miR-128真核表达载体的构建及功能的初步研究

目的构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响。方法以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(hsamiR128-1)和人miR-128-2(hsa-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达。将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响。结果p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128。MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降。结论成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖。

人先天性神经管畸形胎盘印迹基因甲基化状态的研究

目的:研究不同孕周神经管畸形(NTD)胎儿孕妇胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2基因启动子区的甲基化状态,分析其与NTD的关系。方法:应用MethyLight方法实时定量检测不同孕周28例NTD患儿孕母胎盘和28例正常对照乳母胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区的甲基化状态。结果:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在胎盘中普遍发生甲基化,而且在NTD患儿孕母胎盘中,H19,PEG10和IGF2中甲基化率略高于正常乳母胎盘组,但无统计学差异。将样品按照不同孕周分组后,IGF2基因启动子区甲基化水平在31～36周NTD胎儿乳母胎盘中显著高于正常胎儿乳母胎盘(P<0.05)。结论:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在所检测的NTD患儿孕妇的胎盘中总体甲基化水平与正常胎儿乳母胎盘无差异。但在妊娠31～36周时,NTD胎儿乳母胎盘中IGF2启动子甲基化水平显著高于正常胎儿乳母胎盘,提示印迹基因IGF2的甲基化状态可能与NTD的发生有关。

邻苯二甲酸单丁酯暴露对小鼠植入后胚胎发育的影响

目的研究植入前暴露邻苯二甲酸单丁酯(DBP)对孕早期胚胎植人和发育的影响。方法在孕1.5 d、2.5d、3.5d给孕鼠灌胃300 mg·kg^(-1)·d^(-1)的DBP,然后于7.5 d、8.5 d、9.5 d统计子宫植入点数、活胎数量、吸收胎数量和胚胎长度,并使用全胚免疫荧光染色的方法检测nestin蛋白的表达。结果 DBP暴露显著降低了胚胎长度(P<0.05);降低了妊娠率(P<0.05);也降低了植入点数和胚胎数,但差异不显著;但显著提高胚胎吸收率(P<0.05)。利用神经干细胞特征性标志物nestin检测DBP对神经系统发育的影响发现,DBP处理组胚胎头部荧光强度明显低于对照组。结论孕早期DBP暴露降低了胚胎妊娠率,延缓了胚胎的发育,并降低了头部神经细胞的分化能力。

亲子鉴定中二联体鉴定结果判定标准的探讨

目的探讨二联体亲子鉴定判定标准及结论描述并报道假定父亲与真实生物学父亲为同胞兄弟亲子鉴定1例。方法检测15个短串联重复序列基因座,包括13个CODIS基因座以及PentaE、PentaD。统计经三联体认定的二联体组合310例,分别采用上海司法部法庭司法科学技术研究所推荐的基因座频率、北京汉族基因频率和本实验室基因频率计算认定二联体的联合父权指数;统计69例排除案例的二联体组合不符合的基因座个数。结果 310例认定的二联体组合采用不同的基因座频率计算具有不同的联合父权指数,310例认定的二联体父权指数变化范围在101~1011之间,69例排除二联体组合不符合基因座的个数在2~13个之间。结论应用15个基因座进行亲子鉴定时,建议将二联体亲子鉴定结论的描述统一规范为排除或不排除,即检测发现三个或三个以上不符合基因座时,可以排除亲子关系;当15个短串联重复序列基因座都符合,且父权指数大于4000,不可以排除亲子关系;似然比小于4000时,建议补充另一方的样本或增加检测的基因座的个数。

亲子鉴定中的伦理学问题

亲子鉴定是指应用医学、生物学和遗传学的理论和技术,判断有争议的父母与子女之间是否有亲生血缘关系。亲子鉴定技术对现代社会有着积极意义,但亲子鉴定结果影响着双方当事人情感利益、经济利益,涉及许多问题,如鉴定的科学公正、知情同意、隐私的保密和保护、胎儿的生命权等。在亲子鉴定实践中应当遵循自主与尊重的准则、行善与不伤害的准则和客观公正的准则。

染色体相互易位导致复发性流产一例

患者38岁，女，12岁初潮，27岁第一次妊娠，孕57d流产，之后义相继妊娠4次，均在孕6～8周流产。

亚砷酸钠致早期鸡胚胚胎发育毒性与基因甲基化的关系

目的:研究亚砷酸钠致鸡胚胚胎毒性与基因组DNA整体甲基化的关系以及补充甲基供体胆碱对无机砷致胚胎毒性的影响。方法:以鸡胚为模式动物检测亚砷酸钠及其与胆碱联合处理对鸡胚生存能力、体重及形态的影响;采用whole-mount免疫荧光技术检测鸡胚基因组DNA整体甲基化水平;应用荧光定量PCR技术,研究受甲基化调节的bcl2、c-myc、cdkn2a,calb2基因在不同处理组鸡胚中的表达模式。结果:砷处理组鸡胚存活率下降(P<0.01),体重降低(P<0.01),并诱导鸡胚发育畸形,基因组DNA整体甲基化水平降低(P<0.01),受甲基化调节的基因bcl2(P<0.05)、c-myc(P<0.01)表达下调;补充甲基供体胆碱,未明显恢复鸡胚的生存力和改变鸡胚发育异常,对鸡胚基因组DNA整体甲基化水平亦无明显影响,但c-myc(P<0.01)、cdkn2a(P<0.01)、calb2(P<0.05)基因的表达均显著下降。结论:亚砷酸钠能够诱导鸡胚发育异常,其作用可能是通过降低基因组DNA整体甲基化水平实现。补充甲基供体胆碱不能拮抗其致畸效应。