一种超高灵敏的埃博拉病毒胶体碳侧流免疫层析检测方法的建立

埃博拉出血热(Ebola hemorrhagic fever, EHF)由于其高感染性和高致死率特点,快速鉴别诊断并实施隔离是最有效的防止疫情扩散的措施。文中建立了一种可以快速、高灵敏筛查埃博拉病毒(Ebolavirus,EBOV)感染的现场检测技术,用碳纳米颗粒标记抗EBOV基质蛋白VP40兔多克隆抗体,组装成一种可在15min内检测埃博拉病毒的胶体碳侧流免疫层析试纸条。将标记胶体碳颗粒的兔多抗喷涂于玻璃纤维素膜上制备碳标垫;以1mg/mL的抗VP40单克隆抗体(McAb,4B7F9)和羊抗兔IgG,按照2μL/cm的包被量印迹于硝酸纤维膜上,分别作为检测线与质控线,组装试纸条。该试纸条能够特异地检测EBOV重组VP40蛋白、EBOV病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP)和灭活EBOV,而与马尔堡病毒样颗粒(MARV-VLP)、流感病毒A/PR/8 (IAV/PR/8)、黄热病毒(YFV-17D)、登革热病毒2型(DEN2)无交叉反应,显示良好的特异性,对1 500份阴性血清进行检测,假阳性率为1.3‰,仅为WHO授权ReEBOV^(TM)胶体金试纸的1/100;该胶体碳试纸条检测灭活EBOV的最低检出限为100 ng/mL (相当于10~6 copies/mL),远优于ReEBOV^(TM)胶体金试纸条检出限(10μg/mL,相当于10~8 copies/mL)。热稳定性评价显示试纸条可在室温稳定保存1年以上。文中建立的EBOV胶体碳免疫层析试纸条能够快速、超高灵敏、特异地检测EBOV,为现场快速筛查EBOV感染提供一种新方法。