应用实时荧光PCR快速检测血培养标本中的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌

目的应用实时荧光PCR(RT-PCR)技术进行血培养标本中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的快速检测。方法挑取细菌纯菌落配制成菌悬液,吸取菌悬液分别加入血培养瓶制备梯度细菌浓度的模拟血培养标本,放入血培养仪孵育,分别提取仪器报阳培养液中的细菌DNA。应用RT-PCR技术扩增和检测肺炎克雷伯菌Khe基因和4种碳青霉烯酶基因(KPC、NDM、VIM、IMP)。进行灵敏度试验、特异度试验和重复性试验。结果使用RT-PCR方法检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌18株和非肺炎克雷伯菌30株,试验特异度为100%(48/48),最低检测限为0.5 cfu/mL,3次重复试验结果一致。从18株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分离株中检出7株(38.9%)携带KPC酶基因,9株(50.0%)携带NDM酶基因,1株(5.6%)同时携带KPC酶基因和NDM酶基因。结论应用RT-PCR技术可快速检测血培养标本中的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,为该类细菌相关血流感染的早期诊治提供依据。