长链非编码RNA01139靶向调控微小RNA-300对口腔鳞癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA01139(LINC01139)调控微小RNA-300(miR-300)对口腔鳞癌顺铂(DDP)耐药细胞(CAL-27/DDP)增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CAL-27/DDP及其亲本细胞株CAL-27中LINC01139和miR-300的表达水平。将CAL-27/DDP分为DDP+si-NC组、DDP+si-LINC01139组、DDP+miR-NC组、DDP+miR-300组、DDP+si-LINC01139+anti-miR-NC组、DDP+si-LINC01139+anti-miR-300组。采用噻唑兰(MTT)法检测细胞增殖抑制率;Transwell实验检测迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告实验和qRT-PCR确定LINC01139与miR-300的靶向关系。结果与CAL-27细胞比较,CAL-27/DDP中LINC01139的表达升高,miR-300的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与DDP+si-NC组比较,DDP+si-LINC01139组CAL-27/DDP增殖抑制率升高,迁移和侵袭细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与DDP+miR-NC组比较,DDP+miR-300组CAL-27/DDP增殖抑制率升高,迁移和侵袭细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与DDP+si-LINC01139+anti-miR-NC组比较,DDP+si-LINC01139+anti-miR-300组CAL-27/DDP增殖抑制率降低,迁移和侵袭细胞数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑制LINC01139可通过上调miR-300抑制CAL-27/DDP的增殖、迁移和侵袭。

miR-145-3p靶向HDAC4调控人牙周膜成纤维细胞的自噬机制研究

目的研究miR-145-3p能否调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的自噬及其可能存在的作用机制。方法收集12~18岁因正畸需要减数而拔除的健康前磨牙,采集和培养HPDLFs,并进行鉴定。将miR-145-3p类似物(miR-145-3p-mimics组)、miR-145-3p抑制物(miR-145-3p-inhibitor组)、阴性对照(miR-145-3p normal control,miR-145-3p-NC组)以及带有GFP-LC3的质粒转染至HPDLFs,24 h后荧光显微镜观察荧光发生情况。双荧光素酶报告实验验证miR-145-3p与HDAC4的靶向关系,Western Blot检测各转染组细胞内HDAC4、Beclin-1、P62和LC3的蛋白表达。结果免疫组化结果表明,波形蛋白为阳性染色而角蛋白呈阴性染色,证明其为无混杂细胞的HPDLFs。转染结果显示,miR-145-3p-mimics组的细胞内荧光强度最高,有大量自噬体形成,而miR-145-3p-inhibitor组荧光最弱。双荧光素酶报告实验证实miR-145-3p靶向抑制HPDLFs细胞中HDAC4的表达。4组细胞中miR-145-3p-inhibitor组P62蛋白表达最高(P<0.05),而其他3组差异无统计学意义(P>0.05);miR-145-3p-mimics组细胞内Beclin-1和LC3蛋白表达最高(P<0.05),其他3组差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-145-3p在HPDLFs中可调控自噬,这种作用可能是通过靶向抑制HDAC4表达实现的。