病抗体显著增多(P<0.05),实验组的TLR-2、4、7、NF-k B(p50)、Bcl-2、CD45和CD^(62)L等免疫相关基因表达水平也明显升高(P<0.05)。此外,实验后期,A2组的前述免疫相关基因表达水平明显高于A1组和C组(P<0.05)。这些结果证明,A1和A2组免疫生物制剂能较好地促进仔猪的生长,提高其先天和获得性免疫机能,A2制剂的免疫调节生物效应较优,有望进一步研发为新型安全的免疫生物制剂,为动物的疾病防控提供新技术支持。

共表达猪IL-2与融合抗菌肽重组质粒的构建及其小鼠免疫效应研究

为研制新型高效安全的动物免疫调节剂,本实验采用In-fusion克隆技术、2Aself-cleavage技术构建pVAX1融合抗菌肽与白细胞介素2基因真核共表达载体:CAM PS-2A-IL2(VAP2)。构建的重组质粒用壳聚糖包裹并转染HEK293细胞,通过猪外周血淋巴细胞刺激实验检测表达上清活性。将包裹的重组质粒纳米颗粒腹腔注射接种4周龄的雌性昆明小鼠作体内生物学活性研究。并于28d后用大肠杆菌(Amp、Kana高耐受)和金黄色葡萄球菌(Amp、Kana高耐受)进行攻毒试验,观察每组小鼠的发病率和死亡率。实验结果表明VAP、VAP2两实验组CD^(4+)、CD^(8+)细胞,IgG,IgG1,IgG2a含量以及TLR s,IFN-r等免疫相关因子的表达水平均明显高于对照组pVAX1(P<0.05)。而且两实验组相比较,VAP2组明显高于VAP组(P<0.05)。以上实验结果表明,CS包裹的VAP,VAP2能有效防止病原微生物感染小鼠,增强机体的体液免疫和细胞免疫能力,并且VAP2的作用要明显优于单一抗菌肽融合基因,表明抗菌肽融合基因与白细胞介素2的共表达对动物有更好的保护效应,这为研究新型有效的免疫分子以增强机体对感染的抵抗力奠定了基础,具有重要的学术价值和应用。

猪白细胞介素-2和融合抗菌肽重组酵母菌构建及其对小鼠免疫和生长的协同效应

为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和生长的影响。实验结果显示,处理组(融合抗菌肽重组酵母菌、IL-2和融合抗菌肽重组酵母菌)小鼠的生长明显优于对照组(空质粒酵母菌)(P <0. 05),且血清Ig G、Ig G1和Ig G2a含量显著升高(P <0. 05); TLR1、TLR4、TLR6、TLR9、IL-7、IL-15、IL-23、CD62L、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、CRP4和CAMP基因的表达水平显著增加(P <0. 05)。同时,处理组小鼠血液白细胞Th和Tc细胞明显增多(P <0. 05),免疫力和存活率均明显高于对照组(P <0. 05)。重组酵母菌能有效增强小鼠的先天和获得性免疫力,促进生长,可进一步开发成安全有效的免疫调节生物制剂,改善动物的生长和免疫力。

壳聚糖和普朗尼克介导猪白细胞介素-23基因体内表达对PRRSV疫苗的免疫增强效应

猪繁殖和呼吸综合征(PRRS)是一种严重影响养猪业的高度传染性疾病,目前预防这种疾病的疫苗免疫还存在一定缺陷。本研究旨在探索一种有效的佐剂以提高其免疫效力。将猪IL-23基因重组质粒用壳聚糖和普朗尼克材料包裹制成纳米颗粒,命名为VRIL23-CNP-Pluronic。将28日龄小鼠分为两组,分别肌肉注射VRIL23-CNP-Pluronic(实验组)和VR1020-Pluronic(对照组),两组均同时接种PRRSV疫苗,在接种后第0、7、14、28和35天采集血样并分析免疫变化。实验组中PRRSV特异性抗体、IgG1和IgG2a水平、CD4+和CD8+T淋巴细胞数量均极显著高于对照组(p<0.01);经qRT-PCR分析,与对照组相比,实验组小鼠的IL-23、TLR1、TLR6、STAT1、IL-10、TNF-α、IL-15和CD62L基因表达水平均极显著上调(p<0.01)。结果表明,VRIL23-CNP-Pluronic能促进小鼠对PRRSV疫苗的免疫应答,并为其作为新型PRRSV疫苗佐剂的开发提供理论基础。

猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母的构建及其对小鼠的免疫协同效应

以2A自剪接技术构建猪白细胞介素4／6与牛融合抗菌肽（FBC）共表达重组毕赤酵母，为研究重组酵母对小鼠体内外的免疫协同效应，首先采用猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验研究重组毕赤酵母的体外生物学活性；再以发酵的重组酵母菌液进行小鼠灌胃试验，在试验的28d用致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行腹腔攻毒，每周采血检测小鼠的生长和免疫功能变化。体外试验结果显示，试验组比对照组显著刺激猪淋巴细胞增殖；明显抑制大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、金黄色葡萄球菌标准菌和金黄色葡萄球菌耐药菌的生长（P〈0．05）。小鼠灌胃试验结果表明，试验组小鼠外周血的白细胞、Th和Tc细胞含量显著多于对照组；试验组tlrs（tlr-1，4，6，9），il-1，il2，il-4，il-6，il-7，il-15，il-23和cd62l基因的表达明显高于对照组；试验组血清中的IgG、IgGl和IgG2a的含量比对照组显著增加。此外，试验组小鼠的体质量比对照组明显增加。攻毒后试验组80％的小鼠存活，而对照组小鼠则有明显的炎症及临床症状，最后全部死于感染，这表明试验组的存活率显著高于对照组（P〈0．05）。白细胞介素4／6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母能够有效提高小鼠免疫功能，为探索研制增强动物免疫机能的安全高效的免疫调节剂提供新途径。