ICP-MS法结合化学计量学分析甘松不同药用部位无机元素的差异

建立电感耦合等离子体质谱法(Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry,ICP-MS)同时测定甘松不同药用部位中25种无机元素.通过ICP-MS对甘松样品中的25个无机元素进行定量分析,并运用主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)和正交偏最小二乘判别分析(Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis,OPLS-DA)方法综合分析评估甘松不同药用部位的无机元素分布特征.结果显示:常量元素K,Ca,Na和Mg在甘松各部位中质量分数均较高,叶中的K,Ca质量分数分别为根及根茎中的1.57和1.19倍.微量元素及其他元素在根及根茎的丰富度高于叶部.OPLS-DA分析表明:Al,K,Fe,Na,Ca为甘松的特征元素,根及根茎中Na,Al,Fe的质量分数分别为叶部的3.15,2.71和2.48倍.青海省久治县索呼日麻乡、黄南州河南县赛尔龙乡、果洛州久治县智青松多镇,四川省阿坝州红原县邛溪镇、麦洼乡、阿木乡、安曲镇、若尔盖县班佑乡以及甘肃省甘南州玛曲县欧拉镇的根及根茎样品中As元素超出现行《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》限度.甘松不同药用部位独特的组成特征可为甘松药材的质量控制及安全性评价提供依据.

彝药菊三七的质量标准及不同产地药材的质量评价

目的 完善并提高彝药菊三七的质量标准,并评价其质量。方法 以不同产地的15批菊三七药材为样品,根据2020年版《中国药典》(四部)方法测定其水分、总灰分、酸不溶性灰分及水溶性浸出物含量,采用紫外分光光度法测定其总生物碱(以千里光碱计)含量,采用高效液相色谱(HPLC)法测定其千里光碱和千里光菲灵碱含量。以上述7个指标为评价指标,通过聚类热图分析法、主成分分析(PCA)法及熵权逼近理想排序(TOPSIS)法对药材质量进行综合评价。结果 15批菊三七的水分含量为8.88%~12.60%,总灰分含量为4.43%~11.02%,酸不溶性灰分含量为0.56%~3.45%,水溶性浸出物含量为21.71%~53.91%,总生物碱(以千里光碱计)含量为0.15%~0.39%,千里光碱、千里光菲灵碱的含量分别为0.01%~0.05%、0.01%~0.06%。根据各指标结果,初步拟定菊三七样品中水分不得过13.00%,总灰分不得过11.50%,酸不溶性灰分不得过3.70%,水溶性浸出物含量不得少于20.70%,总生物碱含量(以千里光碱计)不得少于0.15%,千里光碱、千里光菲灵碱含量均不得少于0.01%。聚类热图分析结果显示,15批样品可分为4类;PCA法和TOPSIS法分析结果显示,品质排名靠前的样品为jsq-2、jsq-5、jsq-6、jsq-10,品质排名靠后的样品为jsq-4、jsq-13、jsq-14。结论 本研究建立了菊三七中总生物碱(以千里光碱计)、千里光碱、千里光菲灵碱的定量分析方法,并初步拟定了各指标的限度;在15批样品中,以产自凉山彝族自治州甘洛县林杂村、凉山彝族自治州普格县螺髻山镇马厂坪村等地的样品质量相对较好。

基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS的羌药中甸灯台报春化学成分分析

为了明确羌药中甸灯台报春的化学成分,本研究采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱联用(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对羌药中甸灯台报春化学成分进行快速鉴别,在电喷雾正、负离子模式下采集数据,根据化合物的精确分子质量和碎片离子信息,结合对照品比对以及文献数据对化合物进行鉴别。从中甸灯台报春中鉴定推断出92个化合物,主要包括39个黄酮类、13个有机酸类、18个脂肪酸类、8个氨基酸类、4个苯丙素类、3个环烯醚萜类和其他类化合物。通过UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS首次对中甸灯台报春化学成分进行了较为系统而全面的分析,为其质量控制及药效物质基础提供科学依据。

彝药材小叶三点金的生药学研究

目的:对小叶三点金药材进行生药学鉴别研究,筛选出具有鉴别意义的特征及质量控制的指标性成分。方法:采用原植物基原鉴定、药材性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱法等鉴别手段;检测水分、总灰分、酸不溶性灰分等检查项;测定浸出物含量,采用HPLC测定荭草苷和异荭草苷的含量。结果:建立了小叶三点金的药材标准,包括原植物、药材性状及显微鉴别特征,水分为6.90%~8.70%,总灰分为9.31%~12.38%,酸不溶性灰分为6.14%~7.83%;采用热浸法70%乙醇作溶剂的浸出物为18.29%~30.41%;建立了荭草苷和异荭草苷的薄层色谱鉴别;HPLC测定荭草苷和异荭草苷的总含量为0.23%。结论:该研究为小叶三点金药材鉴定、质量控制以及资源合理开发利用提供了科学依据。

基于柱前衍生GC-MS法比较不同工艺制备黄精的氨基酸含量

建立了柱前衍生GC-MS法测定黄精中15种氨基酸含量的方法。测定经不同工艺制备的黄精鲜品、干品及炮制品样品中氨基酸的含量,并运用多元数据统计对这3种不同黄精样品中的氨基酸进行综合分析。结果表明:三种黄精制品中的15种氨基酸在33min内有良好的分离效果,在线性范围内线性关系良好(r:0.9983〜0.9999),平均加样回收率为95.66%〜105.55%(n=6)。说明该方法能准确测定黄精中多种氨基酸的含量,且黄精鲜品氨基酸含量明显高于干品及炮制品。聚类及正交偏最小二乘法-判别分析结果表明,黄精鲜品、干品和炮制品可以明显聚为不同三类,说明上述三种黄精制品的氨基酸含量有明显差异性,并筛选出赖氨酸、组氨酸、甘氨酸和络氨酸作为区分黄精鲜品、干品和炮制品的标志物。

基于指纹图谱结合化学模式的坡柳皮质量评价研究

目的:建立坡柳皮HPLC指纹图谱,结合化学模式识别法对其进行质量评价,为坡柳皮药材质量控制及临床应用提供参考。方法:采用HPLC法建立坡柳皮指纹图谱;采用相似度评价、聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等化学模式识别法对坡柳皮进行质量评价,同时测定异杞柳苷、(2R)-helichrysin A、(2S)-helichrysin A的含量。结果:建立的坡柳皮HPLC指纹图谱共标定12个共有峰,指认出4个成分;20批坡柳皮相似度均在0.990以上;聚类分析与主成分分析可将坡柳皮样品聚成2类;正交偏最小二乘判别分析筛选出异杞柳苷、(2R)-helichrysin A、(2S)-helichrysin A 3个质量差异性成分,含量分别为1.13%~3.25%、1.02%~3.23%、1.66%~6.45%。结论:采用指纹图谱结合化学模式识别技术可较全面地评价坡柳皮质量,该研究可为坡柳皮药材质量控制及临床应用提供参考。

基于UPLC-QTOF-MS/MS的卷柏化学成分分析

利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(UPLC-QTOF-MS/MS)对中药卷柏的化学成分进行快速分析及鉴定。采用Agilent Poroshell 120 SB-Aq(2.7μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,进样量为3μL;选择电喷雾离子源分别在正、负离子模式下扫描分析,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片,对所得成分的主要色谱峰进行鉴定。结果显示从卷柏中共鉴定出54个化学成分,主要包括双黄酮及黄酮类15个、炔酚类12个、酚酸类10个、苯丙素类5个、甾体类2个、萜类2个、氨基酸及肽类2个、酯类2个和其他类4个,并首次探讨炔酚类成分的裂解规律。该研究建立的UPLC-QTOF-MS/MS方法可以快速准确且较全面地分析鉴定卷柏中的化学成分,可为其质量控制及药效物质基础研究提供科学依据。

基于网络药理与分子对接技术的乌梅清润茶防治咽喉疾病作用机制研究

采用网络药理学与分子对接技术筛选乌梅清润茶防治咽喉疾病的主要活性成分并研究其作用机制.利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)及文献挖掘的方式筛选乌梅清润茶活性成分及作用靶点,与OMIM和GeneCards数据库筛选咽喉疾病靶基因取交集获取潜在作用靶点.采用Cytoscape(3.7.1)软件建立"化合物-靶点网络"并进行分析,使用String数据库构建蛋白互作网络(PPI)并分析,采用AutoDock Vina进行分子对接筛选关键活性成分,采用DAVID(6.8)数据库进行GO和KEGG富集分析作用机制.筛选得到94种活性成分,潜在靶点339个,结果提示乌梅清润茶防治咽喉疾病主要活性成分包括quercetin、ursolic acid、beta-sitosterol、fortunellin、aloe-emodin, naringenin、luteolin、ellagic acid等,作用于INS、AKT1、IL6、VEGFA、MAPK3、CASP3、EGFR、CXCL8等关键靶基因.GO功能富集分析得到GO条目720个(p<0.05),KEGG通路富集筛选得到131条信号通路(p<0.05),涉及TNF、HIF-1、Toll-like receptor、T cell receptor、NF-κB、FoxO、PI3K-Akt、NOD-like receptor、VEGF等信号通路.分子对接结果显示quercetin、luteolin、ursolic acid、beta-sitosterol、fortunellin、aloe-emodin等关键化合物与靶蛋白有较好的结合力.本研究采用网络药理学与分子对接技术分析了乌梅清润茶防治咽喉疾病的活性成分和作用机制,为后续实验研究提供了参考.

彝药材“欺补景”的鉴别研究

目的:对彝药材“欺补景”(西南委陵菜Potentilla fulgens Wall.ex Hook.)的生药学鉴别特征进行系统观察和比较,筛选出具有鉴别意义的特征。方法:通过原植物鉴定、药材性状鉴定、显微组织和花粉粒电镜鉴定以及利用表儿茶素作为对照品进行薄层色谱鉴定等方法,寻找鉴别特征。结果:原植物叶背密被白色绢毛,根粗壮。横切面组织中存在初生和次生木质部,内含红色分泌物,粉末中可见非腺毛、草酸钙簇晶和方晶以及石细胞等特征。花粉粒长球形或类长球形,具三孔沟,表面具条状纹饰。结论:该研究结果为彝药材“欺补景”今后四川省彝药材质量标准及起草说明的制定、彝医民族传统制剂的开发利用提供了重要的实验依据。

火疗彝方搽剂的质量标准研究

目的:建立火疗彝方搽剂的质量标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)对五加皮、防风、木瓜、桑白皮、接骨木进行鉴别,采用超高效液相色谱法(UPLC)测定升麻素苷的含量。结果:火疗彝方搽剂中五加皮、防风、木瓜、桑白皮、接骨木的薄层色谱斑点清晰,含量测定升麻素苷浓度在0.0011~0.7020 mg/mL范围内线性关系良好,y=12376023x+24720 (R^(2)=0.9999);平均加样回收率为99.93%, RSD=0.07%(n=6)。结论:此方法简便、精确,可作为该制剂的质量控制方法。

甘松化学成分及药理活性研究进展

甘松Nardostachys jatamansi为败酱科甘松属多年生草本植物,广泛分布于喜马拉雅山脉地区,属于高原植物,是藏医特色药材。甘松中主要含有萜类、黄酮类、香豆素类、木脂素类和挥发油类等化学成分,这些成分具有良好的镇静、降压、抗心律失常和抑菌等药理活性。但目前对于甘松的合理有效的开发与利用未形成,而造成了资源的浪费及野生资源的匮乏。对此笔者查阅近十年文献对甘松化学成分、药理活性的研究进展进行综述,以期为甘松进一步研究和合理开发利用提供参考。

羌活抗炎质量标志物的挖掘及资源评价

目的 基于生物合成途径及网络药理学理念,从“化学成分-靶点”角度对羌活具有抗炎作用的质量标志物(qualitymarker,Q-Marker)进行预测,建立基于Q-Marker的羌活药材质量评价方法。方法 首先通过生物合成途径筛选可能的Q-Marker;其次采用中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology,TCMSP)预测和筛选羌活的化学成分及潜在作用靶点,然后在人类基因数据库Genecards及OMIM中检索抗炎相关靶基因,利用Cytoscape软件构建“成分-靶点”网络模型,筛选出羌活抗炎作用的Q-Marker;再次采用分子对接技术对筛选出的化合物与靶点(PTGS2)进行对接;最后采用UHPLC同时测定来自不同基原和不同产地的羌活的Q-Marker以评价其资源品质;结果 紫花前胡苷、香叶木苷、佛手柑内酯、羌活醇、异欧前胡素等化合物是羌活抗炎作用的主要活性物质,可作为Q-Marker的主要选择。分子对接结果证实紫花前胡苷、香叶木苷、佛手柑内酯、羌活醇、异欧前胡素等Q-Marker与PTGS2水解酶的结合能低,构象稳定。建立了基于UHPLC-DAD测定羌活Q-Marker的方法,15批不同基原和产地的样品,紫花前胡苷质量分数为0.05~14.84 mg/g,香叶木苷质量分数0.04~3.88 mg/g,佛手柑内酯质量分数为0.07~0.32 mg/g,羌活醇质量分数为0.10~16.76 mg/g,异欧前胡素质量分数为0.20~7.99 mg/g。结论 基于生物合成途径、网络药理、分子对接和UHPLC预测并分析羌活抗炎Q-Marker的方法科学、可行,为羌活的质量标准提升和资源品质评价提供新思路。

铧头草质量标准研究

目的建立铧头草质量标准。方法采用显微鉴别、TLC对彝药材铧头草进行定性鉴别,HPLC法测定秦皮乙素含量,2020年版《中国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量。结果显微鉴别特征明显,可见薄壁细胞、纤维束、螺纹导管、草酸钙簇晶、淀粉粒等。早开堇菜、心叶堇菜TLC特征斑点分离清晰。水分、总灰分、酸不溶性灰分含量分别不得超过13%、24%、7%,浸出物含量不得低于10%。秦皮乙素在0.05~0.80 mg/mL范围内线性关系良好(R^(2)=0.9995),平均加样回收率为100.17%、RSD为1.07%,早开堇菜中该成分含量不得低于0.10%,而心叶堇菜中不限。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于铧头草的质量控制。

甘松属资源遗传多样性及其ITS二级结构系统发育信息分析

目的基于ITS1和ITS2序列,对来自四川、青海、甘肃和西藏不同地区的甘松属植物甘松Nardostachys chinensis、匙叶甘松N.jatamansi遗传多样性进行研究及分子鉴定。方法通过PCR扩增获得甘松ITS1、ITS2序列,采用MEGA软件进行多重序列比对,用DNA EditSeq软件进行剪切、拼接和统计等分析,运用Kimura two-parameter(K2-P)模型进行遗传距离分析,运用DNASTAR软件进行同源性和差异性分析,利用邻接法(neighbor joining,NJ)构建系统发育树,采用DNAsp V5软件进行遗传多样性分析。结果ITS1序列长度范围为687~689 bp,仅2 bp差异;ITS2序列长度高度保守,均为468 bp。ITS1与ITS2序列G/C含量均达66.00%以上。系统发育分析发现,ITS序列可将甘松属20个样本分为2支,甘松与匙叶甘松各自为一支,但二者亲缘关系很近。遗传多样性分析发现,匙叶甘松综合遗传多样性水平指标大于甘松。结论据形态学及遗传学分析,甘松属应分为甘松与匙叶甘松2种,且遗传多样性较低,种内遗传变异相对稳定。ITS序列可用于甘松属品种的鉴定。研究结果可以为甘松属植物资源分类、评价、保护与可持续利用提供一定的理论基础。

一测多评法同时测定枇杷叶标准汤剂中3种绿原酸

目的建立一测多评法同时测定枇杷叶标准汤剂(枇杷叶)中3种绿原酸的含量。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Agilent 5 HC C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-0.4%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长327 nm。以绿原酸为内标,建立新绿原酸、隐绿原酸的相对校正因子,测定其含量。结果绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸在各自范围内线性关系良好(r>0.999 6),平均加样回收率97.22%~97.66%,RSD 1.16%~1.85%。一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法简便可靠,耐用性好,可用于枇杷叶标准汤剂的质量控制。

基于多元统计分析和多指标评价假东风草和东风草的质量

目的基于多元统计分析和多指标评价假东风草和东风草药材的质量。方法采用2020年版《中国药典》方法测定水分、灰分、浸出物,紫外-可见光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的含量,聚类分析和主成分分析进行数据处理。结果9批假东风草和东风草(大花种,非标品种)水分平均值分别为9.21%、8.00%,总灰分平均值分别为6.50%、8.90%,酸不溶性灰分平均值分别为0.87%、1.21%,浸出物平均值分别为22.21%、13.56%,总黄酮平均质量分数分别为126.16、82.65 mg/g,3,4-二咖啡酰奎宁酸平均质量分数分别为7.80、3.52 mg/g,3,5-二咖啡酰奎宁酸平均质量分数分别为4.18、4.43 mg/g。以水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、总黄酮含量、3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸含量为指标时,不能将假东风草和东风草(大花种,非标品种)明显区分开。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于假东风草和东风草的质量控制。

壮药材“滇桂艾纳香”常混淆的基原植物假东风草和东风草的鉴别研究

为快速、准确鉴别壮药材“滇桂艾纳香”两个常混淆的基原植物假东风草和东风草,采用原植物、性状、显微等传统经验鉴别研究,结合薄层色谱、花粉粒研究方法.结果表明:①假东风草和东风草原植物和性状特征可根据花序的大小、疏密或叶柄有无加以区分.②显微组织结构特征可根据叶主脉上突明显与否,主脉维管束差异进行区分.③粉末特征无明显区别.④花粉粒表面特征:假东风草和东风草的花粉粒为球形或近球形,三孔沟萌发孔;假东风草花粉粒表面上刺状突起比东风草更尖,假东风草花粉粒表面孔穴比东风草分布稀疏且没有不规则孔眼;假东风草花粉粒比东风草小,假东风草瘤状凸起比东风草大.因此,假东风草和东风草的原植物、性状、内部显微组织结构、粉末特征、花粉粒表面特征等区别明显,假东风草和东风草应为菊科艾纳香属下两个不同的种.结果可为常用的壮药材假东风草、东风草和“滇桂艾纳香”药材的鉴别提供参考依据.

雪猪油巴布膏的制备工艺优选及质量评价

为了优选雪猪油的最佳提取工艺及雪猪油巴布膏的最佳基质处方.研究采用多方案筛选雪猪油原料的提取工艺,并在预实验及查阅资料文献的基础上,采用均匀设计法对雪猪油巴布膏基质的处方配比进行优选,以赋形性、初黏力、综合感官得分和膜残留测定结果的综合得分优选雪猪油巴布膏的最佳制备工艺.最终确定雪猪油的最佳提取工艺为将雪猪油置于90℃水浴中提炼2 h;雪猪油巴布膏的最优基质处方为聚丙烯酸钠(PAAS)1.5 g,柠檬酸0.22 g,羧甲基纤维素钠(CMC-Na)0.15 g,甘氨酸铝0.34 g,甘油18 mL,高岭土0.3 g,丙二醇2.5 mL,水12 mL,EDTA-2Na 0.1 g.以最优处方制备的雪猪油巴布膏赋形性、黏着力良好,膏体均匀、易涂布,制备工艺稳定可行.

坚杆火绒草质量标准的研究

目的建立坚杆火绒草质量标准。方法显微法、TLC法进行定性鉴别,2020年版《中国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量,HPLC法测定绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量。结果显微特征明显,可见表皮细胞、气孔、非腺毛、梯纹导管、螺纹导管、木纤维、薄壁细胞、花粉粒等。TLC斑点清晰,分离度好。6批样品水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量分别为0.92%~2.87%、7.28%~11.90%、1.08%~5.28%、20.38%~23.02%,绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸在各自范围内线性关系良好(R^(2)=0.9999),平均加样回收率分别为99.22%、98.96%,RSD分别为1.51%、1.46%。结论该方法合理可行,可用于坚杆火绒草的质量控制。

基于处方挖掘与药效团模型的新型冠状病毒RdRp抑制成分筛选

本研究采用药效团模型对作用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RdRp靶点的常用中药成分进行筛选,寻找潜在活性成分。对临床常用抗新冠肺炎中药处方进行全面挖掘及筛选,分析统计常用药材及使用频数,利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)及文献挖掘的方式筛选“抗新冠候选活性成分”,以已报道的具有RdRp酶抑制活性的化合物作为训练集,建立基于RdRp配体的HipHop药效团模型,将候选成分与药效团进行匹配,采用分子对接技术对匹配到FitValue较高的化合物与SARS-CoV-2病毒RdRp蛋白进行对接并评估其相互作用。共搜集到临床常用中药处方31个,包含药材92种。通过TCMSP及文献挖掘得到药材中1384种候选活性成分。通过测试集验证的最优药效团02具有1个氢键供体及2个氢键受体,与候选成分匹配得到104种潜在RdRp抑制活性成分。选取FitValue较高且结合自由能较低的前30种化合物进行分析,发现liquiritin apioside、iridin、liquiritin、forsythiaside、procyanidin B-5,3′-O-gallate及saikosaponin C等成分具有较高的FitValue,可作为RdRp抑制的潜在活性成分。通过分类分析发现黄酮类结构可能是抑制RdRp的潜在活性基团。本研究通过构建药效团模型对常用抗新冠中药处方中抑制SARS-CoV-2 RdRp潜在活性成分进行了虚拟筛选,希望对抗SARS-CoV-2活性成分筛选提供参考思路。