转铁蛋白对FSH诱导卵泡颗粒细胞分化的抑制作用及其机理

转铁蛋白为一类金属结合一转运糖蛋白，经典的理论阐明其在体内的主要作用是运送铁离子到各器官与组织。根据近两年的研究，转铁蛋白除了转运铁离子的作用外，还具有局部调节卵巢功能的作用，即能抑制ＦＳＨ诱导大鼠及人卵泡颗粒细胞的功能性分化。转铁蛋白抑制ＦＳＨ诱导卵泡颗粒细胞分化的主要机理是：（１）转铁蛋白部分地抑制ＦＳＨ与卵泡颗细胞上的受体结合，减少细胞内ＣＡＭＰ生成，进而抑制了ＦＳＨ受体的维持表达。（２）转铁蛋白对抑制素及雌二醇生成的影响还存在着ｃＡＭＰ以后（或以外）的作用部位。（３）转铁蛋白的作用机理不涉及影响蛋白激酶Ｃ系统的活性及钙离子释放过程，且与颗粒细胞的“增殖一分化相逆机理”无关。

转铁蛋白抑制大鼠卵泡颗粒细胞FSH受体的结合与维持

转铁蛋白能抑制大鼠卵泡颗粒细胞的分化,但其机理尚不清楚。本实验用已烯雌酚处理后分离的大鼠颗粒细胞,观察了转铁蛋白对FSH结合到颗粒细胞,以及在培养过程中对颗粒细胞FSH受体量维持的影响。结果表明,生理浓度范围的转铁蛋白部分地阻断了^(125)I-rFSH结合到颗粒细胞上;将转铁蛋白与FSH一起处理细胞,发现它能剂量依赖性地抑制FSH对颗粒细胞FSH受体的维持作用,并表现为孕酮及雌二醇的分泌减少。

β-内啡肽对体外灌流大鼠垂体前叶细胞LH分泌的抑制作用

本实验应用分散大鼠垂体前叶细胞体外灌流培养方法,观察了β-内啡肽及其拮抗剂——纳洛酮对垂体细胞 LH 分泌的影响。结果表明:(1)β-内啡肽抑制了 LHRH(GnRH)-诱发的 LH 分泌,使LH 分泌峰值降低,净释放量/脉冲减少。(2)纳洛酮不仅能阻断β-内啡肽的抑制作用,还可直接增加GnRH-诱发的 LH 分泌,使 LH 峰值升高,净释放量/脉冲增加。(3)β-内啡肽及纳洛酮对 LH 的基础分泌无显著影响。本实验通过从预培养到灌流期间均用含β-内啡肽的培养液以延长作用时间,与灌流时才用β-内啡肽处理的细胞相对比,作用无明显的时间依赖关系。本研究结果为β-内啡肽在垂体水平的直接作用提供了更多的证据。

介绍一种LHRH调节LH分泌的离体模型——分散垂体细胞灌流技术

成年雄性 SD 大鼠断头后分离出垂体前叶(anterior pituitary,AP)。用胰蛋白酶消化和机械分散制备 AP 细胞(成活率大于95%)。分散的细胞悬液与生物凝胶混合后装上灌流柱,然后用 M199溶液连续灌流24h 以上。每间隔1~h 给予一次6min 的 LHRH 脉冲式刺激。细胞在此灌流过程中有一个稳定的基础 LH 分泌水平。LHRH 刺激能迅速引起 LH 分泌。对同一剂量 LHRH 的多次刺激可产生相同的 LH 脉冲。在一定的 LHRH 浓度范围内(1×10^(-10)_1×10^(-7)mol/L),LH 分泌与 LHRH 的剂量-效应曲线呈线性。实验结果表明,连续灌流分散的 AP 细胞的技术,优于单层细胞培养和组织块灌流等其他方法,是一种较为理想的研究LHRH 调节 LH 分泌机理的体外模型。