脂肪组织来源干细胞的分离培养及鉴定

目的探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)的分离、培养、分化和鉴定的方法,为进一步的实验研究提供理论依据。方法酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红"O"染色定性。结果原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性。流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均呈阳性;免疫化学染色发现VШ因子、CD31、CD34,CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红"O"染色可见胞浆内有大量红染颗粒。结论自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化。

人脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原支架材料构建脂肪组织的实验研究

目的研究将人脂肪干细胞(ASCs)和支架材料(固态Ⅰ型胶原)复合体植入裸鼠体内构建脂肪组织的情况。方法体外分离培养人脂肪组织来源干细胞。体外构建ASCs和1.0 cm×1.0 cm大小的胶原蛋白支架材料复合体,培养液培养5天后,植入裸鼠体内,并于术后第12周取出标本,进行大体观察和组织病理学分析。结果从复合有细胞的支架材料侧获取了约黄豆大小(约4 mm×4 mm×2 mm)的脂肪样新生组织,空白支架对照侧肉眼未见新生组织块。结论 ASCs在体外培养扩增与诱导分化,体内环境下复合胶原支架材料,能在裸鼠皮下成功构建成熟的脂肪组织块。