小RNA分子与精子发生调控

近来研究发现小RNA(small RNAs)可作为转录后及翻译水平上基因表达调节的重要调节因子,利用小RNA来阐明调节精子发生的分子机制取得了显著进展。这些小RNA主要分为3类,即小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)以及与piwi蛋白相互作用的RNA(piRNA)。在减数分裂和精子发生过程中,小RNA具有多种生物学功能,如利用siRNA体外转染或体内注射来敲低特定基因从而研究该基因在精子发生过程中的作用;miRNA可能参与精子发生中有丝、减数及后减数分裂阶段的基因表达调节;piRNA主要参与调节雄性生殖细胞减数及后减数分裂的过程,在精子发生中起抑制反转录转座子(retrotransposons)的作用。文章对小RNAs合成、作用机制、功能及展望等最新进展进行了综述。

米非司酮抑制人子宫内膜基质细胞增殖

目的在改良子宫内膜细胞原代分离培养方法的基础之上,探讨米非司酮对原代分离培养的人子宫内膜基质细胞增殖的抑制作用。方法利用改良后的"二次消化法"分离培养增殖期人子宫内膜基质和上皮细胞,进行细胞形态学观察,并通过流式细胞术检测人子宫内膜基质和上皮细胞的波形蛋白和角蛋白表达阳性的细胞比率,计算分离培养的基质和上皮细胞的纯度;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测米非司酮对原代分离培养人子宫内膜基质细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果原代分离培养的基质细胞较上皮细胞生长迅速。流式细胞检测结果显示,分离培养的基质细胞波形蛋白阳性率达97%,上皮细胞角蛋白阳性率达90%。米非司酮处理人子宫内膜基质细胞2d或3d后,结果均显示,随着米非司酮浓度增加,基质细胞的细胞抑制率(IR)逐渐升高。米非司酮作用基质细胞2d后,50和100μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);米非司酮作用3d后,25、50和100μmol/L组的IR值均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。通过对IR值进行直线回归分析,结果表明:米非司酮处理2d和3d对原代人子宫内膜基质细胞的IC50分别为52.85μmol/L和86.46μmol/L。结论改良后的"二次消化法"可获得高纯度人子宫内膜基质细胞和上皮细胞。米非司酮对原代人子宫内膜基质细胞有抑制作用,并呈时间和剂量依赖效应。

一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的方法

目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体(AFP-McAb)杂交瘤细胞系的方法。方法以常规和改良两种方式同时免疫8～12周Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合并行次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。用间接酶链免疫吸附试验法(ELISA)筛选阳性克隆株,并建立细胞系。结果在较短时间内,改良法能获得高效价的免疫抗体,与常规免疫法相比有极显著差异(P<0.01),同时改良法的细胞融合率和抗体阳性率也显著高于常规免疫法(P<0.001)。筛选获得的高效分泌抗人AFP-McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定。结论新的改良疗法优化了常规的McAb制备中动物免疫程序,并能成功筛选出AFP-McAb杂交瘤细胞系。

大鼠睾丸特异表达基因Ube1的分离鉴定及生物学特征(英文)

本研究采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和cDNA快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从大鼠A型精原细胞和粗线期精母细胞中成功克隆出大鼠泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme)基因Ube1(GenBank登录号EF690356)。该基因序列全长3433bp,其中开放阅读框有3171bp,编码一个含1057个氨基酸的蛋白质。Blast比对显示,Ube1与小鼠泛素激活酶基因Ube1y1的同源性为93%,与人泛素激活酶基因UBE1的同源性为82%。Ube1基因编码的蛋白质含泛素激活酶信号位点和泛素激活酶活化位点,这些位点也存在于人类和小鼠的泛素激活酶1中。RT-PCR分析显示,Ub e1在睾丸中大量表达,而在心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脑、卵巢中没有表达。荧光定量PCR分析不同生精细胞中Ube1的表达,显示Ube1在A型精原细胞中大量表达,在粗线期精母细胞、圆形精子细胞和支持细胞中微弱表达。以上结果提示,Ube1是大鼠睾丸特异表达基因,可能通过参与泛素/蛋白酶体途径来影响精子发生。

两种单剂量米非司酮用于常规避孕的随机双盲比较性研究

米非司酮对正常妇女的垂体、卵巢、子宫内膜功能均有影响，在卵泡期抑制卵泡发育和排卵，在黄体期可以延迟子宫内膜的发育，干扰孕卵着床，溶解黄体，诱发月经来潮^[1]。鉴于米非司酮可以作用于月经周期的不同时相，而且其半衰期较长，以及妇女的接受性，每周1次口服米非司酮可能是一种有前途的避孕方案。已有一些研究观察每周1次口服5mg或10mg米非司酮的避孕效果，但均因避孕失败率较高而未能推广使用^[2-4]。实验室研究结果显示，虽然每周1次口服25mg或50mg米非司酮对排卵的抑制作用并不一致，但子宫内膜的发育和功能均受到影响^[5-6]。因此，本研究设计每周1次口服米非司酮25mg或50mg，通过随机双盲研究，观察临床避孕效果及其对月经的影响，从而探讨米非司酮用于常规避孕的可行性。