华派生物:企业文化建设反哺精细管理

走进花园式的华派生物厂区，浓郁的文化气息扑鼻而来。置身其中，你能轻易感受到这个充满活力的高新技术企业不仅富有思想和精神，更具有激情和魅力，仰慕之情和探究之心油然而生。

应用生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒

为了大规模生产猪传染性胃肠炎病毒抗原,试验采用生物反应器及微载体进行ST细胞的培养,待微载体上的ST细胞长满至单层后接种猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)。共使用生物反应器培养3批TGEV抗原,每批培养过程中分别调节初始细胞密度至2.14×106个/mL、1.83×106个/mL和2.02×106个/mL,微载体浓度为3 g/L、6 g/L和9 g/L。结果表明应用生物反应器及微载体培养得到抗原的病毒含量均达到108.0TCID50/mL,明显高于转瓶培养的病毒含量。

产β-葡萄糖苷酶真菌的筛选鉴定、纯化及酶学性质分析

经刚果红平板染色法从土样中筛选到3株产纤维素酶的真菌,通过对其β-葡萄糖苷酶活力的测定,选择一株相对活力较高的菌株进行菌种鉴定。在形态鉴定的基础上,通过内转录间隔区(ITS)序列构建系统发育树初步鉴定为米曲霉(Aspergillus oryzae),命名为giF-10。对米曲霉giF-10进行摇瓶发酵,经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶层析、DEAE Cellulose 52离子交换层析进行纯化。得到纯化后的β-葡萄糖苷酶,比活力为40.84U/mg,分子质量约90kD;该β-葡萄糖苷酶最适温度为55℃;在30～50℃之间热稳定性好;最适pH值为4.5;pH4.0～6.0稳定性好;金属离子对酶活力具有一定的影响,Mn2+对酶具有较强的激活作用;Fe3+和Cu2+对β-葡萄糖苷酶活力有较强的抑制作用;该酶对水杨素和纤维二糖具有较强的底物特异性;β-葡萄糖苷酶对水杨素的动力学参数:Km为0.676mmol/L;对纤维二糖的动力学参数为:Km为2.906mmol/L。

不同能量和蛋白质水平对川藏黑猪配套系商品猪的影响研究

为研究不同能量和蛋白质水平对川藏黑猪配套系商品猪的影响,选择2013年1月出生、生长发育良好、体重20 kg左右的川藏黑猪仔猪24头为研究对象,随机分为3组,每组2个重复,每个重复4头猪,试验1组饲喂低能低蛋白质饲粮,试验2组饲喂中等能量蛋白质饲粮,试验3组饲喂高能高蛋白质饲粮。试验猪体重达90 kg左右时结束饲养试验,每组8头试验猪全部屠宰,测定胴体和肉质性状。结果表明,料重比,低能低蛋白质组为3.38,分别比中等能量蛋白质组和高能高蛋白质组高0.11(P>0.05)和0.22(P<0.05);日增重,低能低蛋白质组为546.11 g,分别比中等能量蛋白质组和高能高蛋白质组低49.89和51.96 g,差异显著(P<0.05);屠宰率,中等能量蛋白质组为73.78%,分别比低能低蛋白质组和高能高蛋白质组高2.03和2.08个百分点,差异显著(P<0.05);低能低蛋白质组肌纤维直径为89.90μm,最大剪切力为5 677.50 g,均显著高于中等能量蛋白质组和高能高蛋白质组(P<0.05)。

壳聚糖纳米颗粒包裹猪白细胞介素2和融合白细胞介素4/6基因对猪圆环病毒2型疫苗免疫的强化

目的探讨猪Sus scrofa domesticus白细胞介素2(IL-2)和融合白细胞介素4/6(IL-4/6)基因的共表达对仔猪免疫应答的影响,为进一步研制新型免疫调节剂来加强仔猪抵御断奶后多系统衰竭综合征奠定基础。方法将猪IL-2和IL-4/6融合基因的共表达重组质粒,用壳聚糖材料包裹制成纳米颗粒,记作VRIL-4/6-2-CS。将仔猪分为2组,分别肌肉注射VRIL-4/6-2-CS(实验组)和生理盐水(对照组),2组均同时接种猪圆环病毒2型(PCV-2)疫苗,在接种后的第0、7、14、28天采集血样并分析免疫变化。结果实验组仔猪血清中的IgG2a抗体数量和血液中CD4^+、CD8+~T淋巴细胞数量均显著高于对照组(P<0.05);同时,实验组仔猪的IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、TLRs(TLR-2,7)、STATs(STAT-1,2,3)基因表达水平也显著高于对照组(P<0.05)。尽管2组之间PCV-2特异性抗体的含量差异无统计学意义,但是实验组仔猪的生长速率显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL-4/6-2-CS能促进仔猪对PCV-2疫苗的免疫应答,是一种安全有效的免疫佐剂。

藏猪白细胞介素-12基因表达对猪圆环病毒2疫苗的免疫增强效应

为研究IL-12基因在猪体内表达对PCV2疫苗免疫应答的调控作用,本研究将藏猪IL-12基因克隆至VR1020载体,壳聚糖包裹重组质粒制备成壳聚糖纳米颗粒(VRIL-12-CNP)并与PCV2疫苗共同接种21日龄断奶仔猪.接种后第0d、7d、14d和28d采集猪前腔静脉血进行血细胞分析、PCV2抗体检测和相关免疫基因表达量检测,并记录体重.结果显示:接种VRIL-12-CNP和PCV2疫苗的实验组猪的CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞和PCV2抗体显著增长(P<0.05),TLR2/7、IL-12/4/6/15、STAT1/3和Bcl-2基因的表达量显著高于对照组(P<0.05);试验期间实验组体重净增长也明显高于对照组(P<0.05).结果表明:VRIL12-CNP能增强PCV2疫苗的先天性和获得性体液、细胞免疫应答,是安全、有效的PCV2疫苗佐剂.

免疫接种途径及佐剂对猪传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗免疫效果的影响

猪传染性胃肠炎（TGE）和猪流行性腹泻（PED）是两种严重威胁养猪业的病毒性传染病，其病原猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）同属于冠状病毒，形态相似，繁殖的靶器官相同，引起猪呕吐、脱水及水样腹泻，对仔猪具有高度致死率[1-3]。

猪流行性腹泻病毒SZ株的分离与鉴定

从资阳某猪场发生腹泻症状的猪肠道内容物中分离得到一株病毒,经荧光检测、RT-PCR检测及序列分析鉴定后,证实该分离株为猪流行性腹泻病毒,命名为SZ株。PCR方法克隆S基因的部分片段,序列分析结果表明PCR扩增的部分S基因与其他毒株比对,结果表明与CH/XJUrumqi及韩国AF500215 S1的亲缘关系较近。

支原体PCR检测方法的建立及初步应用

经过对Genebank鸡滑液支原体、猪肺炎支原体、口腔支原体和猪鼻支原体16S rRNA序列比对,设计了一条通用引物,建立支原体PCR检测方法。该方法敏感、特异、经济、快速,在动物疫苗生产中检测细胞、半成品及成品支原体污染具有较大的应用价值。

不同容积的培养瓶对猪肺炎支原体培养滴度的影响

本试验将猪肺炎支原体在不同容积的玻璃瓶中进行培养,对各自生长过程中不同时间点的颜色变化单位(CCU)和pH进行测定,分析不同容积的培养瓶对猪肺炎支原体培养滴度的影响。结果显示:与小瓶培养的猪肺炎支原体相比,万瓶的生长速度慢、CCU低、收获菌种的pH范围较广。本试验为猪肺炎支原体大规模培养和疫苗生产提供了参考。

接种猪瘟疫苗后ELISA抗体反应规律

猪瘟是我国强制免疫接种预防的疾病之一，猪瘟疫苗免疫效果监测由最初的中和试验逐步转变为ELISA方法。但目前还没有关于猪瘟疫苗接种后ELISA抗体反应规律的研究，因此本研究以猪瘟细胞苗接种非免猪进行ELISA抗体反应规律的研究，希望能为生产实践中使用ELISA方法监测猪瘟疫苗免疫效果提供参考。

猪肺炎支原体P46基因的克隆及序列分析

根据GenBank中登录的猪肺炎支原体J株P46基因序列设计一对引物,扩增得到P46全基因序列,将克隆得到的P46基因片段克隆至pEasy-T载体中进行测定。将SC株P46基因与232株、J株、7448株及168株进行比对,结果表明SC株与这些株同源性分别为99.9%、99.6%、99.2%、99.0%。

一株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

本试验采集某养鸡场发病鸡的肾脏和肺组织病料,接种鸡胚盲传,发现从F3代开始出现侏儒胚及发育不良的鸡胚,经病毒血凝性测定、干扰NDV试验、RT-PCR鉴定,判定该病毒为鸡传染性支气管炎病毒,命名为HP-W株。对该分离株的S1基因进行扩增、测序,结果表明该毒株的S1基因长度为1 620 bp,与变异株4/91的核苷酸同源性为98.9%,氨基酸同源性为98.1%,与其他毒株核苷酸及氨基酸序列的同源性均低于80%。

新型稀释液用于猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗的免疫效果研究

利用新型稀释液和PBS分别对猪传染性胃肠炎(TGE)-流行性腹泻(PED)二联活疫苗进行稀释,相同剂量免疫仔猪,在不同天数后采集血清测定中和效价。结果显示:两个试验组其TGE和PED中和抗体效价均在21日达到峰值。采用PBS稀释组TGE和PED中和抗体峰值效价分别为1:128和1:112;采用13115稀释液组TGE和PED中和抗体峰值效价分别为1:413和1:304,是PBS组的3倍左右。试验说明猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗在不利用新型稀释液的情况下已能达到较好的免疫效果,而在利用新型稀释液后,效果增强更加明显,而且时间更短。故在应用猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联活疫苗时推荐与新型稀释液搭配使用。

猪肺炎支原体强毒株的分离和鉴定

从15份疑似猪支原体肺炎病料中分离出病原,然后进行培养传代,再做染色镜检、PCR鉴定、序列分析和动物回归实验,最终将分离株接种于健康仔猪,结果仔猪出现典型的猪支原体肺炎临床症状和病理变化,证明该分离株为猪肺炎支原体。

猪肺炎支原体强毒株的分离和鉴定

从15份疑似猪支原体肺炎病料中分离出病原，然后进行培养传代，再做染色镜检、PCR鉴定、序列分析和动物回归实验，最终将分离株接种于健康仔猪，结果仔猪出现典型的猪支原体肺炎临床症状和病理变化，证明该分离株为猪肺炎支原体。

猪圆环病毒病的危害及防控

猪圆环病毒属圆环病毒科圆环病毒属,其无囊膜,为单股环状DNA病毒,是已知动物病毒中的最小病毒。该病毒对外界环境的抵抗力较强,在pH值为3的酸性环境中可长时间存活,其对氯仿不敏感,56℃或70℃处理一段时间不被灭活。病毒不凝集牛、羊、猪、鸡等多种动物和人的红细胞。

猪用疫苗质量把控及免疫效果评价

随着养猪规模化和产业化的发展，我国猪病流行Et趋复杂，临床表现主要为多病原混合感染和继发感染。猪病防控的好坏直接影响猪群的生产成绩和养猪经济效益。猪病防控仍然要坚持预防为主的方针。预防是一种主动的、积极的、节约性手段，而治疗则是一种被动的、消极的、消耗性补救措施，此外，有些疫病也是无法治好的。疫苗接种则是预防和控制猪病最经济、最有效的手段，而疫苗接种的整体效果与疫苗质量密切相关。

猪肺炎支原体SC株P46基因的定点突变

猪肺炎支原体P46基因中有3个密码子TGA用于编码Trp而非终止密码子,为了在原核表达系统中进行猪肺炎支原体P46基因的根表达,根据其序列设计了3对引物,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)的方法将编码密码子TGA同义突变为TGG。将突变后的P46基因克隆至pEasy-T载体中,并进行测序。测序结果表明将P46基因中的TGA密码子突变为TGG很成功。

兔病毒性出血症病毒“LQ”株的分离鉴定

对成都龙泉某兔场疑似兔病毒性出血症(RHD)发病兔的病料进行细菌学检查以及血凝性、特异性鉴定,并进一步进行致病性鉴定。结果表明:RHDV LQ株对人"O"型红细胞具有高度血凝性,血凝效价达10×212;RHDV抗血清可特异性抑制RHDV LQ株对人"O"型红细胞的凝集;RHDV LQ株对家兔的LD50为10-6.87/mL,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。