乙型肝炎肝硬化患者肝脏病变的相关因素研究

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者肝脏组织炎症活动度(G)的影响因素。方法选取2011年8月-2014年10月于四川省人民医院住院治疗的112例乙型肝炎肝硬化患者进行肝脏组织病理学检查、血生物化学检测及HBV-DNA定量检测。根据肝脏组织病理学检查结果将患者分为G0-G1组、G2组和G3-G4组,比较不同肝脏炎症活动度患者间各临床指标的差异。采用Spearman相关分析和Logstic多元回归分析与肝脏组织炎症活动度相关的因素。结果 112例乙型肝炎肝硬化患者中87例仅有轻度活动性炎症(G0-G1、G2),占77.68%。G0-G1组、G2组及G3-G4组3组患者间年龄、血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、AST-PLT比值(APRI)、前白蛋白(PA)、胆碱酯酶(ChE)、胆汁酸(TBA)等指标差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,肝脏炎症活动度与年龄、PT、AST、γ-GT、APRI、TBA呈正相关(P<0.05);与PLT、PA及Ch E呈负相关(P<0.05)。Logistic多因素分析结果显示,年龄、PT、AST、γ-GT、PA及Ch E是影响肝硬化患者肝脏组织发生明显炎症反应的主要影响因素。结论年龄大、血清PT、AST及γ-GT水平升高、PA及Ch E水平降低是乙型肝炎肝硬化患者肝脏组织发生显著炎症改变的危险因素。

下调CD44基因表达对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的探讨靶向CD44的短发夹RNA(shRNA)对人胃癌裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制。方法利用CD44 shRNA细胞及对照细胞株建立裸鼠原位移植瘤及皮下种植瘤模型,监测肿瘤生长变化,采用RT-PCR及免疫组织化学方法检测瘤体内CD44表达的变化,并进一步检测上皮-间质转化(EMT)相关因子表达的变化。结果成功构建了CD44 shRNA转染荷瘤皮下及原位裸鼠模型。与对照shRNA组、空白对照组分别比较,CD44 shRNA组荷瘤裸鼠肿瘤生长速度减慢,皮下种植瘤及原位移植瘤质量减轻,差异均有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR结果发现,CD44 shRNA组CD44mRNA表达在皮下种植瘤及原位移植瘤均显著下调,差异均有统计学意义(P均<0.01)。CD44 shRNA组细胞EMT相关基因E-cadherin表达增加,N-cadherin、Vimentin表达降低。结论 CD44 shRNA可以有效抑制人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长,并下调CD44的表达水平,这可能与CD44基因参与EMT相关。

外周血捕获循环肿瘤细胞的有效方法研究

目的建立有效获取肿瘤患者外周血中单个循环肿瘤细胞(CTC)的方法。方法预先将经Di I染色的SW480细胞混入健康成人的抗凝全血中,分别单独采用密度梯度离心(Onco Quick)、淋巴细胞分离术(Ficoll)、"玫瑰花富集"(Rosette Sep)、免疫磁珠(CELLection)及淋巴细胞分离术联合免疫磁珠联用(Ficoll+CELLection)富集这些肿瘤细胞,统计回收率并观察纯度以进行比较。再使用显微操作仪捕获单个NCI-H460、HCT-116、DLD-1、SW480、TF-1等探测细胞及从肝癌患者外周血中富集获得的CTC,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)技术分析单细胞的CD45 m RNA表达水平。结果 5组方法的肿瘤细胞回收率分别为(52.5±3.5)%、(46.6±1.9)%、(36.9±5.5)%、(14.1±3.1)%和(8.8±1.4)%;单因素方差分析表明,5组方法回收率比较差异有统计学意义(P<0.05);SNK-q检验表明,除Onco Quick组和Ficoll组(P>0.05)、CELLection组和Ficoll+CELLection组(P>0.05)外,其他各组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。在荧光显微镜下观察富集的肿瘤细胞,发现CELLection组及Ficoll+CELLection组的纯度更高。q RT-PCR结果显示,总循环数60,GAPDH Ct均值为(29.94±0.59),除了单个TF-1细胞的CD45 Ct均值为(34.21±0.22),其他单个探测细胞及CTC的CD45均无表达。结论 CELLection即免疫磁珠法配合显微操作能有效获取肝癌患者外周血中的单个CTC并保留其原始的分子特性,适用于后续单细胞分析与研究。该方法为CTC运用于剖析肿瘤分子的特征、评价靶向治疗药物的药效以及监控肿瘤的复发与转移等临床问题奠定了基础。

抗病毒治疗对乙型肝炎相关性肝癌术后肝内复发患者生存状况的影响

目的探讨抗病毒治疗对乙型肝炎病毒(HBV)相关肝癌术后肝内复发患者生存状况的影响。方法回顾性分析2012年1月-2013年6月四川省人民医院107例乙型肝炎相关性肝癌术后发生肝内复发患者的临床资料,根据患者复发后抗病毒治疗情况分为抗病毒组(68例)和对照组(39例)。比较两组患者复发后累积生存时间、复发后6个月乙型肝炎-DNA(HBV-DNA)、乙型肝炎病毒e抗原(HBe-Ag)及甲胎蛋白(AFP)水平。采用Kaplan-Meier法统计两组患者的2年生存率,Cox回归模型分析与患者复发后2年生存率相关的因素。结果抗病毒组的中位生存时间为24个月(15.6~26.1个月),对照组的中位生存时间为14个月(11.2~20.3个月),差异均有统计学意义(P<0.05)。抗病毒组1和2年累积生存率分别为79.71%和39.12%,对照组1和2年累积生存率分别为58.41%和15.71%,差异有统计学意义(P<0.05)。经过正规抗病毒治疗6个月后,抗病毒组患者的HBV-DNA拷贝数低于对照组(P<0.05)。Cox多因素分析显示:原发肝癌的组学分化程度、复发肿瘤≥2 cm及抗病毒治疗是影响肝癌患者肝内复发后2年生存率的主要因素。结论对存在抗病毒治疗指征的肝癌术后肝内复发患者采用正规的抗病毒治疗对提高患者的生存率有积极的作用。