c-MYC调节的miRNA-92b在结直肠癌发生发展中的功能及机制探究（英文）

micro RNAs(miRNAs)在参与癌症发生、发展过程中起着十分重要的作用.目前,miR-92b在结直肠癌中的作用及相关机制还未见报道.本研究探讨了miR-92b在结直肠癌发生发展中的功能及潜在机制.采用RT-qPCR方法发现,miR-92b在人结直肠癌临床样本中与癌旁组织相比显著高表达.通过结肠癌细胞株SW620稳转细胞及裸鼠皮下成瘤模型,发现过表达miR-92b可以显著促进细胞增殖及体内肿瘤生长.同时还发现miR-92b可以分泌形式存在于胞外及外周血中,提示miR-92b是一个具有分泌特性的micro RNA.在分子机理方面,c-MYC可通过调节miR-92b的启动子活性从而促进后者转录,并且c-MYC在结直肠癌组织样本中也存在高表达.进一步,通过在线预测、报告质粒活性检测及蛋白质印迹技术证实FBXW7是一个新的miR-92b靶基因.由于FBXW7已报道为c-MYC泛素降解过程中的关键泛素化连接酶之一,本研究结果提示结直肠癌中c-MYC、miR-92b及FBXW7三者间可能存在分子调节环路.综上所述,本研究为miR-92b在结直肠癌中的功能及机制提供了新的视角,并为miR-92b在结直肠癌早期诊断中的应用提供了新的参考.

C19orf18蛋白的表达与纯化及多克隆抗体制备

旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目的蛋白,筛选出表达量较高的载体,再用筛选得到的表达量较高的载体大量表达目的蛋白,通过镍柱纯化得到较纯的C19orf18蛋白。用得到的蛋白免疫新西兰白兔,得到的抗血清先经过Protein A纯化,再进行抗原亲和纯化得到C19orf18蛋白多克隆抗体。结果显示,载体p ET28a-C19orf18蛋白表达量高于p ET32a-C19orf18,经过镍柱纯化后得到了较高浓度与纯度的目的蛋白,利用得到的目的蛋白作为抗原成功制备了其特异性的多克隆抗体。在原核细胞中成功表达了C19orf18重组蛋白,并得到了其特异性多克隆抗体,所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、蛋白免疫印迹实验。

重组高效复合干扰素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的作用

目的研究重组高效复合干扰素（rSIFN-co）对肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响。方法筛选rSIFN-co对A549细胞的有效浓度,及与顺铂联合用药的最佳浓度和作用时间。分为rSIFN-co（5μg/mL）组、传统重组集成干扰素α（干复津,5μg/mL）组、rSIFN-co（5μg/mL）＋顺铂（2μg/mL）组、干复津（5μg/mL）＋顺铂（2μg/mL）组、顺铂（2μg/mL）组和RPMI-1640液空白组,分别干预A549细胞。MTT法检测各组7d活细胞数并作生存曲线,流式细胞仪检测48h各组细胞凋亡率,免疫荧光法检测48h各组凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2表达。结果 rSIFN-co的有效浓度为1-64μg/mL,顺铂的最低有效浓度为2μg/mL,与2μg/mL顺铂联合用药时rSIFN-co的最佳浓度为5μg/mL,最佳作用时间为48h。生存曲线示rSIFN-co对A549的抑制作用强于干复津,rSIFN-co＋顺铂的抑制作用强于干复津＋顺铂。rSIFN-co可诱导A549细胞凋亡,rSIFN-co组凋亡率高于干复津组（P=0.000）,rSIFN-co＋顺铂组凋亡率高于rSIFN-co组（P=0.004）及顺铂组（P=0.023）。rSIFN-co能增强A549中Fas的表达,并抑制Bcl-2的表达,其中rSIFN-co组Bcl-2表达低于干复津组（P〈0.05）。结论 rSIFN-co能抑制A549增殖,且作用强于干复津,与顺铂联合应用的抑制作用增强,其对A549的抑制作用与调节凋亡相关基因表达有关。

RecQDNA解旋酶结构与功能及其相互关系的研究

RecQ解旋酶是DNA解旋酶中的一个家族,从细菌到人类均具有高度保守性.人类RecQ解旋酶有:RecQ1、BLM、WRN、RecQ4和RecQ5五种.RecQ解旋酶的缺陷易患相关遗传病和各种癌症.RecQ解旋酶作为一种分子发动机,将ATP水解产生的化学能量转化成机械能,以"蠕动"和"滚动"两种模式沿DNA分子运动,解开双链DNA,通过复制、转录和翻译指导蛋白质合成.RecQ解旋酶在DNA复制、修复、重组、转录、端粒维持等细胞代谢过程中具有非常重要的作用.项目总体思路是弄清RecQ解旋酶结构与功能及其相互关系,为靶标新药的设计治疗提供科学理论基础.研究内容包括:①解旋酶活性检测新方法的建立;②大肠杆菌RecQ解旋酶结构与功能关系研究;③人BLM解旋酶重要结构域及其功能研究;④RecQDNA解旋酶动力学研究.