miR-454-3p靶向BPTF表达调控肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-454-3p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法采用RT-PCR技术检测miR-454-3p在肺癌组织以及肺癌细胞株中的表达,以表达量最低的肺癌细胞A549为后续分析对象,将miR-454-3p mimic转入A549细胞,RT-PCR验证miR-454-3p的过表达效率;采用CCK-8、迁移、侵袭等实验,观察转染组与对照组肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭情况;生物信息学预测BPTF是miR-454-3p的靶标,构建BPTF 3′UTR荧光素酶载体,通过双荧光素酶报告基因验证miR-454-3p和BPTF的靶向关系;应用Western blot法检测BPTF的表达及迁移、侵袭相关蛋白的变化。结果RT-PCR实验表明miR-454-3p在肺癌组织和细胞中表达下调,且在A549细胞中表达最低(P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-454-3p的肺癌细胞A549增殖能力明显降低,迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。生物信息学软件分析BPTF为miR-454-3p的潜在靶基因,过表达miR-454-3p后BPTF的表达水平明显受到抑制。同时,迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下调,E-cadhern表达明显上调,而E-cadherin的负性调控N-cadherin表达下降。结论miR-454-3p可能通过靶向下调BPTF的表达,抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为肺癌的靶向治疗提供潜在靶标。

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨微小RNA122(miR-122)对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法采用荧光定量PCR(QPCR)检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics(miR-122组)和阴性对照NC(NC组),流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2(miR-122+siRUNX2组),流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0. 34±0. 052、0. 65±0. 061、0. 59±0. 071和0. 69±0. 098,显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1. 17±0. 173,差异具有统计学意义(P<0. 05)。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为(23. 77±0. 83)%,高于NC组的(6. 17±0. 12)%,差异具有统计学意义(P<0. 05);低于miR-122+siRUNX2组的(70. 85±0. 35)%(P<0. 05)。Western blotting检测结果显示,miR-122组RUNX2蛋白表达量为0. 57±0. 048,低于NC组的1. 21±0. 19(P<0. 05)。与NC组比较,miR-122组Bax(3. 47±0. 077)、cleaved caspase-3(4. 38±0. 121)表达均明显上调,而Bcl-2(0. 39±0. 104)明显下调(P<0. 05)。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活,促进神经胶质瘤细胞凋亡。