脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)经脂质体LipfectAMINETM(LR)介导转染对MCF-7细胞中c-myc蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价脂质体介导c-myc ASODN对细胞增殖的影响;免疫细胞化学ABC方法检测转染前后c-myc蛋白表达;流式细胞仪(FCM)定量分析细胞凋亡。结果ASODN/LR转染与正义、错义寡核苷酸相比,显著抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01)。FCM分析结果显示,转染后可见明显细胞凋亡峰,72h相点细胞凋亡率达(28.76±2.09)%。免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(21.40±1.16)%。结论LR介导c-myc ASODN能明显抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。

特异性siRNA抑制hTERT基因表达的位置及时间效应

为了探讨不同位点siRNA在不同时间点对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中hTERT mRNA表达的抑制作用,设计并化学合成4对针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的特异性siRNA。以脂质体法转染入MCF-7细胞,在转染后12h、24h、48h、72h和5d,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中hTERT mRNA的表达。与对照组相比,4段siRNA中有3段在转染后12h即对hTERT mRNA的表达产生抑制,48h抑制率最高,72h后下降,其中位于hTERT mRNA二级结构中的结构相对简单区域的siRNA抑制率最高,达到75%,说明特异性siRNA对hTERT基因有明显的抑制效果,且该抑制效应具有位置及时间依赖性。

c-myc反义核酸对乳腺癌MCF-7细胞生长及hTERT基因表达的影响

目的探讨脂质体介导c-myc基因反义寡核苷酸(Antisense phosphorothioate oligodeoxynucle-otide,ASODN)对MCF-7细胞生长及其人体端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因表达的影响。方法将c-myc正、反义寡核苷酸(ODN)分别导入各组MCF-7细胞中,MTT法、逆转录-聚合酶链法及流式细胞术分别检测各组细胞生长情况、hTERTmRNA的表达水平以及细胞凋亡率。结果c-mycASODN转染MCF-7细胞24h后,细胞生长受到抑制(P<0.05),并且hTERTmRNA表达明显降低;随着反义核酸作用时间的延长,凋亡细胞数目逐渐增多,细胞生长及hTERT表达的下降随时间延长逐渐明显。对照组、LR-SODN组、LR-ASODN24h组与LR-ASODN48h、72h组相比有明显统计学差异(P<0.05)。结论c-myc反义寡核苷酸能显著下调细胞中hTERT基因的表达活性,诱导MCF-7细胞凋亡,并抑制MCF-7细胞生长;在一定程度上,其效果与时间呈正相关。

染色体倒位对生殖的影响

目的了解染色体倒位与生育的关系。方法对有不良妊娠史、不孕、不育的患者抽取外周血,进行淋巴细胞培养、制备染色体G显带标本。按人类细胞遗传学国际命名体制进行核型分析。结果在2 395例受检的人中,发现罕见的染色体倒位4例,包括inv(6)、inv(7)、inv(10)、inv(11),各占总数的0.04%;另外有23例inv(9),占总数的0.96%。结论在排除了免疫、内分泌等因素造成的流产后,对于染色体倒位,应注意其与不孕不育、流产的直接关系。