藏成药“十三味榜嘎散”显微鉴别研究

目的:探讨2020年版《中国药典》一部成方制剂项下十三味榜嘎散标准中显微鉴别项的相关问题,为下一版《中国药典》的修订提出参考。方法:对十三味榜嘎散及组成药材进行显微鉴别研究。结果:部分药材显微特征存在交叉,或与规定不符,或检验困难。结论:建议使用其它显微特征或鉴别方法对十三味榜嘎散的投料药材进行规范。

新伤二号汤HPLC指纹图谱的建立及5个成分含量测定研究

目的 建立新伤二号汤的高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及其5种指标性成分含量测定方法,为新伤二号汤的质量控制提供参考。方法 通过HPLC建立新伤二号汤的指纹图谱,采用HPLC法对新伤二号汤样品多指标成分进行含量测定。结果 建立了新伤二号汤的指纹图谱,测定10批新伤二号汤样品,相似度均大于0.9;在指纹图谱上共标定13个共有峰,指认出5个共有峰(阿魏酸、甘草苷、盐酸小檗碱、肉桂酸及甘草酸铵)。阿魏酸、甘草苷、盐酸小檗碱、肉桂酸及甘草酸铵含量分别为:0.029~0.040 mg/m L、 0.327~0.516 mg/m L、 0.069~0.163mg/m L、0.031~0.069 mg/m L、 0.192~0.545 mg/m L。结论 建立的新伤二号汤HPLC指纹图谱特征性强,结合多指标成分含量测定能较好地控制新伤二号汤质量,方法简便可靠,重复性好,可为其后期制剂开发和质量控制提供参考。

藏药加哇与其近似品种的性状及显微鉴别研究

目的:对比研究藏药加哇及其三种近似种的性状与显微特征。方法:采用体式显微镜、光学显微镜等仪器,运用性状鉴别法及显微鉴别法进行观察和比较。结果:加哇(迷果芹)与三种近似品种性状在形状、根头部、表面及气味上存在明显区别。迷果芹的性状为长纺锤形,根头部有致密的环状横纹,表面有明显的浅黄棕色横长皮孔痕,嚼之有明显的胡萝卜味;横切面显微在木栓层、韧皮部及形成层存在明显区别,迷果芹木栓层较薄,形成层明显,韧皮部裂隙较少且无油室及油管;粉末显微特征中,迷果芹具有油室碎片而无油管,可与宽萼岩风相区别,与其余两种无明显区别。结论:迷果芹及三种近似种在性状及显微上均存在一定差异,通过此研究结果可有效鉴别。

基于本草考证及伪品研究乌梢蛇的主要性状特征

目的:筛选出乌梢蛇的主要鉴别特征,在剥皮留头尾的情况下,也能准确地鉴别,为临床用药的安全性及有效性提供研究基础。方法:查阅本草对乌梢蛇性状的记载,调研药材市场并收集乌梢蛇及其伪品的样品,依据本草的记载并借助体视显微镜对其进行性状鉴别研究。结果:各本草记载乌梢蛇总结为"背有三棱、色黑如漆、脊高、眼不陷且眼有光";通过药材市场调研,发现乌梢蛇伪品有多种,统称为"杂蛇",经鉴定包括有闪鳞蛇、黑眉锦蛇、王锦蛇、赤链蛇、红点锦蛇、灰鼠蛇、滑鼠蛇、中国水蛇、宽吻水蛇;本草所记载的特征不足以鉴别此10类蛇,经研究其主要鉴别特征集中在头部及背腹部。但部分市售乌梢蛇及其伪品已经去皮,背腹部的特征消失,且药典记载乌梢蛇尾下鳞双行的性状特征无法鉴别,但头部特征能显著区分此10类蛇,微性状特征主要在于鼻间鳞、颊鳞及头部部分性状特征上。结论:所建立的头部微性状特征能显著区分此10类蛇,为乌梢蛇的鉴定及临床用药提供了依据。

藏药佐摸兴的本草考证及用药调查

目的厘清藏药佐摸兴的基原、药用部位、临床及市场流通使用情况,为其进一步研究和开发提供参考。方法采用本草文献考证针对佐摸兴基原、药用部位及制剂等进行梳理;对四川、青海、西藏、云南4省区、41个市县、21家藏医院、13个制药厂及药材公司、6位藏医药专家进行了基原及药用情况调查,并结合所收集的药材鉴定结果推导出相应基原使用情况。结果文献考证显示佐摸兴涉及10个基原,药用木质部心材、煎膏、叶、花等。调研结果显示最广泛认可的佐摸兴基原为昌都锦鸡儿Caragana changduensis Y.X.Liou,其次是鬼箭锦鸡儿C.jubata(Pall.)Poir.,主要以昌都锦鸡儿红色心材入药,质量最佳,其他颜色鬼箭锦鸡儿心材使用较少,效果稍差。市场上流通佐摸兴药材以昌都锦鸡儿为主,少数藏医院使用鬼箭锦鸡儿。文献考证和调查总计涉及成方制剂20个,佐摸兴在制剂中常用的功效主要为降压、清血热、化血瘀,并可治疗多血症。结论明确了藏药佐摸兴药材的主要来源为昌都锦鸡儿的红色心材,可为其进一步开发利用提供依据。

LC-MS/MS测定川牛膝中57种农药残留及风险评估

目的:采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)建立川牛膝中57种农药的测定方法,并采用此方法对348批川牛膝样品进行农药筛查。方法:样品经乙腈提取,分散固相萃取QuEChERS净化,采用LC-MS/MS进行测定,多反应监测模式采集数据,基质匹配外标法定量,采用点评估法对检出结果进行风险评估分析。结果:57种农药线性关系良好,r均大于0.996,57种农药的平均加样回收率为62.5%~113.3%,RSD%均小于10%。348批川牛膝中检出20种农药,其中有4种禁用农药(均未超出限量规定)、6种植物生长调节剂、10种常用农药;风险评估结果显示,川牛膝中农药残留风险较低,植物生长调节剂使用较普遍。结论:该方法简便、灵敏、准确,适用于川牛膝中多农药残留的快速筛查与检测,可为川牛膝的农药风险评估和规范化种植提供数据参考。

基于HPLC指纹图谱及化学模式识别对比研究曲花紫堇及同属药材

目的建立曲花紫堇Corydalis curviflora的HPLC指纹图谱,并通过所建立的指纹图谱方法对紫堇属其他14种药材进行对比研究。方法HPLC-DAD指纹图谱条件:Agilent ZORBAX Extend C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长289 nm;柱温30℃。结合聚类分析(combine cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least square discriminant analysis,OPLS-DA)区分与其极易混淆的暗绿紫堇。结果首次建立了曲花紫堇HPLC指纹图谱,相似度为0.853~0.996,标定18个共有峰,通过对照品比对指认出新绿原酸、绿原酸、原阿片碱、紫堇灵、乙酰紫堇灵、芦丁、紫云英苷、烟花苷、槲皮素、山柰酚10个共有峰;14种同属药材与曲花紫堇对照指纹图谱相似度在0.078~0.686。通过化学模式识别可区分曲花紫堇和暗绿紫堇,二者有6个差异性标志物。结论建立的指纹图谱方法合理、准确,结合化学计量学方法,能有效地鉴别曲花紫堇及同属药材,寻找不同紫堇质量差异成分,为紫堇属不同药材的质量控制和品质评价提供科学依据和参考。

不同基原洪连中7种环烯醚萜苷类成分的对比分析

目的建立测定洪连类药材环烯醚萜苷类成分(梓醇、桃叶珊瑚苷、栀子新苷、京尼平苷酸、玉叶金花苷酸、8-表马钱子苷酸、乔木状车前苷酸)的HPLC-DAD含量测定方法,比较不同基原洪连的含量差异,为其质量控制研究提供依据。方法采用Waters Atlantis T3 C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长:205 nm(0~42 min)、236 nm(42~80 min);柱温:30℃;进样量:10μL。根据测定结果,使用含量范围、平均值、总量及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)进行比较研究。结果7种基原77批次洪连样品各环烯醚萜苷类成分色谱峰分离度及线性关系均良好。通过比较含量范围、平均值及总量的结果可知,不同基原所含的单体成分既有共性也有差异,而总含量无明显差异;云南兔耳草所含各单体成分均最高。OPLS-DA结果显示,云南兔耳草为一类,短穗兔耳草与全缘兔耳草聚为一类,圆穗兔耳草、短筒兔耳草与紫叶兔耳草聚为一类。结论建立的环烯醚萜苷类分析方法可针对不同基原洪连进行定量分析,为洪连的质量控制及资源开发提供了依据。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定麦冬种植土壤中25种植物生长调节剂

建立了超高效液相色谱-串联质谱快速测定麦冬种植土壤中25种生长调节剂的方法。样品经粉碎后,加乙腈提取,离心后过滤,采用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪,在多反应监测(MRM)模式下,采用基质标准曲线外标法定量分析。多效唑等25种生长调节剂在相应浓度下线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.995,方法定量限为2.0~10.0μg/kg。分别在10、20、100μg/kg 3个浓度水平下进行回收试验,回收率为61.4%~116.3%,相对标准偏差(RSD,n=6)均小于10%。本方法具有简单、快速、准确、灵敏等优点,适用于根茎类药材种植土壤中25种生长调节剂的检测。

基于质量源于设计理念的制川乌UHPLC分析方法研究

目的 基于质量源于设计理念(quality by design,QbD)建立制川乌的超高效液相色谱(ultra high performance liquid chromatography,UHPLC)分析方法。方法 以制川乌中6个主要成分的定量分析为目标,选取柱温、醋酸铵溶液浓度、流速、pH值、初始乙腈浓度为考察因素进行Plackett-Burman试验设计,根据试验结果确定关键方法参数进行Box-Behnken实验,建立设计空间并选择置信度为95%的置信区间估计法考察设计空间的可靠性,最后选择准确性轮廓方法(accuracy profile,AP)进行方法学验证。以分离度为目标所建最佳模型为二次项式模型,以分析时间为目标所建最佳模型为线性模型。基于以上两个模型建立分析方法的设计空间,并采用置信区间估计对方法的可靠性进行评价。结果 结果显示,从设计空间内选择的30 mmol·L^(-1)的醋酸铵浓度(pH=10)和体积分数28%的初始乙腈比例,在10 min内可完成制川乌中6生物碱的完全分离,该分析方法的准确性、中间精密度、重复性、真实性都在可接受的范围内。结论 优化后的方法可以用于制川乌的UHPLC分析,QbD理念为开发并优化制川乌中6个生物碱的UHPLC分析方法提供了新的思路。

3种形态全缘兔耳草不同药用部位中6种成分测定

目的测定3种形态全缘兔耳草Lagotis integra W.W.Smith全草、地上部位、地下部位中6种成分的含量。方法采用HPLC法,大车前苷、鞭打绣球苷B、10-O-反式-对甲氧基肉桂酰基-梓醇及10-O-[(E)-3,4-二甲氧基肉桂酰基]-梓醇的含量测定采用沃特世X-bridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.4%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长325 nm,梓醇、桃叶珊瑚苷的含量测定采用沃特世Atlantis T3 C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%磷酸(2∶98);体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长210 nm。结果6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9998),平均加样回收率95.5%~101.9%,RSD 0.82%~1.94%。不同形态、药用部位中各成分含量及总量存在差异。结论该方法稳定可靠,可有效控制全缘兔耳草质量,并为该资源开发利用提供依据。

基于ITS2序列的竹叶花椒及其近缘种药材鉴别

目的:通过分析竹叶花椒及其近缘种药材的核糖体DNA内转录间隔区2(ITS2)条形码序列,探讨DNA条形码技术鉴别竹叶花椒及其近缘种药材的可行性。方法:对样品进行DNA提取、扩增、测序,并从GenBank数据库下载ITS2序列,共获得竹叶花椒及其近缘种药材ITS2序列43条,基于Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)法、临接法(NJ)、Kimura 2-parameter(K2P)遗传距离和ITS2序列二级结构进行鉴定分析。结果:BLAST结果与性状鉴定结果一致;竹叶花椒种内平均K2P遗传距离小于其与花椒、青花椒、野花椒的种间平均K2P遗传距离;NJ系统聚类树和ITS2二级结构可直观地区分竹叶花椒及其近缘种。结论:应用ITS2条形码可以有效地鉴别竹叶花椒及其近缘种药材。

附子不同炮制品中6个乌头碱成分含量测定方法的建立及临床用药分析

目的:建立附子炮制品中6个乌头碱成分的含量测定方法并进行临床用药分析。方法:采用高效液相色谱法测定附子炮制品中单酯型和双酯型乌头碱含量。色谱柱为岛津Shim-pack GIST C_(18 )(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰乙酸溶液(用三乙胺调节pH值至6.2)(梯度洗脱),流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为235 nm,柱温为30℃。结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的进样量线性范围分别为0.034 4~8.602 4μg(r=0.999 9)、0.003 4~0.848 9μg(r=0.999 9)、0.003 1~0.786 9μg(r=1.000 0)、0.018 9~4.726 5μg(r=1.000 0)、0.019 0~4.741 4μg(r=1.000 0)、0.017 9~4.473 0μg(r=1.000 0);平均加样回收率分别为101.5%(RSD=1.23%)、96.17%(RSD=1.58%)、98.90%(RSD=1.96%)、103.1%(RSD=1.85%)、91.16%(RSD=1.47%)、95.43%(RSD=0.31%)(n=9);精密度、重复性、耐用性试验的RSD均小于2.0%。60批样品测定结果显示,有效性:白附片、黑顺片>炮附片>淡附片;安全性:炮附片>白附片>淡附片>黑顺片;综合评价:白附片>炮附片>黑顺片>淡附片。结论:所建方法可靠、准确,可同时测定附子炮制品中6个乌头碱成分的含量,并发现4种附片中白附片有效性和安全性都较好,炮附片有效性稍弱、但安全性好,黑顺片需关注其安全性,淡附片需注意其有效性,该研究为临床用药提供了参考。

基于UHPLC-LTQ-orbitrap-MS方法分析藏药洪连(短管兔耳草)中黄酮与苯乙醇苷类成分

采用超高效液相色谱-串联线性离子阱-轨道阱组合高分辨质谱(UHPLC-LTQ-orbitrap-MS)技术对藏药洪连(中国药典收载基原短管兔耳草)中黄酮类和苯乙醇苷类成分进行定性分析。采用与动态排除相结合的数据依赖性扫描,在电喷雾离子源正、负离子模式下分别分析黄酮类和苯乙醇苷类成分的精确分子量、碎片离子及保留时间等信息,并结合相关文献系统全面地鉴别藏药洪连中这两类成分。最终共鉴定了167个化合物,其中黄酮类成分84个,苯乙醇苷类成分83个,极大地丰富了洪连及兔耳草属植物中黄酮和苯乙醇苷类成分的数量和种类,特别是首次从兔耳草属植物中发现了黄酮化合物宝藿苷I、脱氧己糖与葡萄糖醛酸组合的二糖氧苷黄酮4个、碳苷黄酮9个、四糖苯乙醇苷15个以及β位有取代基的苯乙醇苷5个,为阐明洪连物质基础并整体提升其质量控制水平以及进一步规范相关基原品种的临床应用提供数据基础和科学依据。