转化生长因子-β1对口腔癌相关成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究外源性转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle-actin,α-SMA)表达的影响,探讨TGF-β1对CAFs生物学性能的影响。方法以口腔正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)和未经处理的CAFs为对照组,采用蛋白印迹法观察10 ng/mL的TGF-β1溶液在作用12、24 h后对CAFs细胞中α-SMA表达的影响。结果未经处理的NFs组中未见明显α-SMA的表达,蛋白相对表达量为0.005;未经处理的CAFs组中可见明显α-SMA表达,蛋白相对表达量为0.355;10 ng/mL TGF-β1溶液刺激CAFs细胞12 h后,α-SMA表达较未刺激CAFs明显升高,蛋白相对表达量为0.900(P<0.001);10 ng/mL TGF-β1溶液刺激CAFs细胞24 h后,α-SMA表达持续升高,蛋白相对表达量为1.905(P<0.001)。与NFs组和CAFs组相比,10 ng/mL的TGF-β1溶液在作用12 h和24 h时能够明显上调CAFs细胞中α-SMA的表达(P<0.05),且作用24 h时更明显。结论 TGF-β1能够明显上调CAFs中α-SMA的表达,对CAFs的生物学性能具有重要影响。

猪胰岛细胞微囊化后腹腔移植治疗小鼠糖尿病

目的探讨猪胰岛细胞微囊化后腹腔移植治疗小鼠糖尿病的效果。方法采用胶原酶灌注消化法及不连续密度梯度离心法分离并纯化成体猪胰岛，并用海藻酸钠、多聚赖氨酸对猪胰岛进行微囊化。双硫腙（DTZ）染色观察分离胰岛纯度，葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测纯化胰岛和微囊化胰岛体外功能。利用链脲佐菌素（STZ）200mg／kg腹腔内注射，制作BALB／c小鼠1型糖尿病动物模型。成模后动物随机分为3组：猪胰岛微囊组、空微囊组和生理盐水对照组。每只小鼠腹腔内分别移植500个相应胰岛，检测移植前后小鼠的血糖变化。采用单因素方差分析法进行统计分析。结果不连续密度梯度离心纯化后，得到胰岛的纯度为〉90％；碘化丙啶／双醋酸荧光素（PI／FDA）染色后，测定胰岛的活力为〉90％；葡萄糖刺激胰岛素分泌检测，分离纯化的胰岛和微囊化胰岛的刺激指数均〉2．0；将微囊化胰岛移植到STZ诱导的糖尿病小鼠腹腔内，能够使小鼠血糖恢复并维持正常超过60d〈9．3mmol／L）。与空囊移植组和生理盐水对照组比较，血糖为正常水平的控制时间明显延长（F=13．587，P〈0．05）。病理学检查发现，微囊内胰岛形态基本完整，胰岛素染色为阳性。结论微囊化胰岛腹腔移植后，能有效降低小鼠血糖，微囊具有较好的免疫隔离作用。

PET-CT示踪加荧光成像监测胰岛及BMSC移植物的分布与定植

目的利用PET-CT对细胞进行活体示踪,观察移植的胰岛和骨髓间充质干细胞(BMSC)在受鼠体内的分布,间接了解联合移植治疗糖尿病大鼠的疗效。方法链脲佐菌素构建大鼠糖尿病模型,利用胶原酶法分离制备大鼠胰岛,全贴壁法分离培养BMSC,以18F-脱氧葡萄糖(18F-FDG)体外标记。将糖尿病大鼠分组随机法分为四组(每组15只):A为对照组;B为干细胞移植组;C为胰岛移植组;D为联合移植组。均经门静脉移植,PET-CT示踪移植入体内的细胞分布情况。移植后7天,取各组实验鼠肝组织,免疫荧光染色检测移植细胞的定植及分布。应用随机区组方差分析计算标准摄取值(SUV),t检验比较组间差异。结果PET-CT显示,B和D组,BMSC主要均匀分布在右半肝;C和D组,胰岛主要聚集在肝门静脉末端分支;D组,BMSC围绕在胰岛的周围;而对照A组肝脏无明显的显影,PET-CT活体示踪结果与免疫荧光结果一致。结论PET-CT能直观的揭示胰岛与BMSC经门静脉移植后在肝内的分布及相互关系,为临床上胰岛与BMSC联合移植的进一步研究提供了科学依据。